关键词： 地中海贫血   实验室诊断技术   筛查方法   基因诊断  

摘要： 地中海贫血疾病分为输血依赖型地中海贫血和非输血依赖型地中海贫血.该分类基于患者的临床严重程度,确定他们是否确实需要定期输血才能生存.地中海贫血可大致分为α或β地中海贫血,这取决于珠蛋白链的缺陷和潜在的分子缺陷,目前尚无有效的治疗方法 .目前的实验室诊断技术主要包括地中海贫血的筛查方法 和基因诊断技术.正确的实验室诊断技术对于鉴别不同形式表征的地中海贫血至关重要,对预防和治疗具有重要意义,本文就地中海贫血实验室诊断技术最新进展进行综述.

关键词： 血常规检验   鉴别诊断   地中海贫血   缺铁性贫血  

摘要： 目的研讨利用血常规检验鉴别诊断地中海贫血和缺铁性贫血的价值。方法采用回顾性分析方式,对本院2018年7月～2019年6月接受诊疗的21例地中海贫血患者临床资料进行分析,纳入A组;同期选择21例缺铁性贫血患者,纳入B组;同期选择21例普通贫血患者,纳入对照组。3组患者均开展血常规检验。结果对比对照组,A组及B组的RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC水平均显著更低,RBC/Hb、RDW水平均显著更高,差异显著(P<0.05);对比A组及B组,A组的RBC、Hb、RDW水平均明显更高,差异显著(P<0.05)。结论利用血常规检验鉴别诊断地中海贫血和缺铁性贫血,有效性较高,尤其是RBC、Hb、RDW。

关键词： 地中海贫血   血红蛋白H病   β-珠蛋白   siRNA  

摘要： 目的:血红蛋白H病（hemoglobin H disease,Hb H病）是由α-基因缺陷所导致的α-珠蛋白与β-珠蛋白失衡所引来的,减少相对过剩的β-珠蛋白的生成是治疗Hb H病的关键。我们通过研究靶向β-珠蛋白链m RNAR的siRNA对体外定向分化培养的红系细胞β-珠蛋白的调控作用,为Hb H病的基因治疗提供新的理论支持。方法:1.建立红系细胞的体外分化培养体系,我们通过磁珠分选方法分选人的CD34+造血干细胞,通过流式细胞术检测细胞分选纯度,在二阶段培养体系中对其进行扩增及向红系定向分化培养,培养过程中定期在显微镜下进行形态学观察及通过流式细胞术检测红系细胞表面标记物CD71与CD253a的表达情况。2.筛选最佳的靶向β-珠蛋白链m RNA的siRNA,将100 pmol的siRNA1、siRNA2、siRNA3通过电穿孔技术分别转染至3组细胞内作为实验组,0 pmol作为空白对照组,100 pmol siRNA-nge作为阴性对照组,RT-PCR（Real time-PCR）检测红系细胞β珠蛋白基因的表达水平,筛选出对β-珠蛋白基因表达下调作用最佳的组。3.筛选siRNA最佳剂量,将0 pmol、50 pmol、100 pmol、150 pmol、200 pmol的最佳siRNA序列别作用于红系细胞,利用RT-PCR检测红系细胞β-珠蛋白基因的表达水平,筛选出最佳剂量,通过Western bloting实验检测最佳siRNA序列对β-珠蛋白的调控作用。并通过流式细胞术检测siRNA对细胞的毒性。4.将筛选出来的最佳siRNA序列以有效浓度作用于血红蛋白H病红系细胞,检测siRNA对细胞β-珠蛋白基因调控作用,比较正常红系细胞与Hb H病红系细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的水平,以及转染siRNA后这两种细胞内ROS水平的变化,并检测细胞的凋亡率,综合评估转染siRNA对Hb H病红系细胞的影响。结果:1.经磁珠分选的CD34+造血干细胞具有高纯度,在二阶段培养体系中CD34+造血干细胞逐步可分化为成熟红细胞。***2是抑制红系细胞β-珠蛋白基因表达的最佳序列（P<0.05）。3.在48小时内,不同浓度的siRNA2均可下调红系细胞β-珠蛋白基因的表达水平（P<0.05）,但对α-珠蛋白m RNA无明显调控作用（P>0.05）,高剂量组的沉默效应更显著,沉默效应持续的时间也更长,200 pmol的siRNA2在转染后96小时内均可下调人红系细胞β-珠蛋白（P<0.05）,且无明显增加细胞的凋亡率。***2对Hb H病红系细胞β-珠蛋白的m RNA有调控作用（P<0.05）。5.正常红系细胞内的ROS明显少于Hb H病红系细胞（P<0.01）,转染siRNA2后正常红系细胞内的ROS增加（P<0.01）,与之相反,Hb H病红系细胞内的ROS减少（P<0.01）。6.转染siRNA2可减轻Hb H病红系细胞的凋亡率,其中转染后72小时的早期凋亡率与总凋亡率下降有统计学意义（P<0.05）。结论:1.本研究证明靶向β-珠蛋白链RNA的siRNA对体外定向分化培养的人红系细胞β-珠蛋白有调控作用,siRNA的基因沉默效应和效应持续时间均与作用剂量有关。2.靶向性siRNA可下调Hb H病红系细胞内β-珠蛋白m RNA的表达水平并可以减少细胞内ROS的产生和细胞凋亡率,这将有助于减轻Hb H病红细胞溶血,改善临床贫血症状,可成为Hb H病的临床治疗新途径。

关键词： 轻型地中海贫血   甲状腺功能   血清铁蛋白   围产儿结局  

摘要： 目的:研究轻型地中海贫血患者的甲状腺功能状态、铁负荷状态及围产儿结局,为轻型地中海贫血孕妇妊娠期的健康状况及胎儿发育提供参考。方法:本研究回顾性收集2018年6月至2018年12月在广西医科大学第一附属医院产检的2053例孕妇临床资料,经纳入标准及排除标准,共筛选出符合条件的105例轻型地中海贫血孕妇作为研究对象,收集早、中、晚孕期测定静脉血甲状腺功能,SF并收集分娩后新生儿Apgar评分、体重相关临床资料。选取同时期241例正常孕妇为对照组,通过数据分析,了解轻型地中海贫血孕妇甲状腺功能、铁负荷状态及围产儿结局。结果:（1）孕早期TSH、FT4、FT3水平及甲状腺功能异常率地贫组与正常对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）,SF地贫组高于正常对照组且差异有统计学意义（P<0.05）。（2）孕中期TSH、FT4、FT3水平及甲状腺功能异常率地贫组与正常对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）,SF地贫组高于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）孕晚期TSH、FT4、FT3水平及甲状腺功能异常率、SF地贫组与正常对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（4）孕中期铁负荷正常孕妇（SF≥20ng/ml）TSH低于孕中期铁缺乏孕妇（SF<20ng/ml）,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。（5）二元Logistic回归分析显示年龄是孕中期发生低甲状腺素血症的危险因素（OR:1.075,CI:1.014-1.139）。（6）地贫组新生儿体重与正常对照组新生儿体重比较,差异无统计学意义（P>0.05）,地贫组新生儿Apgar评分与正常对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:（1）轻型地中海贫血不影响孕妇孕期甲状腺功能水平;年龄是妊娠中期低甲状腺素血症的危险因素。（2）轻型地中海贫血孕妇孕期血清铁蛋白在早孕、中孕期比正常孕妇升高,在晚孕期升高不明显。（3）轻型地中海贫血孕妇对新生儿的出生体重及新生儿1分钟Apgar评分无明显影响。（4）妊娠中期血清铁蛋白与TSH水平相关,铁缺乏使TSH水平升高,对FT4无明显影响。

关键词： 地中海贫血   诊断相关多肽峰   基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱  

摘要： 目的利用临床基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪Clin-Tof-II构建多肽模型,研究地中海贫血胎儿羊水的多肽质谱变化规律。方法选取2015年6月-2016年6月来深圳市龙岗区妇幼保健院进行介入性产前诊断的同型地中海贫血基因携带孕妇83例为研究对象,留取羊水标本5 mL并分组。根据α、β基因缺失情况分为轻型地中海贫血(地贫1组)50例,重型地中海贫血(地贫2组)33例,同时以50例正常羊水标本为对照组,进行多肽组学测序分析。结果通过对正常对照与地贫1和地贫2羊水多肽质谱数据分析,得到134(P<0.05)个差异多肽峰,其中显著性差异多肽峰(P<0.01)32个,极显著性差异多肽峰(P<0.001)102个。其中89号(M/Z 3239.9)和14号(M/Z 1173.9)差异峰的重现性较好。根据极显著差异多肽峰14号(M/Z 1172.4)和89号(M/Z 3239.9),建立K-近邻模型KNN和径向基函数网络RBF,为评估高危地贫胎儿提供临床价值。结论羊水多肽质谱模型能够准确区分正常对照与地中海贫血患者,但尚需更进一步研究证实。

关键词： 血常规红细胞参数检验   地中海贫血   缺铁性贫血  

摘要： 目的:利用血常规红细胞参数检验的方法对发生地中海贫血患者和缺铁性贫血患者展开鉴别诊断。方法:选取2018年1月-2019年1月到我院治疗的老年无症状心肌缺血患者60例,分为30例缺铁性贫血患者(观察组),30例地中海贫血的患者(对照组),两组患者均通过血常规红细胞参数检验,对两组患者的检验指标进行比较。结果:观察组患者的血红蛋白含量以及平均红细胞血红蛋白浓度高于对照组患者,观察组患者的红细胞计数、红细胞分布宽度、红细胞平均体积低于对照组患者,组间差异显著,且P<0.05,具有统计学意义。观察组患者的平均红细胞血红蛋白量与对照组比较差异不明显,P>0.05,不具统计学意义。结论:地中海贫血和缺铁性贫血患者通过血常规红细胞参数检验,可以得到具有明显差异的检验指标,有效鉴别地中海贫血以及缺铁性贫血。

关键词： 他克莫司   重型β-地中海贫血   治疗药物监测   群体药物代谢动力学   初始给药方案   药代动力学  

摘要： 目的：（1）探讨重型β-地中海患儿接受异基因造血干细胞移植术后使用他克莫司的标准化血药浓度影响因素，找寻他克莫司群体药物代谢动力学（Populationpharmacokinetics,PPK）模型的潜在协变量;（2）建立上述患者他克莫司静脉输注的PPK模型;（3）基于建立的他克莫司PPK模型模拟制定不同情况下目标稳态谷浓度达到5-15ng/ml的最佳给药剂量，设计初始给药方案以快速达到目标浓度。　　方法：（1）回顾性收集重型β-地中海贫血造血干细胞移植术后应用他克莫司（FK506）防治移植物抗宿主病（GVHD）的儿童患者，记录患者人口统计学资料、血常规指标、肝功能指标、肾功能指标、临床诊断、他克莫司给药方案、联合用药及血药浓度监测等信息，建立患者数据库。（2）探究静脉注射给药期间的他克莫司血药浓度影响因素，对他克莫司标准化浓度和性别、年龄、生化指标及地中海贫血相关临床特征进行单因素分析并建立多元回归方程，采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析，探寻重型β-地中海接受HSCT术后患儿他克莫司血药浓度的影响因素并筛选PPK模型的潜在协变量。（3）应用非线性混合模型（Nonlinearmixedeffectmodel,NONMEM）法进行他克莫司在重型β-地中海贫血接受HSCT术后儿童患者PPK模型的建立。以拟合优度图（Goodnessoffitplots,GOFs）、非参数自举（Bootstrap）法、可视化检验（Visualpredictivechecks,VPC）以及正态化预测分布残差图（Normalizedpredictiondistributionerror,NPDE）作为内部评估的考察标准，验证最终模型的预测性能及稳定性。以平均预测误差（MeanPredictionError，MPE），平均相对预测误差（MeanRelativePredictionError，MPE%），平均绝对误差（MeanAbsolutePredictionError，MAE）和平均相对绝对误差（MeanAbsolutePredictionError，MAE%）作为外部验证的主要评估指标。（4）运用蒙特卡洛模拟法基于本研究建立的他克莫司PPK模型模拟不同情况下目标稳态谷浓度达到5-15ng/ml的最佳给药剂量并计算相应目标获得概率（Probabilityoftargetattainment,PTA）　　结果：（1）纳入49例他克莫司静脉注射患者，共采集312个浓度点。经单因素分析造血干细胞移植术后时间（POD），总胆汁酸（TBil），谷氨酰转肽酶（GGT），总胆红素（TBA），白细胞计数（WBC），血红蛋白（HGB），血小板计数（PLT）和红细胞压积（HCT）与他克莫司标准化血药浓度存在相关性（P＜0.001），在不同性别，干细胞移植类型，铁过载情况，GVHD发生情况及高血压发生情况组中的他克莫司标准化血药浓度存在显著的组间差异（P＜0.1）。根据多元回归分析结果，建立多元回归方程：Y=1.068POD+4.25.627HCT+3.362SCR-56.439。显示POD，HCT，SCR可能作为他克莫司PPK模型的潜在协变量。（2）收集和整理42例重型β-地中海贫血接受HSCT术后接受他克莫司预防GVHD的患儿数据建立建模数据库，其中含267个浓度点;7名患儿包含43个浓度点的数据被作为外部验证数据集。本研究采用含个体间及个体内变异的一级条件评估算法（FirstOrderConditionalEstimationInteraction，FOCE+I）以估算他克莫司药动学参数，最终二室模型具有最好的拟合能力及预测性能，模型公式为CL(L/h)=5.05×(BSA/0.824)0.901×e0.115;V1(L)=4.33;Q=6.2;V2(L)=155×(1+GENDER×2.05)×e0.392。观察内部验证的拟合优度图（Goodnessoffitplot），发现最终模型的预测性能良好，预测值与实测值的相关性高。条件权重残差（Conditionweightresidues，CWRES）在X轴的±2内均匀分布，显示最终模型稳定性较好;经Bootstrap法验证模型，模型稳健率为99.6%，且95%置信区间包含参数目标值不包含0，药代动力学参数估计值的中位数与模型估算结果相近;VPC可视化验证结果显示，绝大部分实测值分布在图中5%和95%的预测区间内，显示模型的预测性能较好。NPDE最终模型的t检验P=0.024，Fisher方差检验P=0.043，Shapiro-Wilks正态分布检验P=0.561，整体校正检验P=0.072，各项P值均＞0.01，数值结果和图形结果均表明最终模型近似正态分布且最终模型的稳定性和预测性能良好。外部验证结果显示

关键词： 地中海贫血   铁过载   去铁酮   去铁胺   不良反应  

摘要： 目的:本文以2-6岁地中海贫血患儿为对象,研究和分析去铁酮治疗该年龄段患儿的疗效及安全性,为该年龄段儿童的除铁治疗方案提供参考。方法:分析2012年至2019年在广西医科大学第一附属医院就诊的中间型地中海贫血或重型β地中海贫血患儿共77例,年龄范围为2-6岁,均达到铁过载诊断标准,保持长期规律输血并使用去铁酮或去铁胺单药除铁治疗。根据除铁药物的不同分为去铁酮组(41例)和去铁胺组(36例),去铁酮组患儿接受剂量为25-75mg/kg·d的去铁酮治疗,去铁胺组患儿接受剂量为20-40mg/kg·d的去铁胺治疗。以用药期间患儿出现的症状、体征以及血常规、肝肾功能等指标判断除铁药物不良反应的发生情况。以血清铁蛋白(SF)的变化判断除铁治疗效果,除铁后SF<2000μg/L且降低幅度≥500μg/L为完全反应(CR),除铁后SF<2000μg/L但降低幅度<500μg/L为微小反应(Mi R),药物的总反应率=完全反应率+微小反应率。结果:1、除铁治疗效果:除铁治疗6个月后,去铁酮组的药物总反应率为34.1%,去铁胺组的药物总反应率为27.8%,两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。除铁治疗前血清铁蛋白越高、平均每月每公斤体重输血量越大,去铁酮的除铁效果越不理想(P<0.05)。此外,使用减低剂量(25-50mg/kg·d)的去铁酮治疗和使用常规剂量(50-75mg/kg·d)治疗的总反应率无显著性差异(P>0.05)。2、不良反应发生情况:除铁治疗6个月后,去铁酮组患儿有9.8%发生胃肠道不适、17.1%出现关节疼痛、2.4%出现丙氨酸氨基转移酶轻度升高、2.4%出现中性粒细胞减少。去铁酮药物的不良反应发生率为31.7%,与去铁胺组没有显著差别(P>0.05),且未发现新的不良反应。此外,去铁酮组中减低剂量治疗(25-50mg/kg·d)和常规剂量治疗(50-75mg/kg·d)的不良反应发生率分别为26.3%、31.8%,差异无统计学意义(P>0.05)。3、长期用药依从性:能坚持继续规律使用原除铁药物至12个月的患儿共有40例,其中去铁酮组有26例(占该组人数的63.4%),去铁胺组有14例(占该组人数的38.9%)。铁过载患儿使用去铁酮长期治疗的依从性高于去铁胺(P<0.05)。患儿对去铁酮给药方式的接受程度更高,且认为使用去铁酮治疗对其日常生活影响较小的比例更高(P<0.05)。结论:1、2-6岁的地中海贫血患儿使用去铁酮单药治疗的效果良好,疗效与单用去铁胺相当。并且低于标准用药剂量的去铁酮也可达到良好的除铁效果。2、2-6岁的地中海贫血患儿使用去铁酮药物治疗时,没有出现药品说明书以外的新的不良反应,原有不良反应的发生率和严重程度没有明显增加,所出现的不良反应与大龄儿(>6岁)相似。3、2-6岁的地中海贫血患儿对去铁酮药物具有较高的接受程度,长期用药的依从性高于去铁胺。

关键词： 地中海贫血   造血干细胞移植   急性移植物抗宿主病   CMV感染   HLA相合程度   MNC总数   移植前铁蛋白  

摘要： 目的探讨影响重型地中海贫血患儿异基因造血干细胞移植(allogenetic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后发生急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的相关危险因素。方法回顾性分析了 338例从2014年1月至2018年12月在南方医科大学南方医院儿科移植中心接受allo-HSCT的重型地中海贫血患者的临床资料,采用单因素分析及多因素分析移植后aGVHD的危险因素,纳入的因素包括:患者年龄、患者性别、供受者性别异同、供受者血型异同、移植前血清铁蛋白水平、供受者人白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)相合程度、干细胞来源、回输的单个核细胞(mononuclear cell,MNC)总数和巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染。结果 338例患者中HLA全相合移植组247例,HLA不全相合移植组(1或2个HLA位点不合)50例,半相合移植组(3个及以上HLA位点不合)41例。71例发生了 aGVHD,中位发生时间27.3(2-84)天,发生Ⅱ度aGVHD共41例(12.5%),其中Ⅱ度为22例(6.7%),Ⅲ度为11例(3.4%),Ⅳ度为8例(2.4%)。60例患者累及皮肤,28例累及肠道,4例累及肝脏,14例累及皮肤和肠道,1例累及皮肤及肝脏,3例累及皮肤、肝脏和肠道。单因素分析显示CMV感染、HLA相合程度是影响Ⅱ度及Ⅲ度aGVHD的危险因素。多因素 logistic 回归分析显示 CMV 感染(OR=3.62,95%CI=[1.80-7.25],P<0.01)为Ⅱ度aGVHD 的独立危险因素。同时CMV感染(OR=6.64,95%CI=[2.55-17.30],P<0.01)也是Ⅱ 度 aGVHD 的独立危险因素。338例患者中328例患者存活,10例患者恢复地贫状态,10例患者死亡,其中2例患者死于Ⅳ度aGVHD,采用Kaplan-Meier法对移植相关死亡率进行分析,0度aGVHD组的移植相关死亡率为1.7%,Ⅱ度aGVHD组的移植相关死亡率为12.2%,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 ***-14-TM方案可降低aGVHD的发生率,在无合适供者的情况下,半相合移植可作为治疗儿童重型地中海贫血的有效安全手段,而且在互补性移植中输注的单个核细胞数量增加与aGVHD的发生率无明显相关性。***感染是aGVHD的独立危险因素,加强预防CMV感染可能会减少aGVHD的发生及减轻严重程度。***是移植相关死亡的危险因素,加强中重度aGVHD的防治可以有效提高总体生存率。

摘要： 血常规检查在当今医院检查项目当中已经非常普遍。作为一种基础筛查手段,血常规能够以最低的价格、最快速的检测帮助人们获取更多的健康信息,以便发现身体存在的问题,并采取针对性的治疗措施。但目前血液常规检查仍然存在诸多漏洞,还需要不断完善和补充。本文就血常规检查在地中海贫血及缺铁性贫血诊断和鉴别之间的价值进行分析。