关键词： β地中海贫血   miR-144/451   Nrf2  

摘要： 目的:β地中海贫血(β-Thalassemia,BT)是一种常见的单基因遗传性疾病,随着发病率的增加,其已成为“全球疾病负担”。由于β珠蛋白基因突变引起β珠蛋白肽链合成减少或缺如,造成α珠蛋白肽链相对过剩,进而沉淀在红细胞膜上,导致红细胞前体细胞凋亡和无效红细胞生成(Ineffective erythropoiesis,IE),引起严重的溶血性贫血、脾脏肿大,儿童患者发育迟缓、生长阻滞。贫血严重的患者需要长期输注红细胞,生活质量差,经济负担重。目前治疗BT的方法如输血、祛铁、脾切除、诱导γ珠蛋白生成、造血干细胞移植和基因治疗等,这些治疗方法均存在一定的局限性。长期输血导致患者体内铁负荷增加,过多的铁沉积在心、肝等器官,引起脏器功能衰竭;祛铁药物不仅价格昂贵,还会引起如粒细胞减少、皮肤感染和过敏、视力和听力障碍等不良反应;脾切除会增加静脉血栓的风险等;而诱导γ珠蛋白生成的药物如羟基脲等的使用亦不能降低患者的输血需求;造血干细胞移植存在着费用高、配型困难及移植物排斥反应、移植物抗宿主病和其他治疗相关毒性反应等问题。基因治疗被认为是BT患者的替代疗法,但这种方法涉及的技术需要复杂、昂贵的资源,而且载体整合在基因组中有造成遗传毒性的可能。因此,探索新的、安全有效的治疗方法,对BT患者、家庭乃至整个社会均具有重要的科学意义。小分子RNA(microRNA,miRNA/miR)是一类长度仅为18～25个核苷酸的非编码小分子RNA,在整个生物进化过程中调控着基因表达,对于维持红系稳态亦是必不可少的。miR-144和miR-451在成熟红细胞(Redbloodcells,RBCs)中大量表达,是红细胞的保护者。当这种大量表达的miR-144/451缺失后,小鼠表现出小细胞溶血性贫血,这与红细胞对氧化应激的敏感性增加、清除活性氧的能力下降有关。急性贫血时,如5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导清除红系前体细胞、苯肼(Phenylhydrazine,PHZ)诱导的红细胞破坏及急性失血,从miR-144/451敲除鼠的胚胎肝(Fetal liver,FL)、骨髓(Bone marrow,BM)和脾脏(Spleen,SP)分离出的红细胞在恢复过程中表现出更多的细胞死亡。因此,miRNAs有可能成为许多重大疾病尤其是红细胞疾病诊断和治疗的工具。方法:我们以小鼠为模型,对miRNAs调控红细胞发育进行了广泛的研究,积累了大量资料。在正常和应激造血过程中,miR-144/451起到抗氧化、抗凋亡及促分化的作用。课题组前期研究工作发现miR-144/451在BT模型鼠(β-thalassemic mouse,Hbbth3杂合子,th3+/-)中显著升高,当th3+/-鼠体内miR-144/451表达缺失后,贫血得到改善。进而研究发现miR-144/451 缺失的th3+/-鼠(miR-144/451-/-th3+/-,mKO/th3+/-)中抗氧化基因核因子NF-E2相关因子(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)及其调控的抗氧化酶超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)表达增高。本课题在前期研究的基础上,将进一步确立这个现象并寻找分子机制。(1)实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测贫血性疾病如BT、缺铁性贫血(Iron deficiency anemia,IDA)、肿瘤相关性贫血(Cancer related anemia,CRA)、再生障碍性贫血(Aplastic anemia,AA)、骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic syndrome,MDS)及慢性失血性贫血(Chronic hemorrhagic anemia,CHA)中miR-144/451的表达情况;(2)qRT-PCR检测mKO/th3+/-鼠脾脏中miR-144/451的表达情况;组织病理学和免疫组织化学法观察mKO/th3+/-鼠脾脏结构和脾内红细胞变化;流式细胞术检测CD44和Ter119标记的小鼠骨髓和脾脏内红细胞,了解代偿性造血情况;(3)流式细胞术检测生物素化的红细胞寿命,了解miR-144/451缺失对BT红细胞存活的影响;(4)流式细胞术检测过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)处理前后红细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体超氧化物歧化酶指示剂(Mitochondrial superoxide indicator,MitSOX)标记的线粒体内ROS水平;分光光度计检测血清铁(Serum iron,SI);酶联免疫吸附测定法(Enzyme-L

关键词： 地中海贫血   分子诊断   SNPscanTM   CNVplexTM   临床验证   Hb Agrinio   HbH病  

摘要： 研究背景与目的地中海贫血（thalassemia简称地贫）是一组由于α/β珠蛋白基因簇缺失或者突变导致造血障碍从而引起小细胞低色素性的溶血性贫血。地中海贫血通常为常染色体隐性遗传病,男女双方均携带了同型珠蛋白（同为α或者同为β）基因的点突变或者缺失突变,则该夫妇对为高风险夫妇对,有可能生出Hb Bart's水肿胎、Hb H病以及中间型或重型β地中海贫血患儿。目前地中海贫血的治疗是规律输血配合铁螯合剂进行去铁治疗,对家庭、对社会来说都是沉重的经济负担以及巨大的精神压力。针对地中海贫血而言,预防的重要性胜于治疗。开展人群普查以及遗传咨询,全面普及婚前以及产前检查,以预防Hb Bart's水肿胎的发生以及中间型或重型β地中海贫血患儿的出生,是我国公共卫生的重要组成部分。根据最新的 HbVar 数据（http://***/cgi-bin/hbvar）,全世界已经发现超过500种与地贫相关的突变类型。其中中国人群中最常见的α缺失有（--SEA/）,此外还有（-α3.7/）、（-α4.2/）、（--THAI/）、（--FIL/）、（--11.1kb/）和（-α27.6kb/）等,最常见的α点突变有αQSα/、αCSα/、αWSα/,此外还有αCD31α和αCD78α/等。中国人群中已报道过的β地中海贫血点突变至少有54种,其中以下这八种突变大约占全部突变类型93%以上:HBB:c.126129delCTTT,HBB:c.52A>T,HBB:c.316-197C>T,HBB:c.-78A>G,HBB:c.216217insA,HBB:c.79G>A,HBB:c.92+1G>T和HBB:c.-79A>G,此外还有HBB:c.-123A>T、HBB:c.-140C>T和HBB:c.162delT等;中国人群中已报道过的缺失型β-地中海贫血有5种突变类型,包括Chinese缺失、东南亚型HPFH缺失、Taiwanese缺失、Gantonese 缺失和 Yunnanese 缺失。地中海贫血点突变的基因检测方法目前主要是PCR-RDB、Sanger测序、荧光PCR熔炼曲线法、HPLC、HRM和ARMS-PCR等,缺失型地中海贫血的突变检测方法主要有Southern blot、Gap-PCR、MLPA、荧光定量PCR和array-CGH等。它们或操作繁琐,或检测通量低,虽可以应用于常规临床检测,但不适用于大人群的基因筛查。近年热门的二代测序以其高准确性、高灵敏性以及高通量可以应用于大人群的基因筛查,但是费用昂贵,难以大范围推广应用。建立简单快捷、准确可靠、经济实用的高通量检测技术,既满足地中海贫血大规模人群筛查的公共卫生需要,也是目前地贫基因诊断技术创新的新挑战。本研究的目标即建立一种基于同一检测平台的地贫分子诊断新途径与新方法,准确可靠、简单实用、高通量、低成本,适合当前地贫大规模人群筛查和常规分子诊断。研究方法与内容根据地贫的发病机制及分子基础,针对中国人群中已报道（截止本研究启动时）的α/β地贫点突变以及缺失突变,本研究具体实施了以下研究方案。***的地中海贫血点突变检测技术--利用连接酶的高特异性识别SNP位点的等位基因,在连接探针末端加入长度不同的非特异性序列,然后通过连接酶的连接反应获得不同位点所对应的不同长度的连接产物,接着利用带有荧光标记的通用引物把连接产物作为模板再进行PCR反应,把连接产物扩增出出来,接下来进行毛细管电泳,使不同荧光标记的不同序列分离出来,最后对电泳图谱进行分析以达到对不同SNP位点的基因型分型的目的。***的地中海贫血缺失突变检测技术--利用连接酶的高特异性连接反应使目的片段通过杂交、连接,从而在连接探针末端引入长度不同的非特异性序列以及利用连接酶的特异性连接反应获得不同位点所对应的长度各异的连接产物,再通过带有不同标记荧光的通用引物通过PCR反应将连接产物进行扩增,然后把PCR产物上测序仪跑毛细管电泳从而把不同长度的片段分离出来,最后对毛细管电泳图谱进行分析读取各个位点的峰值,通过计算各个目标区峰相对参照峰的比值,算出待检区域的拷贝数。3.诊断方法初步评价。为当前地贫大规模人群筛查提供简单实用的分子诊断方法,是本研究的目标之一,为初步评价新诊断方法用于地贫人群筛查的实用性与可行性,本研究抽取100份婚前/产前检查标本,应用新诊断方法及gap-PCR、Sanger测序同时进行检测,对检测结果进行比较。4.诊断方法的大样本盲法分析评价。准备了 1747份表型资料齐全、已采用gap-PCR、RDB、Sanger测序等方法进行地贫分子诊断的待检样本,将这些样本进行盲法编号后,应用新诊断方法进行检测分析;然后对比分析相对应的基因检测结果,对于结果不相符的标本,再用gap-

关键词： 胎儿游离DNA   锚定多重PCR   二代测序   无创性产前诊断   β-地中海贫血  

摘要： 目的探索β-地中海贫血的无创性产前检测技术,利用孕妇血浆胎儿游离DNA和父亲外周血开发一种对胎儿进行非侵入性产前诊断的临床应用研究。进一步探讨孕妇血浆胎儿游离DNA对胎儿β-地中海贫血非侵入性产前诊断的临床应用价值。方法从海南医学院第一附属医院产前诊断中心就诊的孕妇中,收集了10例夫妇双方携带非同型的β-地贫突变基因的志愿者家系,经孕妇和她的丈夫双方知情同意后签署知情同意书。在妊娠17周至28周时经腹穿刺羊膜腔抽取羊水这一常规的有创性产前检测的方法,应用反向斑点杂交技术检测出羊水细胞的β-地中海贫血基因型,判断有无携带父源性β-地中海贫血突变基因,将此作为金标准;采用乙二胺四乙酸二钾采血管采集孕妇静脉血10ml,同时采集丈夫静脉血2ml,提取孕妇血浆胎儿游离DNA及夫妇双方DNA,应用锚定多重PCR联合二代测序(高通量测序)技术,经过对比计算得出孕妇血浆胎儿游离DNA中是否存在父源性β-地中海贫血突变基因,将其与上述金标准进行对比分析,比较两者的一致性,从而验证应用锚定多重PCR联合二代测序法在孕妇血浆胎儿游离DNA中无创性产前检测胎儿β-地中海贫血的准确性和稳定性。结果1、在10例夫妇非同型β-地中海贫血的高危家系的孕妇血浆胎儿游离DNA中应用锚定多重PCR联合二代测序法经对比计算得出,4个β-地中海贫血高危家系的胎儿存在父源性β-地中海贫血突变基因,其余6个β-地中海贫血高危家系的胎儿不存在父源性β-地中海贫血突变基因。2、存在父源性β-地中海贫血突变基因的4个胎儿,其羊水细胞的β-地中海贫血基因型均遗传了来自其父亲的β-地中海贫血的突变基因;而其余6个胎儿不存在父源性β-地中海贫血突变基因的胎儿,其羊水细胞β-地中海贫血基因型中均没有遗传来自其父亲的β-地中海贫血的突变基因。结论1、应用锚定多重PCR联合二代测序法这一无创性产前检测技术,经对比计算分析后得出胎儿游离DNA中是否存在父源性β-地中海贫血的突变基因,其判断与运用反向斑点杂交技术检测羊水细胞的β-地中海贫血父系遗传结果相一致;2、锚定多重PCR联合二代测序技术是一种无创性产前检测β-地中海贫血的方法,在夫妇携带非同型的β-地中海贫血突变基因的高危家系中,可用于胎儿重型β-地中海贫血的排除。

关键词： 脊髓性肌萎缩症   基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱   拷贝数变异   定量模式   拷贝数变异   α珠蛋白基因簇   α0-地贫   二代测序  

摘要： 第一部分 基于MALDI-TOF质谱检测脊髓性肌萎缩症SMN1和SMN2基因拷贝数背景与目的:脊髓性肌萎缩症(Spinal Muscular Atrophy,SMA)是一种致死性常染色体隐性遗传性神经肌肉疾病,我国人群携带率高达1/42。开展人群筛查及高风险胎儿产前诊断以预防患儿出生,对提高中国人口素质具有重要意义。SMA的致病机制主要是运动神经元生存基因(survival motor neuron gene,SMN1)突变及临床症状相关的修饰基因缺失。鉴于一般SMN1基因外显子7和(或)外显子8的纯合缺失可诊断为SMA,加上SMN2基因作为修饰因子在疾病分型和严重程度上有重要作用,临床上有必要对SMN1外显子7和SMN2拷贝数的定量来区分SMA患者、携带者及正常人,并预测表型的严重程度。然而目前,针对SMA拷贝数变异的分子诊断技术在检测时间、检测成本、检测通量和灵敏度等方面都存在一定的缺陷。因此,本项目将采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)核酸分型技术平台,建立一种准确灵敏检测SMA相关基因SMN拷贝数的新方法,以满足SMA人群防控中人群筛查和分子诊断的需要。方法:本研究建立在前期检测SMN1点突变及SMA相关修饰基因缺失的MALDI-TOF MS体系的基础上,进一步优化以实现对SMN1和SMN2的拷贝数进行定量。该方法首先采用多重PCR扩增SMN基因和内参基因,PCR产物经纯化后进行单碱基延伸反应。随后将延伸产物加入基质经MALDI-TOF MS分析,根据分子量区分SMN1、SMN2和内参基因,检测SMN1和SMN2相对内参基因的质谱峰面积,再与正常样本对比,计算得到待检样本的SMN1和SMN2相对拷贝数,结合所得的SMN1和SMN2相对拷贝数及二者的比值对所测样本的SMN1/2基因进行分型。该体系建立和优化后,利用340例已知分型的样本对本方法进行准确度评价、7例7种基因型的样本用于灵敏度评价,60例SMN分别为1、2、3拷贝的样本用于重复性评价。最后选择443例样本,采用本方法和多重连接探针扩增技术平行实验进行临床应用评价。结果:本研究优选了基于Agena试剂的PCR体系以保证产物特异高效扩增,优选了针对SMN基因的双延伸引物体系以确保SMN1和SMN2的延伸效率接近,并统计得到一组校正系数对拷贝数定量结果校正以缩小SMN各分型的灰区。所建立和优化的MALDI-TOF MS体系能对SMN1和SMN2基因的拷贝数准确定量,准确度达100%,有良好的批内重复性和批间稳定性,灵敏度高(仅需14 ng gDNA)、成本低。443例临床样本评估结果显示,本方法与传统MLPA方法的检测结果一致,表明该方法在SMA诊断中具有可行性。结论:本研究基于MALDI-TOF质谱核酸分析技术整体解决了 SMA相关基因的拷贝数分析的问题,具有准确性、稳定性、高灵敏度和高通量,适用于人群大规模筛查和临床常规分子检测。同时,本研究所设计的基于质谱分析平台的多基因拷贝数分析策略,也可为多基因拷贝数变异的检测提供参考。第二部分 一个α0地中海贫血基因新缺失突变的鉴定背景与目的:α地中海贫血(α-地贫)是世界上最为常见的血红蛋白病,其分子机制主要为α-珠蛋白基因(HBA1和HBA2)的缺陷导致α珠蛋白合成减少或者缺如,从而使血红蛋白生成障碍。本研究旨在鉴定一个新的α珠蛋白基因簇大片段缺失的案例,并分析该突变对α-珠蛋白基因表达的影响。方法:先证者,男,是一个来自湖南郴州的新生儿,在新生儿疾病筛查中有疑似α-地贫的表型。通过采集先证者及其父母的新鲜血样,进行血液学表型分析。提取三人的DNA利用常规地贫检测技术(Gap-PCR、RDB、一代测序和MLPA)对α-珠蛋白基因簇和β-珠蛋白基因簇进行检测。利用靶向捕获二代测序技术分析先证者的α-珠蛋白基因簇缺失区域,并在断裂点两端设计引物,通过Gap-PCR和一代测序鉴定大片段缺失准确的断裂点位置。接着利用荧光定量PCR技术分析该突变携带者(先证者父亲)α-珠蛋白基因的mRNA水平以分析该突变对基因表达的影响。结果:血液学表型分析提示先证者可能为α-地贫携带者,而其父亲表现为轻型贫血,其母亲表型无明显异常。通过MLPA及二代测序技术发现先证者携带α-珠蛋白基因簇大片段杂合性缺失,且该突变遗传自其父亲。Gap-PCR和一代测序结果表明该缺失大小为71846 bp,5'端断裂点在chr16:188959-188970,3'端断裂点在 chr16:260805-260816(GRCh37/hg19),累及 HBZ,HBA2和HBA1基因,为α0-地贫。RNA荧光定量结果表明该突变携带者的α/β表达量低于正常人,且与其他α0-地贫携带者相当。结论:本研究通过靶向捕获二代测序技术鉴定了一例新的α-

关键词： 脐血移植   铁过载   外周血干细胞   地中海贫血  

摘要： 研究背景至今异基因造血干细胞移植仍然是治愈重型地中海贫血患者最有效的方式,但实际上仅有不到一半的患者能找到相合同胞或者无关供者。脐血干细胞具有抗原活性弱、HLA配型要求低、GVHD发生率低等特点,是干细胞的潜在来源。然而,脐血干细胞数量较少、受者移植前出现的铁过载,使得地贫脐血移植面临着低干细胞植入率与高移植死亡风险的巨大挑战。目的全相合同胞脐血联合同一新生儿的外周血、无关脐血联合亲缘单倍体外周血干细胞可增加输注细胞剂量。该策略分别对促进同胞及无关脐血干细胞在地贫患者植入的影响如何?对相关并发症的影响有何差异?本文旨在比较同胞脐血与无关脐血移植疗效以及分析影响脐血干细胞植入与造血重建的相关因素。方法选取本中心2012年1月至2019年10月首次行脐血干细胞移植76例重型地贫患儿的临床资料进行回顾性分析。随访截至2019年12月31日,中位随访时间53.5个月。同胞脐血移植采用经典NF-08-TM方案:CY+Bu+Flu+TT。无关脐血联合亲缘单倍体移植采用NF-14-TM方案,+3、+4天加入CY,+6天输注无关脐血。全相合同胞脐血输注单个核细胞数均值为8.50×10^7（2.73-20.30×10^7）,CD34+细胞数为 2.42×10^5（0.26-8.06×10^5）;无关脐血单个核细胞数为 5.90×10^7（0.77-11.35×10^7）,CD34+细胞数为1.78×10^5（0.17-4.44×10^5）;亲缘单倍体的单个核细胞数为27.70×10^8（8.80-63.18×10^8）,CD34+细胞数为 16.77×10^6（0.29-73.56×10^6）。移植前选用血清铁蛋白、肝脏和心脏MRI-T2*评估患者铁负荷。采用SPSS 20.0软件对入组对象的临床特征、长期存活率、影响脐血植入相关因素以及相关并发症等进行统计分析。结果纳入76例重型地贫患儿,同胞脐血移植45例,无关脐血联合单倍体移植且脐血植入31例,死亡2例,总体存活率OS为96.3±2.6%,无地贫存活率TFS为93.8±3.1%,移植相关死亡率为3.7%。同胞脐血组与无关脐血组的OS分别为97.8±2.2%和90.0±9.9%,P=0.586;TFS 分别为 93.3±3.7%和 92.9±6.9%,P=0.589。不同血清铁蛋白水平与干细胞植入时间、造血重建时间无明显相关。无关脐血组的肝铁浓度（MRI-T2*）与干细胞延迟植入、血小板延迟重建明显相关（P=0.013与P=0.034）。输注脐血细胞数与干细胞植入、造血重建延迟无明显相关。无关脐血组和同胞脐血组的干细胞延迟植入率与粒细胞延迟重建率无明显差异,但无关脐血组的血小板延迟重建率显著高于同胞脐血组（P=0.002）。无关脐血组的脐血植入时间短于同胞脐血组（24.32天vs 37.67天,P=0.058）,该组的血小板重建较同胞脐血组慢（59.87天vs 41.17天,P=0.061）,统计学未见显著差异。在高铁蛋白水平中,无关脐血组的血小板重建时间显著大于同胞脐血组（P=0.031）。Logistic回归分析结果显示,铁蛋白、脐血来源、脐血单个核细胞数与急性GVHD均不是影响干细胞延迟植入（＞30天）的危险因素。同胞脐血组急慢性GVHD的发生率均明显低于无关脐血组（P＜0.001与P=0.034）。不同脐血来源的移植后VOD发生率无明显差异。无关脐血组的病毒感染率显著高于同胞脐血组（P=0.008）。同胞脐血移植以单纯疱疹病毒Ⅰ型感染为主,无关脐血移植以巨细胞病毒感染多见。结论通过增加移植细胞剂量,重型地贫的全相合同胞脐血移植和无关脐血移植长期预后良好。无关脐血联合单倍体PBSC移植可潜在缩短脐血植入时间。无关脐血移植需注重GVHD与巨细胞病毒感染的防治。铁过载可能影响脐血干细胞植入与造血恢复。

关键词： 缺铁性贫血   地中海贫血   血液检测  

摘要： 目的:血液检测结果是患者贫血病症的诊断依据,本实验将探究血液检测在临床治疗上的应用。方法:选取健康者和贫血患者为研究对象,分别进行血液检测,比较检测结果的各项指标水平,帮助医护人员判断患者是否有贫血症状和贫血程度的轻重。结果:贫血患者血液检测中各项指标均低于健康者的血液检测指标水平。结论:血液检测结果的各项指标可以描述患者的贫血症状和程度,帮助医生制定精准的治疗手段。

关键词： 地中海贫血   -α3.7/αα   HKαα   巢式PCR   MLPA  

摘要： 目的:地中海贫血(简称“地贫”)是一种全球常见的常染色体单基因遗传病,不同基因型临床表现可不相同。轻型地贫可为小细胞低色素轻度贫血,中间型及重型地贫可致中、重度溶血性贫血,还可伴有黄疸、肝脾肿大、发育迟缓等表现。重型地贫患儿甚至可于出生前或出生后死亡。目前仅可通过造血干细胞移植或基因编辑治愈,但配型困难,且价格昂贵,临床上暂不能普遍运用。在我国,地贫好发于长江沿岸及以南流域,如广西、广东、海南、云南、福建、四川、重庆等地区,各地区地贫携带率差异较大,为3.3%-24.07%不等。不同地区、不同人群存在不同的地贫基因突变谱。目前运用间隙-聚合酶链式反应(gap-polymerase chain reaction,Gap-PCR)技术及反向斑点杂交技术(reverse dot blot,RDB)可检测24种常见突变,但仍余有3%的风险还存在其他的突变未能检测到。香港型地贫(HongKongαα,HKαα)则是一种未在检测范围内较为罕见的α-地贫,即同一染色体上同时包含了-α3.7及αααanti-4.2。由于目前常规检测试剂盒中缺乏对αααanti-4.2三联体的检测,所以-α3.7/αααanti-4.2及HKαα地贫携带者常被误诊为-α3.7/αα。当-α3.7/αα的配偶为--SEA/αα时,他们的后代有1/4概率为-α3.7/--SEA,为血红蛋白H病(Hemoglobin H,Hb H)。Hb H病临床表现不一,可为小细胞低色素性轻度贫血至重度贫血。严重者发育迟缓、脾大明显,可因合并感染而导致病情加重。因此孕妇需进行产前诊断明确基因型。而HKαα既不属于-α3.7缺失型,亦不属于αααanti-4.2三联体,HKαα/--SEA主要表现为轻型(α-地贫,将HKαα诊断为-α3.7缺失型地贫基因携带者,当其配偶为--SEA/ααα时,则因需明确诊断而进行不必要的有创检查,增加了流产风险及经济负担,给孕妇带来了精神压力。而当患者基因型为-α3.7/αααati-4.2时,首先,无论其配偶是否为地贫患者,地贫基因均会遗传给下一代。再者,当合并β-地贫时,因αααati-4.2可使α-珠蛋白链的合成增加而加重β-地贫的表型。因前两者的临床表现、遗传咨询和产前诊断与-α3.7/αα不同,所以检出αααanti-4.2及HKαα基因型迫在眉睫。而目前HKαα的经典检测方法——巢式PCR,无法区分HKαα/αα、HKαα/-α3.7、HKαα/αααanti-4.2、HKαα/αααanti-3.7、HKαα/HKαα 等,而基因型与临床表现、遗传概率相关,故对HKαα基因型鉴定十分必要。本研究主要通过对四川地区人群进行地中海贫血基因检测,了解该地区地中海贫血基因分布情况,为临床医师提供遗传咨询和产前诊断资料。同时,建立一种鉴定-α3.7缺失型地贫基因携带者的αααanti-4.2与HKαα基因型的方法。方法:收集2017年7月至2019年10月于四川省人民医院就诊并进行地贫基因型检测样本。常规地贫基因检测采用核酸自动提取仪提取DNA,αααanti-4.2及HKαα基因检测采用康为世纪及Qiαgen DNA提取试剂盒提取DNA;Gαp-PCR及RDB技术检测24种常见地贫突变;采用Primer 3对HKαα基因检测所需引物进行设计,由上海生工生物有限公司合成引物;对筛查结果为-α3.7缺失型地贫基因携带者进行αααanti-4.2基因分析,αααanti-4.2阳性者采用巢式PCR及多重连接探针依赖扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术进行 HKαα 基因型检测。采用统计描述的方法描述常规地贫基因型分布、巢式PCR及MLPA技术检测 αααanti-4.2 及 HKαα 结果。结果:1.5488例四川受检者中,检出地贫携带者和患者共2544例,地贫基因型38种。其中,α-地贫1190例(46.78%,1190/2544)、β-地贫1286例(50.55%,1286/2544)、α复合β地贫 68 例(2.67%,68/2544)。其中,α-珠蛋白基因突变9种,以--SEA突变最为常见,占所有α-珠蛋白基因突变的69.77%;β-珠蛋白基因突变 13 种,以 CD17(A>T)、CD41-42(-TTCT)、IVS-2-654(C>T)突变等位基因为主,依次占所有β-珠蛋白基因突变的32.92%、28.88%、24.12%。1190 例 α-地贫中,检出 19 种基因型。以--SEA/ααα为主,占α-地贫2/3以上,为71.76%。1286例β-地贫中,检出18种基因型。以βcd17/βN(33.28%)、βd41-42/βN(28.46%)、βIVS-

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   血常规  

摘要： 目的对血常规在地中海贫血、缺铁性贫血诊断之中的价值进行探究分析。方法选取2017年6月～2018年6月于我院接受血常规检查者66例作为研究对象,将其均分为对照组(健康人群)、试验组A(缺铁性贫血)与试验组B(地中海贫血),各22例。对三组研究对象的红细胞分布宽度进行对比分析。结果试验组B与对照组的红细胞分布宽度均处于正常参考范围之内,试验组A红细胞分布宽度超出正常参考范围,试验组A与试验组B在相似率方面,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在地中海贫血以及缺铁性贫血之中应用血常规检查,能够进一步确诊,且兼具安全、高效等突出特点,可于临床进行进一步推广应用。

关键词： 地中海贫血   基因诊断   育龄人群   少数民族  

摘要： 目的分析黔南州育龄人群地中海贫血（简称地贫）基因携带状况,以便为地贫筛查规划提供参考依据。方法对2015-2019年黔南州23 987名育龄人群采用红细胞指标检测（MCV和MCH）和血红蛋白电泳（Hb A2）分析进行地贫筛查,初筛阳性者行基因检测确诊,运用统计学方法分析育龄人群基因检出情况。结果 23 987名育龄人群中,地贫基因阳性1 037例,检出率4.32%（1 037/23 987）。其中男性地贫基因检出率3.80%（376/9 893）,女性为4.69%（661/14 094）。女性检出率高于男性（χ;=11.114,P=0.015）;汉族、布依族、苗族、水族、壮族、侗族、毛南族、土家族、瑶族、仡佬族、彝族、回族、其他民族地贫基因检出率分别为1.66%、5.95%、5.18%、7.24%、5.12%、2.95%、6.88%、2.43%、5.14%、1.34%、1.89%、2.81%、2.56%;黔南州地贫基因检出率排前三位分别是长顺县（4.69%）、惠水县（4.61%）和三都县（4.51%）,基因型主要以--SEA/αα、βCD41-42/βN、βCD17/βN为主,占60.95%。结论黔南州育龄人群地中海贫血基因携带率较高,具有性别、民族和县份分布特点。

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   ROC曲线   红细胞参数  

摘要： 在常见儿童贫血性疾病鉴别诊断中,通过方便快捷的血液学指标能对地中海贫血患者和缺铁性贫血患者进行有效的初筛。