关键词： 轻型地中海贫血   孕妇   铁储备  

摘要： 目的研究轻型地中海贫血(thalassemia minor,以下简称地贫)孕妇孕晚期铁储备,旨在为临床轻型地贫孕妇铁储备监测提供理论依据。方法按标准选取本院定期产检的28～36周孕妇108例为研究对象,分为:α-轻型地贫组(A组):45例,β-轻型地贫组(B组):32例(以上两组又总称为地贫组),缺铁性贫血组(iron-deficiency anemia,IDA)(C组):31例。所有病例同期检测血红蛋白(haemoglobin,Hb)、血清铁蛋白(serum ferritin,SF)及可溶性转铁蛋白受体(soluble transferrin receptor,s-TfR),同时对各项指标进行统计学分析。结果三组相比较:SF:A组、B组、C组三组间差异有统计学意义(F=19.738,P<0.05),多重比较B组高于C组和A组(P<0.05)、C组高于A组(P=0.83)。sTfR:A组、B组、C组三组间差异有统计学意义(F=6.696,P=0.002),多重比较A组高于B组和C组(P=0.209、P<0.05)、B组高于C组(P=0.029)。Hb:A组、B组、C组三组间差异有统计学意义(F=17.469,P<0.05),多重比较C组高于A组和B组(P=0.019、P<0.05)、A组高于B组(P<0.05)。地贫组与C组相比较:SF、s-TfR:地贫组均明显高于C组(t=2.414,3.424,P=0.018,0.001),差异有统计学意义。Hb:地贫组及C组分别为:(91.36±8.43)g/L、(98.44±7.12)g/L,地贫组低于C组,差异有统计学意义(t=-4.118,P<0.05)。结论孕晚期轻型地贫患者的铁储备高于IDA,轻型地贫较IDA贫血情况更为严重,且β-轻型地贫较α-轻型地贫更易出现贫血。轻型地贫较IDA其组织缺铁程度更严重,且α-轻型地贫较β-轻型地贫程度更重。

关键词： 血红蛋白电泳   妊娠妇女   地中海贫血   筛查  

摘要： 目的:研究血红蛋白电泳对筛查妊娠妇女地中海贫血的影响.方法:选取我院于2019年9月～2019年12月收治的190例妊娠妇女作为本次研究组,选取同一时期在我院进行体检的健康妊娠妇女作为本次对照组,共380例,其中研究组患者中58例患者进行基因检测.分析所有患者检查结果.结果:所有患者均接受血红蛋白电泳诊断,结果显示,190例孕妇正常,141例孕妇α地中海贫血,49例孕妇β地中海贫血;研究组Hb、MCV以及MCH水平均低于对照组(P<0.05);研究组RDW水平高于对照组(P<0.05);在进行基因检测的58例患者中,-α3.7基因型最高,占比24.14％,-28基因型最低,占比3.45％.结论:血红蛋白电泳是妊娠妇女地中海贫血筛查的重要方式.

关键词： 轻型α-地中海贫血   轻型β-地中海贫血   宏基因组学   肠道菌群   功能基因注释  

摘要： 背景与目的:地中海贫血作为全世界高发遗传病之一,缘于人体内的α、β-珠蛋白基因突变或者缺失导致珠蛋白肽链失衡引起的溶血性贫血。地中海贫血高发于地中海沿岸国家,在我国多见于南方沿海地区。目前,对于轻型地中海贫血患者,临床上认为与常人无异,但是尚无研究表明轻型地贫孕妇和健康孕妇肠道菌群是否存在区别,肠道菌群的差异是否对轻型地贫孕妇以及胎儿产生影响。本研究通过宏基因组学测序,以明确轻型地中海贫血孕妇的肠道菌群结构,以及轻型α-地中海贫血孕妇和轻型β-地中海贫血孕妇的肠道菌群结构和功能区别;初步探讨轻型地中海贫血孕妇、轻型α-地中海贫血孕妇和轻型β-地中海贫血孕妇的相关特征性菌群及功能基因,从而对轻型地中海贫血孕妇进行微生态风险评估。方法:本研究以轻型地中海贫血孕妇和健康孕妇作为研究对象,通过基因检测将轻型地贫组分为轻型α-地贫组和轻型β-地贫组,利用高通量宏基因组学测序方法分析轻型地中海贫血孕妇的肠道菌群结构与功能基因组成,并探讨不同类型轻型地中海贫血孕妇的肠道菌群变化。结果:1.轻型地中海贫血孕妇组（简称轻型地贫孕妇组）与健康孕妇组的肠道菌群分析表明:在门水平上主要集中于拟杆菌门（Bacteroidetes）、厚壁菌门（Firmicutes）;在科水平上,轻型地贫孕妇组的微球菌科（Micrococcaceae）和棒杆菌科（Corynebacteriaceae）显著高于健康孕妇组,而脱硫弧菌科（Desulfovibrionaceae）和赤杆菌科（Erythrobacteraceae）显著低于健康孕妇组;在种水平上,轻型地贫孕妇组的粪普雷沃菌（Prevotella＿stercorea）显著高于健康孕妇组、诺氏拟杆菌（Bacteroides fragilis）和食葡糖罗斯拜瑞菌（Roseburia inulinivorans）显著低于健康孕妇组。2.轻型α-地中海贫血孕妇组（简称轻型α-地贫孕妇组）与健康孕妇组的肠道菌群分析表明:在属水平上,轻型α-地贫孕妇组嗜胆菌属（Bilophila）显著低于健康孕妇组,气球菌属（Aerococcus）、普雷沃菌属（Prevotella）、十二指肠杆菌属（Duodenibacillus）、史雷克菌属（Slackia）、志贺菌属（Shigella）和埃希菌属（Escherichia）显著高于健康孕妇组;在种水平上,轻型α-地贫孕妇组中大肠埃希菌（Escherichia coli）相对丰度显著增加,糖化梭菌（Clostridium saccharogumia）、北拟杆菌（Bacteroides nordii）相对丰度显著减少。3.轻型β-地中海贫血孕妇组（轻型β-地贫孕妇组）与健康孕妇组的肠道菌群分析表明:在属水平上,轻型β-地贫孕妇组铁皮杆菌属（Tepidibacter）相对丰度显著低于健康孕妇组,考克菌属（Kocuria）和普雷沃菌属（Prevotella）相对丰度显著高于健康孕妇组;在种水平上,轻型β-地贫孕妇组真杆菌（Eubacterium eligens）和沃氏嗜胆菌（Bilophila wadsworthia）相对丰度显著低于健康孕妇组。4.轻型地贫孕妇组和健康孕妇组肠道宏基因组注释得到的KEGG数据库通路中轻型地贫孕妇在DNA复制、错配修复及抗叶酸性代谢通路相关基因显著增加;卟啉与叶绿素代谢、苯丙素生物合成、戊糖和葡萄糖酸酯相互转化、各种次级代谢物生物合成和氰基氨基酸代谢通路相关基因显著减少;轻型α-地贫孕妇组和健康孕妇组通路主要差别集中于在复制和修复通路与抗叶酸性通路相关基因显著增加,苯丙素生物合成与生物素代谢通路相关基因显著减少;轻型β-地贫孕妇组和健康孕妇组通路主要差别集中于D-谷氨酰胺与D谷氨酸代谢、戊糖和葡萄糖酸脂相互转化。结论:1.轻型地贫孕妇组的肠道菌群生物多样性及其注释的代谢通路明显差异于健康孕妇组,提示轻型地贫对孕妇和胎儿健康以及孕产过程有潜在的负面影响。2.轻型α-地贫孕妇组与健康孕妇组的肠道菌群结构及注释的基因功能存在明显差异,推测轻型α-地贫孕妇组某些肠道菌群的缺失或增加引起某些代谢通路的改变,从而导致孕妇患病率增加并进而影响胎儿健康。3.轻型β-地贫孕妇组的肠道菌群多样性不同于健康孕妇组,变化趋势为条件致病菌增加、益生菌减少,继而改变代谢通路并对孕妇自身有消极影响,可能引起子代生理机能受损。

关键词： 地中海贫血   携带率   敏感性   特异性   ROC曲线   基因突变  

摘要： 目的:了解地中海贫血(简称地贫)在云南省德宏州、西双版纳州傣族育龄人群和盈江、勐腊0-7岁儿童中的基因携带率、突变类型及频率。报道1例新发现的α-地贫、2例新发现的β-地贫以及2例大片段缺失型β-地贫,对其血液学特征进行分析。为出生缺陷防控提供理论依据。方法:对云南省德宏州、西双版纳州1614例傣族育龄人群和盈江、勐腊590例0-7岁儿童进行血常规检测、血红蛋白电泳分析、珠蛋白基因二代测序。运用SPSS 17.0对实验结果进行数据分析,分析过程中应用独立性样本t检验、ROC曲线分析。采用二代测序技术检测了3名个体中的新发现珠蛋白基因突变,并通过珠蛋白基因的Sanger测序进行验证。运用血常规检测、血红蛋白电泳分析其血液学特征。生物软件分析突变的等电点、分子量、保守性及蛋白突变的致病性。2例大片段缺失β-地贫进行血常规检测、血红蛋白电泳分析以及珠蛋白基因的二代测序。运用MLPA技术检测新发现的缺失型β-地贫基因突变,并通过珠蛋白基因的Sanger测序进行验证。结果:1、云南省两个地区地中海贫血流行病学调查(1)德宏州和西双版纳州受检傣族育龄人群共1614例,检出地贫携带者共809例,携带率为50.13%(809/1614),其中α-地贫的携带率为33.09%(534/1614),β-地贫的携带率为10.66%(172/1614),α合并β-地贫的携带率为6.38%(103/1614)。盈江和勐腊受检0-7岁儿童共590例,检出地贫携带者共211例,携带率为35.76%(211/590),其中α-地贫的携带率为21.69%(128/1614),β-地贫的携带率为10.51%(62/590),α合并β-地贫的携带率为3.56%(103/590)。德宏州和西双版纳州受检傣族育龄人群中α-地贫最常见的基因突变类型是-α,其次是--;β-地贫最常见的基因突变类型是CD26(G>A),其次是CD17(A>T)。盈江和勐腊受检0-7岁儿童中α-地贫最常见的基因突变类型是-α,其次是--;β-地贫以CD26(G>A)最为常见,其次是CD41/42(-TTCT)。(2)对确诊的成人地贫的患者血液学参数进行比较,α-地贫中αα/--的MCV值较低,αα/αα的Hb A值较低;β-地贫中CD41/42(-TTCT)的MCV的值较低;α合并β-地贫中αα/-α合并CD26(G>A)的Hb A值较低。对确诊的0-7岁儿童地贫患者的血液学参数比较,α-地贫中αα/--的Hb A值较低。成人男性样本与儿童男性样本的血液学特征进行比较,儿童Hb低于成人,成人女性样本与儿童女性样本的血液学特征进行比较,儿童MCH低于成人。(3)成人地贫MCV的最佳截断值为84.15 fl,敏感度为81.1%,特异度为85.8%;MCH的最佳截断值为27.95 pg,敏感度为86.8%,特异度为84.3%。0-7岁儿童地贫MCV的最佳截断值为76.95 fl,敏感度为79.2%,特异度为81.4%;MCH的最佳截断值为25.36 pg,敏感度为89.8%,特异度为78.1%。(4)成人与儿童中以MCV<80 fl或MCH<27 pg或Hb A异常为筛查阳性判别标准时,特异性最低;以MCV<80 fl或MCH<27 pg和Hb A异常为筛查阳性判别标准时,地贫筛查特异性较高。2、1例新发现的α-地贫和2例新发现的β-地贫(1)家系1的先证者是一名携带HBA2:c.54del C的26岁女性,血液学参数表现为小细胞、低色素性贫血,其母亲和姐姐中未发现,并通过珠蛋白基因的Sanger测序进行验证。(2)家系2是HBB:c.373C>A杂合突变,导致氨基酸改变(Pro>Thr),其血液学表型正常。先证者的母亲也被证明是HBB:c.373C>A突变的携带者,而其父亲和弟弟是正常个体。所有样本经过Sanger测序进行验证。通过在线生物信息学分析该突变对珠蛋白功能的影响以及对蛋白质结构和功能的影响,CD124(Pro124,HBB:c.373C>A)中的Pro氨基酸在十个物种中均保守,生物软件提示HBB:c.373C>A突变是有害的。(3)家系3为HBB:c.40G>A杂合突变,CD13中的点突变c.40G>A,导致氨基酸改变(Ala>Thr),其血液学表型正常,其母亲和姐姐是正常个体。所有样本经过Sanger测序进行验证。通过在线生物信息学分析该突变对珠蛋白功能的影响以及对蛋白质结构和功能的影响,CD13(Ala13,HBB:c.40G>A)中Ala氨基酸的仅在五个物种中保守,生物软件提示HBB:c.40G>A突变为良性的。3、2例大片段缺失β-地贫(1)家系4先证者为一名6岁的女性,为中重度贫血,进行珠蛋白基因的二代测序发现存在大片段的缺失以及CD41/42(-TTCT)突变,进行MLPA

关键词： β-地贫   修饰基因   胎儿血红蛋白   核苷酸多态性位点  

摘要： 目的:分析云南人群中HBG2的rs7482144（C>T）位点、BCL11A的rs11886868（C>T）和rs766432（A>C）位点、HBS1L-MYB的rs9399137（T>C）和rs66650371（TAC-3bp）位点以及KLF1基因突变与Hb F水平的相关性;分析云南人群中HBG2的rs7482144位点,BCL11A的rs11886868和rs766432位点,HBS1L-MYB的rs9399137和rs66650371位点以及KLF1基因突变对输血依赖型和非输血依赖型β-地贫患者的临床症状的影响。方法:对4万多名在云南省第一人民医院医学遗传科,进行血红蛋白电泳检测的云南籍人群。收集Hb F高于5%的血样入组,并根据Hb F的值分为不同的组别:5%≤Hb F≤10%组、10%20%组。根据这些样本数量以1:1选择血红蛋白电泳结果在正常范围以内的血样入对照组。对2万多名地贫基因检测的云南人群,检测结果为β-地贫纯合子（β0/β0）或复合杂合子[β0/β+,β+/β+,（Aγδβ）0]或Hb E/β-地贫（βE/β0,βE/βE）基因型的血样,按照β-地贫的临床症状分为输血依赖型和非输血依赖型。提取上述血样的基因组DNA。对HBG2的rs7482144位点,BCL11A的rs11886868和rs766432位点采用PCR–RFLP方法分析其基因型;对HBS1L-MYB的rs9399137和rs66650371位点采用ARMS分析其基因型;对KLF1基因的c.13G>A,c.41T>C,c.519-525dup CGGCGCC,c.892G>C,c.895C>G,c.913+1G>A,c.1001C>G和c.1022G>A位点采用Sanger测序方法分析其基因型。结果:我们分别对5%≤Hb F≤10%组、10%20%组的五个SNP位点与Hb F水平进行相关性分析,发现rs7482144位点的P分别为1.69E--14、0.019和0.111;rs11886868位点的P分别为0.205、0.131和0.427;rs766432位点的P分别为2.35E-04、0.053和0.192;rs9399137位点的P分别为1.00E-21、2.05E-06和0.227;rs66650371位点的P分别为1.59E-22、8.47E-08和0.227。对KLF1基因采用Sanger测序发现了3种突变类型,分别是p.F182L（KLF1:T>C）的T/C杂合突变、p.R301C（KLF1:c.901 C>T）的C/T杂合突变和p.R301H（KLF1:c.902 G>A）的G/A杂合突变。我们分别对5%≤Hb F≤10%组、10%20%组的KLF1突变与Hb F水平进行相关性分析,P分别为0.003、0.005。对上述五个SNP位点的关联性分析发现rs9399137和rs66650371位点连锁不平衡。分别对输血依赖型和非输血依赖型β-地贫患者的五个SNP位点基因型差异性研究,只有非输血依赖型患者rs7482144位点的突变基因型和等位基因的P分别为1.46E-09和5.63E-07。结论:rs7482144、rs9399137、rs66650371与云南β-地贫人群的5%≤Hb F≤20%水平相关,rs766432位点与云南β-地贫人群的5%≤Hb F≤10%水平相关,而rs11886868位点的结果提示该位点与云南β-地贫人群的Hb F水平无关;我们检出云南β-地贫人群的KLF1基因的3种突变类型,分别是c.544 T>C的T/C杂合突变、c.901 C>T的C/T杂合突变和c.902 G>A的G/A杂合突变;且KLF1的这些突变与云南β-地贫人群的5%≤Hb F≤20%水平相关;rs7482144位点的突变基因型和突变等位基因可能减轻β-地贫患者的临床症状。

关键词： 重型地中海贫血   异基因造血干细胞移植   EBV感染   危险因素  

摘要： 目的:对重型地中海贫血患者造血干细胞移植(Allogeneic hematopoi-tic stem cell transplantation,Allo-HSCT)治疗后EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染的发生情况、危险因素、预后进行分析,为开展临床诊疗工作提供有效的防治策略。方法:回顾性分析2015年1月～2020年9月期间在我院行造血干细胞移植治疗的446例重型地贫患者的临床基本资料。将患者性别、年龄、是否脾切、移植前血清铁蛋白(Serum ferritin,SF)、人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)配型、供者来源、供受者性别、干细胞来源、抗胸腺细胞球蛋白(Anti-thymocyte immunoglobulin,ATG)剂量、ABO血型相合、预防移植物抗宿主病(Graft-versus-host disease,GVHD)方案、CD34+输注数量、移植后巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)感染、出血性膀胱炎、肝小静脉闭塞症(Veno-occlusive disease,VOD)、急慢性移植物抗宿主病等因素纳入研究,分析研究重型地贫患者造血干细胞移植治疗后EBV感染的发生情况、相关危险因素及预后。结果:1.446例重型地贫患者中位随访时间31(1～72)个月,共有68例发生EB病毒感染,发生率为15.2%(68/446),其中单纯EBV血症9.64%(43/446),临床诊断及确诊的PTLD总体发病率为2.91%(13/446)。EBV相关疾病总体发病率为2.69%(12/446)。移植后+100天内EB病毒感染累积发生率为70.1%,其中男41例,女27例,中位年龄6(2～16)岁。初次感染的病毒载量中位数为8.49×10～2(4.13×10～2～4.7×10～4)拷贝数/m L,初次感染发生的中位时间为移植后+63(14～567)天。***-HSCT后有EBV感染患者的总体生存率为89.7%(61/68),无EBV感染患者总体生存率为96.6%(365/378),差异有统计学意义(P<0.05),移植后无EBV感染患者生存率较高。3.单因素分析显示干细胞来源是否含脐带血、供受者血型是否相合、移植后CMV感染、慢性GVHD是移植后EB病毒感染的危险因素。多因素分析提示干细胞来源含脐带血、供受者血型不全相合、移植后CMV感染、慢性GVHD是造血干细胞移植后EB病毒感染的独立危险因素。结论:***血型不相合、干细胞来源中含脐血移植、移植后CMV感染、慢性GVHD是重型地中海贫血造血干细胞移植后EB病毒感染的独立危险因素。2.移植后EB病毒感染影响患者长期生存,密切监测、及早干预是改善预后的有效措施。

关键词： 重型β地中海贫血   异基因造血干细胞移植   免疫重建   术后并发症   混合效应模型  

摘要： 目的:构建重型β地中海贫血患者行异基因造血干细胞移植术后适应性免疫细胞重建的拟合方程及拟合曲线,预测和模拟适应性免疫细胞重建过程,探索其重建规律及影响因素。研究方法:观察指标:对象为2018年1月至12月在深圳市儿童医院进行异基因造血干细胞移植的86例重型β地中海贫血患者。采集患者基本信息和移植相关信息,选取移植后1月、3月、6月、12月、18月作为监测时间基点,进行5次测量,统计T、B细胞绝对计数结果,记录移植后1年内发生的并发症种类及具体时间。分析方法:应用SAS 9.4软件,在混合效应模型中利用生长曲线构建适应性免疫细胞重建的拟合方程;纳入患者基本信息、常见术后并发症为自变量,应用混合效应模型分析适应性免疫细胞重建的影响因素;计算对适应性免疫细胞有影响的术后并发症的累积发病率,描述其时间分布规律。结果:1.适应性免疫细胞重建方程及规律:CD4+T细胞重建方程:y=89.1038+0.5989t+0.00181t2（15≤t≤600）,其期望值随时间推移呈先慢后快的单调递增趋势,在移植后284天首次达到参考范围,至观察期结束仍在参考范围内;CD8+T细胞重建方程:y=527.2+0.00814t2-0.00001t3（15≤t≤600）,其期望值随时间推移呈先增加再减少的趋势,在观察期初已达到参考范围,自移植后第367天至观察期结束均高于参考范围;总T细胞重建方程:y=684.08+0.01399 t2-0.00002t3（15≤t≤600）,其期望值随时间推移呈先增加再减少的趋势,在移植后55天首次达到参考范围,在移植后第466天达到最大值且至观察期结束均在参考范围内;B细胞重建方程:y=125.24+1.1632t（15≤t≤600）,其期望值随时间推移呈均一的单调递增趋势,在观察期初已达到参考范围,自移植后第422天至观察期结束均超过参考范围。2.适应性免疫细胞重建影响因素:CD4+T细胞重建速度与供者来源、患者年龄相关;CD8+T细胞重建速度与发生植入综合征、口腔黏膜炎相关;B细胞重建速度与发生植入功能不良相关。3.植入综合征多见于移植后21天内,在此期间内发病率为55.81%;口腔黏膜炎多见于移植后17天内,期间发病率为41.86%;植入功能障碍于术后1年内均有发生,前3月较为高发,发病率为9.3%。结论:1.我们成功构建了T、B细胞重建的拟合方程,可用于预测地贫患儿移植后适应性免疫重建的水平。2.行异基因造血干细胞移植的儿童地中海贫血患者术后T、B细胞重建速度不一,但普遍早于成人患者,可在移植后一年内达到正常水平。3.年龄越小的患者术后CD4+T细胞重建速度越快,亲缘性供者有利于术后CD4+T细胞重建。***8+T细胞重建速度与发生植入综合征相关,B细胞重建速度与发生植入功能不良相关。

关键词： 利妥昔单抗   爱泼斯坦巴尔病毒   异基因造血干细胞移植  

摘要： 目的:EBV(Epstein-Barr Virus)感染及相关疾病是异基因造血干细胞移植后常见的并发症。利妥昔单抗抢先治疗可有效治疗移植后EBV血症及移植后EBV相关性淋巴增殖性疾病,但会延迟免疫系统的重建。既往研究表明移植前给予利妥昔单抗治疗可降低术后EBV感染及相关疾病的发生率,而国内尚无相关的大宗临床试验报道。因此本研究拟探讨移植前3月内应用利妥昔单抗可否降低术后EBV感染及其相关疾病的发生率,明确在预处理方案中加入利妥昔单抗治疗的有效性及安全性。 方法:回顾性分析自2017年1月至2020年12月于南方医科大学南方医院儿科造血干细胞移植中心行首次异基因造血干细胞移植术的地中海贫血患儿195例。根据术前3月内是否应用利妥昔单抗,将人群分为利妥昔单抗组与对照组,收集组间患儿的移植方案、供受者年龄及性别、供受者间亲缘关系、输注单个核细胞数及CD34阳性细胞数、植入物类型、术后是否患急慢性移植物抗宿主病、术后是否患EB病毒、巨细胞病毒感染及侵袭性真菌病等临床资料,应用卡方检验、二元Logistic回归法及K-M曲线分析术前应用利妥昔单抗与移植后EB病毒感染的关系。 结果:195例患儿中位年龄为7岁,中位随访时长为16月,其中31例患儿移植前3月内应用单次剂量375mg/m2的利妥昔单抗1至4剂不等,余164例未应用。总人群术后1年内EBV感染率为21.5%,利妥昔单抗组与对照组术后1年内EBV感染率无统计学差异(x2=3.069,P=0.091)。根据移植方案及植入类型,将人群分为NF-08方案组,NF-16方案组及外周血干细胞植入组。在NF-08方案人群中,1年内EBV感染率为22.8%,其中术前应用利妥昔患儿EBV感染率为0.0%,两组间术后EBV感染率差异有统计学意义(χ2=5.046,P=0.027)。在NF-16方案人群中,EBV感染率为17.4%,其中亲缘单倍体联合无关脐血移植方式人群术后EBV感染率为0.0%,术前是否应用利妥昔单抗对术后EBV感染率无影响(χ2=0.654,P=0.412)。在纳入NF-08及NF-16方案所有外周血干细胞植入患儿的组中,EBV感染率为21.5%,术前应用利妥昔单抗为术后EBV感染的保护因素(OR=0.104;95%CI=0.011-0.952)。在总人群及三大组人群中,利妥昔单抗组与对照组两组间术后CMV感染及侵袭性真菌病患病率、急慢性移植物抗宿主病患病率及中性粒细胞与血小板植入时间的差异均无统计学意义。 结论:在NF-08方案人群及外周血干细胞植入人群中,术前3月内使用利妥昔单抗可降低术后EBV感染率。NF-16方案人群中未发现术后患EBV感染的危险因素。术前使用利妥昔单抗不会增加术后CMV感染、深部真菌病及急慢性移植物抗宿主病的发生,也不会延迟中性粒细胞与血小板的植入。

关键词： 孕妇   基因检测   α地贫   β地贫  

摘要： 目的:探究孕妇地中海贫血(以下简称地贫)筛查以及基因检测结果分析与临床意义。方法:选择2019年3月—2020年2月本院进行地贫筛查的1 083例孕妇,对其临床资料进行回顾性分析,所有孕妇地中海表型全部使用血常规检查进行分析,筛查选择PCR (聚合酶链式反应)+导流杂交法,并进一步检测表型阳性患者基因。结果:1 083例孕妇表型阳性患者6.74%,PCR+导流杂交法结果显示拟确诊α-地贫患者4.25%、β-地贫患者2.31%、α/β地贫患者0.18%。3种不同类型的地贫患者筛查结果差异有统计学意义(P<0.05)。在确诊率,β地贫、α地贫高于α/β地贫,差异有统计学意义(P<0.05)。46例α地贫患者中,占比最高的为36.96%-SEA/αα;25例β地贫患者中占比最高的为48.00%17M突变杂合子;2例α/β地贫患者中,α3.7复合654M杂合子与SEA复合CS复合17M杂合子各占50.00%。结论:孕妇地贫筛查以及基因检测能够及早发现胎儿是否携带疾病基因和基因分型,预防中重型地贫患儿的出生。

关键词： 沙利度胺   β地中海贫血   γ珠蛋白   红系分化  

摘要： 目的:本研究探索沙利度胺对重型β地中海贫血患者以及体外红系细胞珠蛋白表达及分化的作用及相关调控机制。方法:首先以二阶段法体外培养红系细胞,沙利度胺为实验组、羟基脲为阳性对照、等体积溶剂二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照组,分别作用于体外培养的重型β地中海贫血患者红系细胞。利用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测珠蛋白基因及参与调控的转录因子的转录水平;蛋白免疫印迹法(WB)检测珠蛋白的表达水平;流式细胞仪检测各组细胞在分化不同阶段的成熟情况。其次,收集服用过沙利度胺药物的中重型β地中海贫血患者的不同时期骨髓液与外周血,分别检测其用药后不同临床指标的改变。结果:1.人红系细胞体外培养与分化体系本实验室体外红系分化培养体系,可以使CD34+定向分化为红系细胞。镜下观察细胞呈圆形或椭圆形,细胞胞质透亮,细胞直径随着分化天数的增加减小。分化第21天时,可见胞质边缘区透亮度增强,中心透亮度减低,形似双凹圆盘状,成熟红细胞。细胞数量在培养至第12天时达到最高,从6×10～4个最大可扩增为3×10～6个细胞,红系表面标记物CD235a最高可达92%±1.32%,去核率约为40%±5.12%。2.沙利度胺对重型β地中海贫血患者红系的珠蛋白表达的影响在最佳作用时间与浓度作用下(200μmol/L下作用72 h),沙利度胺组HBG m RNA在分化第7天开始升高,在红系细胞分化第14天时表达量高于对照组3倍(P<0.05),与阳性对照组无差异(P>0.05)。在分化21天时沙利度胺组HBG m RNA表达为对照组2倍(P<0.05)。而沙利度胺组对于HBA与HBB在分化过程中的表达无明显影响(P>0.05)。利用WB检测重型β地中海贫血患者红系γ珠蛋白在分化阶段的表达情况发现,沙利度胺组γ珠蛋白在分化第14天高表达,与q PCR结果显示一致。结果显示,沙利度胺可以在分化中不影响红系HBA、HBB转录水平的情况下,提升γ珠蛋白的转录和翻译水平,并且在分化第14天时提升最明显。3.沙利度胺对重型β地中海贫血患者体外培养红系分化的影响沙利度胺组红系表面分化标记物较DMSO组在分化后期有所降低(P<0.05),提示沙利度胺可能对红系分化产生抑制效果。4.参与重型β地中海贫血患者红系γ珠蛋白与分化调控基因的表达情况与DMSO组相比,沙利度胺组BCL11A的转录及翻译水平较DMSO组减少;ATF4在分化21天、HRI在分化第14、第21天表达下降(P<0.05);KLF1在分化第7、第21天表达下降(P<0.05);KLF2在分化中的表达与DMSO组比较,差异无统计学意义(P>0.05);GATA1表达量在分化第7、第21天下降(P<0.05);SOX6在分化第14、第21天表达下降(P<0.05);TAL1在分化第21天表达下降(P<0.05)。使用沙利度胺后,红系细胞内BCL11A下降,同时HRI、ATF4均为下降趋势,提示沙利度胺可能通过HRI、ATF4通路下调BCL11A。KLF1、GATA1、SOX6、TAL1的下调变化可能在沙利度胺提升红系细胞内γ珠蛋白的过程中发挥作用。5.患者服用沙利度胺前后对比患者用药后外周血血红蛋白水平与用药前相比,使用沙利度胺29天与85后,患者体内血红蛋白水平表达增高,具有统计学意义(P<0.05)。而组间比较结果显示,29天与85天较15天升高(P<0.05)。沙利度胺后,患者体内γ珠蛋白转录水平增高,具有统计学意义(P<0.05)。在用药15天、29天、85天时分别升高约为用药前的2.5倍、5倍、3倍。其中用药29天γ珠蛋白转录水平最高,用药15天与用药85天患者体内γ珠蛋白表达无差异。与用药前相比,使用沙利度胺后,患者体内α珠蛋白转录水平增高,具有统计学意义(P<0.05)。组间比较无差异。患者用药后体内β珠蛋白转录水平各组与用药前相比,无统计学差异(P>0.05),组间比较亦无统计学差异。与用药前相比(SF为5379.0253±3980.02656μg/L),用药后患者SF有下降趋势,SF为3819.5072±2786.48126μg/L,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.本实验室改良的二阶段红系分化培养法扩增效率和分化效率较高,能更好的模拟体内环境。2.沙利度胺能提升体外培养重型β地中海贫血患者红系细胞γ珠蛋白转录及翻译水平。3.沙利度胺可能影响体外培养重型β地中海贫血患者红系细胞分化,在分化末期,沙利度胺可能通过下调SOX6与TAL1减缓红系的分化,增加未成熟红细胞的增殖,调节血红蛋白转录,从而有效诱导γ珠蛋白。***1A、KLF1、GATA1等转录因子可能参与沙利度胺调控γ珠蛋白表达的过程。HRI、ATF4通路可能参与沙利度胺调控BCLl1A的过程。5.在临床上,沙利度胺能提升中重型β地中海