关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   血液检验   鉴别诊断   临床价值  

摘要： 目的:探讨在鉴别诊断贫血中血液检验的临床价值。方法:时间为2019年1月至2020年2月,对象为贫血患者100例,根据贫血类型分为两组,其中地中海贫血40例为地贫组,缺铁性贫血60例为缺铁组,另选择健康体检者50例作为参照组。所有对象均接受血液检验。比较三组对象血液中MCV、RBC/MCV、Hb、RBC、MCH、RDW等指标水平。结果:对比三组血液中MCV、RBC/MCV、Hb、RBC、MCH、RDW等指标水平发现,地贫组Hb、RBC水平高于缺铁组,RDW水平低于缺铁组和参照组(P<0.05);地贫组RBC/MCV水平高于缺铁组和参照组(P<0.05);参照组MCV、MCH水平高于缺铁组和地贫组(P<0.05)。结论:在贫血鉴别诊断中,血液检验的效果较好,平均红细胞体积(MCV)、红细胞血红蛋白含量(Hb)、红细胞计数(RBC)、平均红细胞体积(MCH)、红细胞体积分布宽度(RDW)、RBC/MCV等指标均可作为诊断标准,且可有效鉴别和诊断贫血类型,值得推广和研究。

关键词： 地中海贫血   无创产前诊断   脱落滋养层细胞   单细胞分析   内质网染色  

摘要： 研究目的：　　母体产道中的脱落胎儿细胞由于含有完整的细胞结构以及胎儿的整套基因组信息，而在非整倍体疾病、染色体微缺失、单基因性疾病以及新生儿溶血病等。然而，脱落胎儿细胞的分离与遗传性疾病的无创产前诊断中发挥着重要的作用鉴定仍缺乏快速、有效的检测方法:此外，目前尚缺乏对这些稀有细胞进行充分的胎源性验证:另外，目前这些稀有胎儿细胞在单基因性疾病的产前诊断应用仍需探究。因此，在本课题中，我们将建立一种快速、简便、有效的方法，用于脱落滋养层细胞的鉴定与分离:同时，我们将单细胞分离的胎儿细胞进行深入的、多位点的胎源性验证:在第三部分中，我们还将这些稀有细胞运用于地中海贫血的产前诊断中，并通过高通量测序分析，从而评估其在地中海贫血等单基因性疾病中的应用。　　研究方法：　　1.通过ddPCR与qPCR评估脱落胎儿细胞的数目:通过显微镜荧光定流式细胞术等评估滋养层细胞与母体细胞差异，建立脱落滋养层细胞新型鉴定方法(内质网染色结合线性判别分析，ER-LDA);评估ER-LDA在细胞系模型与临床标本中的检测效果。　　2.通过单细胞分离，获取滋养层单细胞:通过免疫荧光分析脱落滋养层细(tluorescence in situ hybridization,胞的蛋白标志物表达情况:通过荧光原位杂交FlSH)、短串联重复序列(short tandem repeat,STR)与单核昔酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分析，验证这些稀有细胞的胎源性　　3.收集多个α地中海贫血与β地中海贫血孕妇病例样本，利用稀有滋养层细摘要胞对相应的突变位点进行检测与分析;qPCR检测母体DNA与稀有滋养层细胞RHD分型，评估其用于新生儿溶血病产前检测的可能性:稀有滋养层细胞进行全外显子测序(whole exome sequencing,WES)分析，评估其在检测其他单基因性疾病致病位点中的可行性。　　研究结果：　　1.脱落滋养层细胞个数约为72-5150个:内质网染色后滋养层细胞的荧光强度约为鳞状上皮细胞的3.13±1.13倍，为白细胞的2.64±0.73倍;通过ER-LDA分析，可在细胞模型中获取敏感性为99.0％、特异性为98.75％、准确性为98.83％的滋养层细胞的鉴别能力;另外，通过ER-LDA获取的单细胞基因组扩增覆盖度良好。　　2.通过ER-LDA分离临床标本中的滋养层细胞具有多个共同特征:均为HLA-G表达阳性或?-hCG阳性;FISH以及SRY-PCR检测候选男胎细胞可观察到Y染色体阳性信号;19个STR与22个SNP位点分析表明这些稀有细胞为胎儿来源性。　　3.稀有胎儿细胞可成功用于--SEA地中海贫血、-α4.2地中海贫血、多种β地中海贫血类型的突变检测，其检测结果与有创穿刺检测结果一致:通过稀有胎儿细胞RHD基因分型推测的RHD型别与血清型结果一致;稀有滋养层细胞WES分析可获取大量与疾病相关的变异位点，表明其可用于其他单基因性疾病突变位点的筛查与检测。　　研究结论：　　我们成功地建立了一种新的、快速、有效的滋养层细胞鉴定方法，通过单细胞分离获取的稀有滋养层细胞具有完整的胎儿基因组，可用于多种地中海贫血亚型的产前诊断、RHD基因分型以及其他单基因性疾病的产前诊断。

关键词： 重型β地中海贫血   造血干细胞移植   铁过载   核磁共振T2*   血清铁蛋白  

摘要： 目的:探索心、肝铁MRI的T2*水平是否与重型β地中海贫血造血干细胞移植效果及相关并发症有关,为临床应用提供参考。方法:对34例年龄在2～14岁首次行HSCT治疗的重型β地中海贫血的患儿进行移植前心铁、肝铁MRI检测,同时记录移植前的血清铁蛋白(SF)、肝功能、凝血功能、心肌酶、肌钙蛋白I、射血分数(EF)、肝脏大小结果,并监测移植后造血重建时间、死亡率、嵌合率、移植后常见并发症(如移植物抗宿主病、血小板减少症、感染、脓毒症等)的发病情况。最后,对上述因素进行相关性分析。结果:1.肝铁过载共33例,其中重度占22例(约67%);心铁过载共15例,其中重度占7例(约47%)。2.心铁、肝铁MRI T2*值与SF均无显著相关性(分别为r=-0.210,P=0.234和r=-0.059,P=0.741)。3.研究中未发现移植前心脏、肝脏功能异常病例,心铁MRI T2*值与EF无显著相关性(r=-0.210,P=0.234)。4.心铁、肝铁MRI T2*值及SF均与中性粒细胞植入时间无显著相关性(分别为r=0.026,P=0.884;r=-0.026,P=0.883和r=-0.001,P=0.994)。5.心铁、肝铁MRI T2*值及SF均与血小板植入时间无显著相关性(分别为r=-0.285,P=0.103;r=0.096,P=0.588和r=-0.018,P=0.919)。6.脓毒症发病率与心铁MRI T2*值呈显著负相关(r=-0.392,P=0.022),与SF呈显著正相关(r=0.402,P=0.018),血小板减少症发病率与SF呈显著正相关(r=0.370,P=0.031);MRI T2*值、SF与其余并发症发病率(如移植物抗宿主病、嵌合率下降等)无显著相关性。7.死亡病例6例,原因为严重GVHD(3例)、严重感染(2例)和弥漫性肺泡出血症(1例),生存分布差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论:1.心、肝铁过载程度不均衡,肝铁过载较心铁过载发生率高,且程度较重;2.心铁、肝铁MRI检测与SF联合评估铁过载情况更全面、有效;3.心、肝铁沉着程度与心脏、肝脏功能受损程度不成比例正相关;4.铁过载是儿童重型β地中海贫血HSCT的危险因素,主要以增加严重感染风险、降低术后造血稳定性为主;5.心铁、肝铁MRI的单项评估结果不宜作为是否可进行HSCT的硬性标准。

关键词： 地中海贫血   干细胞移植   单倍体   预处理   并发症   预后  

摘要： 目的:建立以父母为供体的单倍体造血干细胞移植治疗重型地中海贫血的新的治疗模式,分析新移植模式临床应用的有效性和安全性。方法:收集2013年9月1日至2020年2月1日间于我院完成的以父母为供体的单倍体造血干细胞移植治疗地中海贫血16例,采用CTX+Bu+Flu+ATG组成的清髓性预处理方案,移植物为G-CSF动员后的外周血和骨髓造血干细胞,GVHD防治方案为Cs A+MMF+短程MTX和MSC,对造血重建情况、移植相关并发症,GVHD发生率,长期生存情况进行分析。结果:共纳入16例重型地中海贫血患者,中位年龄6岁（范围:2岁-9岁）。供者均为父母来源单倍体供者,其中父亲8人,母亲8人,年龄为30-40岁间,HLA相合情况5/10相合3人,6/10相合2人,7/10相合2人,8/10相合1人,9/10相合1人,6/12相合1人,7/12相合2人,8/12相合2人,10/12相合2人。中位CD34+细胞数为8.89×10～6/kg（范围:7.57×10～6/kg-20.54×10～6/kg）。14名患者移植后成功植入,中位粒细胞植入时间为12.5d（9d-22d）,中位血小板植入时间为21d（12d-37d）;2例出现原发性植入失败,移植成功率87.5%,无移植相关的死亡。8名患者移植后发生aGVHD（57.14%）,其中II-IVaGVHD 5例（35.7%）,III-IV度aGVHD 2例（14.3%）。4名患者发生cGVHD（33.33%）,其中3名为局限型皮肤累及（25.00%）,1名为广泛型（8.33%）。移植后诊断CMV血症者5例（31.25%）,经抢先抗病毒治疗后恢复,未发现CMV靶器官受累的证据。移植后EB病毒血症者8例（50%）,其中1例出现淋巴细胞增殖性疾病。未发现侵袭性真菌感染病例。移植后2级及以上口腔粘膜炎8例（50%）。中位随访时间为2.25年（范围:0.09年-6.42年）,16例随访者中有14例存活,2例死亡,总生存率87.5%,长期无地贫生存率75%。结论:本文建立了新的以父母为供体的单倍体移植模式,新方案供体来源可靠,植入成功率高,移植后严重GVHD和感染等并发症不高于同胞全相合移植,有望成为治疗儿童地贫的新方法。间充质干细胞的使用可促进干细胞植入并减少GVHD的发生。干细胞移植后EBV,CMV病毒激活是常见的现象,STR-PCR的监测嵌合率的变化对于免疫抑制剂调整有指导意义。

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   平均红细胞体积   平均红细胞含量  

摘要： 目的探讨红细胞体积(MCV)与红细胞含量(MCH)联合检测在地中海贫血与缺铁性贫血鉴别诊断中的应用价值。方法回顾性分析我院2017年6月～2019年8月收治的74例贫血患者的临床资料,将确诊为地中海贫血的37例患者设为A组,确诊为缺铁性贫血的37例患者设为B组,另选取同期我院37例健康体检者设为C组。测定并比较三组MCV及MCH水平,以血涂片形态检查结果为金标准,比较单项检测与联合检测鉴别诊断地中海贫血与缺铁性贫血的价值。结果三组MCV与MCH水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);C组MCV与MCH水平高于A组、B组,差异有统计学意义(P<0.05),B组MCV与MCH水平低于A组,差异有统计学意义(P<0.05);MCV鉴别诊断两病的准确度为91.89%,MCH检测准确度为93.24%,联合检测诊断两病的准确度为97.30%。联合检测的准确度略高于MCV及MCH单项检测,但差异无统计学意义(P<0.05)。结论 MCV与MCH联合检验的诊断准确度较单项检验略高,在鉴别诊断地中海贫血与缺铁性贫血中推荐使用联合检测的方式。

关键词： 重型β-地中海贫血   脑组织MRI T2*   神经心理行为  

摘要： 目的:铁过载导致器官功能障碍是重型β-地中海贫血(β-TM)患者常见的临床问题。本研究应用MRI T2*技术评估β-TM患者脑组织(尾状核头部、背侧丘脑、豆状核、半卵圆中心)铁含量,同时对符合年龄要求的患儿进行神经心理行为检查,探讨β-TM患儿脑组织铁含量与神经心理行为的关系。方法:选取深圳市第二人民医院儿科收治住院的长期规律输血的β-TM患者共42例,收集年龄、性别、血清铁蛋白、首次输血年龄、祛铁方式等临床资料,于2019年1月至2020年1月应用MRI T2*检测患者双侧尾状核头部、背侧丘脑、豆状核、半卵圆中心等脑组织T2*值,并对16岁以下患儿进行儿童韦氏智力测验(WISC)、Conners问卷(父母版)、儿童数字划消注意力测试(DCT)、儿童自我意识测试等神经心理行为评估,分析β-TM患儿脑组织铁含量对神经心理行为的影响。结果:1.β-TM患者脑组织中不同部位T2*值比较不同部位脑组织双侧均值T2*值由低到高依次为半卵圆中心、豆状核、背侧丘脑、尾状核头部,除半卵圆中心与豆状核T2*值无统计学差异,其余脑组织之间T2*值差异均有统计学意义;单因素分析时年龄与半卵圆中心、背侧丘脑、豆状核T2*值呈负相关(r=-0.432、-0.468、-0.517,P<0.05),与尾状核T2*值的相关性无统计学意义;多因素分析时年龄、性别、血清铁蛋白、首次输血年龄、祛铁方式等与脑组织中不同部位T2*值的相关性均无统计学意义(P>0.05)。2.β-TM患儿神经心理行为测试结果患儿总智商95±7.93分,其中言语商(9.77±2.97)高于操作商(6.70±2.07)(P<0.05);DCT平均58.5±10.6分,失误率0.50±0.23;自我意识测评正常4例,异常18例,异常占81.82%,平均分54.78±11.7分;Conners评分均正常。3.β-TM患儿不同部位脑组织T2*值与神经心理行为的相关性β-TM患儿自我意识与半卵圆中心T2*值有关,自我意识异常组的T2*值低于正常组的T2*值(t=4.10,P<0.05),与其余脑组织T2*值的相关性无统计学意义;智商、注意力失误率与各部位脑组织T2*值的相关性均无统计学意义。4.β-TM患儿神经心理行为多因素分析年龄、性别、SF、首次输血年龄、祛铁方式等与智商、注意力失误率、自我意识测试等多因素分析,注意力失误率与年龄呈负相关(r=-5.849;P<0.001),其余均无统计学意义。结论:1.本研究结果显示β-TM患者脑组织铁含量由高到低依次为半卵圆中心>豆状核>背侧丘脑>尾状核头部,提示β-TM患者深部白质铁含量明显高于深部核团。2.β-TM患儿存在神经心理行为异常,表现为注意力欠佳、自我意识异常。3.β-TM患儿半卵圆中心T2*与自我意识结果有关,提示β-TM患儿半卵圆中心铁含量过多使其功能受损,从而影响患儿情感,出现自我意识异常。

关键词： 地中海贫血   地贫筛查   基因携带者   重要性和必要性  

摘要： 我们通常所说的地中海贫血,它的另一种称呼为海洋性贫血,在我国南方地区是这种疾病的高发地区,也是需要重点防治的地区,而在北方地区这种疾病的发病率相对来说会较低一些。目前我国人群对于这种疾病的认识仍然存在着不足,男性筛查率不足20%。地中海贫血的患者在轻度时会出现贫血症状,而在为严重的情况下,会在青少年时期就由于并发症而导致死亡。最为严重的情况就是婴儿在胎内时就出现宫内死亡,同时还会造成孕妇的一系列并发症,例如妊高症、产后大出血、胎盘过早剥落等等。所以我们有必要对于这种疾病进行更多的科普教育,要让孕期妇女提高对于地贫筛查的重视程度。

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   血常规检验   诊断  

摘要： 目的:观察血常规检验在贫血性疾病鉴别诊断中的应用价值.方法:选取我院检查诊断的贫血患者100例入组,根据贫血类型分组,分别地中海组与缺铁组,每组各50例,均开展血常规检验,对比观察两组的检出结果.结果:在Hb、MCHC、RDW、RBC、MCV等指标比较,地中海组优于缺铁组(P<0.05).结论:血常规检验可对贫血类型进行有效的鉴别诊断.

关键词： 重型β地中海贫血   继发性铁过载   铁螯合治疗   地拉罗司  

摘要： 目的:探讨地拉罗司长期治疗重型β地中海贫血继发性铁过载的有效性、安全性和依从性等问题。方法:本研究为EPIC试验在我中心(广西医科大学第一附属医院)的扩展研究,长期随访2005年4月在我中心参加EPIC试验的17例患者直至2019年12月。描述患者的临床特征,分析血清铁蛋白、脏器铁负荷情况及脏器功能的动态变化趋势,评估地拉罗司治疗过程中安全性和依从性,同时应用SF-36v2问卷评估患者的健康相关生命质量。结果:1、本研究共纳入患者17例(男10例,女7例),入组EPIC试验的年龄为7.2±3.4岁,开始地拉罗司治疗之前,所以患者均未进行规范地铁螯合治疗,基线血清铁蛋白水平为5555.80±2464.78 ng/ml,仅有2例患者血清铁蛋白<2500 ng/ml,而有8例患者血清铁蛋白>5000 ng/ml。2、经过地拉罗司治疗15年后,血清铁蛋白水平较基线水平显著下降,降低至2373.97±3793.57 ng/ml(P<0.001)。血清铁蛋白水平<2500 ng/ml的患者数量由2例(11.76%)增加至13例(76.47%),<1000 ng/ml的患者数量由0例增加至5例(29.42%)。但是,仍有4例患者(23.53%)的血清铁蛋白水平>2500 ng/ml。3、2010年所有患者首次进行心肌T2*值检测,提示有3例(17.65%)患者为重度心脏铁过载,5例(29.42%)患者为轻-中度心脏铁过载。经过10年的地拉罗司强化铁螯合治疗,心脏铁过载患者的心肌T2*值总体上较前升高,其中轻-中度心脏铁过载升高至正常范围(13.26±2.37 ms至24.87±11.93 ms),重度心脏铁过载升至轻-中度范围(6.62±2.46 ms至18.43±9.03ms)。2019年检测LVEF值仍在正常范围(67.19±4.52%,范围61%-75%),但部分患者出现了心脏结构改变,其中左室增大8例(47.06%),左房增大4例(23.53%),右房增大2例(11.76%),肺动脉高压1例(5.88%)。4、通过SF-36v2问卷评估患者健康相关生命质量,发现患者在生理功能(PF),生理职能(RP)和总体健康(GH)得分显著低于年龄相近的健康对照组(P<0.01),而在其他五个维度却无明显差别。结论:1、长期的地拉罗司铁螯合治疗可以有效改善重型β地中海贫血继发性铁过载,安全可靠,依从性好。2、地拉罗司的治疗强调早期、足量、持续、个体化,在治疗过程中要密切监测患者铁过载指标变化,及时根据患者铁过载情况、输血量及体重调整剂量,以达到最佳的铁螯合疗效。

关键词： 非典型地中海贫血   HBB基因测序   非热点突变   血红蛋白  

摘要： 目的 对206例非典型地中海贫血患者进行HBB(血红蛋白)基因测序,就非热点突变分布情况进行分析.方法 选取我院2012年1月至2019年1月收治的206例非典型地中海贫血患者,梳理临床资料,结合血红蛋白A2(HbA2)分布态势,借助PCR-反向斑点杂交法进行血红蛋白基因突变率统计,了解常见突变类型、占比情况.结果 HbA2分布处于2.5-3.5%之间的患者共92例,占比44.66%(92/206).HBB基因测序见非热点突变27例,占比29.35%(27/92).包括多个类型.结论 非典型地中海贫血HBB基因测序可发现非热点突变信息,类别较多且多与血红蛋白变异存在直接关联.