关键词： 高通量测序技术   新生儿   地中海贫血   基因筛查  

摘要： 目的:浅析在新生儿地中海贫血(以下简称地贫)基因筛查中应用高通量测序技术(NGS)的检验价值.方法:纳入本单位2018年01月至2019年12月间50例经双脱氧链终止法确诊地贫阳性的新生儿作研究样本,行NGS、反向点杂交技术(RDB)与跨越断裂点的PCR技术(gap-PCR)筛查,分析不同筛查技术的检验价值.结果:α-地贫缺陷基因检出率方面,NGS(95.24%)高于常规筛查(80.95%),差异有统计学意义(P＜0.05);β-地贫缺陷基因检出率方面,NGS(96.55%)高于常规筛查(79.31%),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在新生儿地贫基因筛查中应用NGS检验价值高,相较于常规筛查检出率更好,有助于临床早期掌握患儿健康水平.

关键词： 血液学分析指标正常   地中海贫血   基因型分析  

摘要： 目的:分析血液学分析指标正常的地中海贫血基因型.方法:对我院2019年4月—2021年6月期间的970例地贫基因检测,地贫基因异常者249例(25.36％),并分析结果.结果:α地贫135例(13.91％),β地贫104例(10.72％),αβ复合型地贫10例(1.03％);α地贫患者的基因类型主要是--SEA/αα73/135例(54.07％)、α3.7/αα43/135例(31.85％)、--SEA/-α4.27/135例(5.18％)、427T>C 12/135例(8.88％);β地贫的基因类型主要是:124-127delTTCT 38/104例(36.53％)、52A>T 25/104例(24.03％)、316-197C>T 19/104例(18.26％);α地贫复合β地贫:-α4.2/αα复合52A>T 3/249例(1.20％)、79G>A复合--SEA/αα3/249例(1.20％)、--SEA/αα复合124-127delTTCT 2/249例(0.80％)、52A>T复合--SEA/αα2/249例(0.80％).结论:在我国地贫高发区,云南是其中之一,要高度重视血液学分析指标正常的地贫基因检测.

关键词： 地中海贫血   经皮脐血穿刺   羊水穿刺   产前诊断  

摘要： 目的 分析在地中海贫血产前诊断中采取脐血和羊水穿刺检验的诊断价值.方法 研究对象均选自在我院医治的地中海贫血患者,共68例,时间段在2019年4月至2020年4月期间.通过数字随机表法将其设为对照组(34例)和实验组(34例),对照组采取杨羊水穿刺检验,实验组采取经皮脐血穿刺检验.观察并分析两种检验方式的诊断效果和价值.结果 在平均穿刺孕周和终止妊娠孕周上,实验组相较对照组均明显更高,两组有统计学差异(P<0.05).实验组母体并发症发生率高于对照组,且α-重度地中海贫血检出率高于对照组,两组有统计学差异(P<0.05).结论 在地中海贫血产前诊断中,脐血和羊水穿刺检验具有较好的效果,羊水穿刺检验母体并发症较少,但脐血检验能够更准确检出地中海贫血.

关键词： 缺铁性贫血   地中海贫血   血常规检测   鉴别  

摘要： 目的探讨血常规检测鉴别缺铁性贫血与地中海贫血的效果,评价其应用价值。方法将2017年9月至2018年9月本院收治的27例缺铁性贫血患者纳入对照组,另选取同期本院收治的27例地中海贫血患者纳入观察组。所有患者均给予血常规检测,比较分析两组各项血常规检验指标差异。结果观察组Hh、MCH、MCHC指标均高于对照组,RDW、RBC、MCV均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血常规检测有助于帮助临床鉴别缺铁性贫血与地中海贫血,且可提高贫血的鉴别符合率,具有较高的临床应用价值。

关键词： 缺铁性贫血   地中海贫血   红细胞参数  

摘要： 目的探讨血液检验红细胞参数对贫血的鉴别诊断价值。方法回顾性分析2018年6月至2019年8月本院收治的100例贫血患者临床资料,按照贫血类型不同分为缺铁性贫血组和地中海贫血组,每组50例。比较两组血常规检验结果及血清铁蛋白(SF)检验结果。结果两组平均血红蛋白量(MCH)比较差异无统计学意义;与缺铁性贫血组比较,地中海贫血组平均红细胞红蛋白含量(MCHC)、血红蛋白(Hb)值较高,平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)、红细胞(RBC)值较低,差异有统计学意义(P<0.05);缺铁性贫血组SF明显低于地中海贫血组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血液检验红细胞参数应用于贫血鉴别诊断中价值较高,能够辅助诊断不同的贫血类型。

关键词： 地中海贫血   肺部磨玻璃影   肺部感染   CT   影像表现   白细胞   髓外造血  

摘要： 目的:探讨地中海贫血患者肺部CT表现,以减少误诊。方法:回顾性分析1例地中海贫血患者连续三年随访胸部CT的肺部影像表现及血象变化结果,结合文献分析其病因、影像学特点,讨论其鉴别诊断。结果:患者每次入院后经抗感染等对症治疗后,其胸部CT所示肺部磨玻璃影几乎无明显变化且白细胞数降低亦不明显。结论:患者肺部磨玻璃样变,及白细胞数明显升高,单用感染因素来解释可能并不充分,因该地中海贫血患者已出现了全身多处髓外造血情况,尤其是脊柱及肋骨周围;故考虑肺部磨玻璃样表现,可能多系髓外造血所至胸廓变形,肺组织受压,体积缩小,肺通气功能降低所致。

关键词： β-地中海贫血   突变检测   熔解阵列分析   多色探针熔解曲线分析  

摘要： β-地中海贫血(β-thalassemia)是一种严重危害人类健康的血红蛋白隐性遗传疾病,由β-珠蛋白(Human β-globin,HBB)基因突变导致。在全世界大约有1.5%的人群携带此突变,中国与东南亚、南亚地区都属于β-地中海贫血症高发地。该病的治疗方法有限,尽早进行诊断,采取遗传风险评估及产前诊断是预后的关键,而进行基因型诊断又是β-地中海贫血症确诊的标准。除基因测序外,当前的技术方法难以对突变类型进行快速准确的分型。因此本论文应用熔解阵列分析技术(MeltArray analysis),辅以多色探针熔解曲线分析技术(Multicolor Melting Curve Analysis,MMCA),对中国人群和马尔代夫人群常见的HBB基因突变类型,进行检测技术的应用研究,建立基于实时荧光PCR的快速基因突变检测及分型方法。第一章,分别对β-地中海贫血的定义、分布特点、临床特征、发病机理,以及当前的诊疗方法进行介绍,突出区分突变类型的必要性,并且也指出进行有效的人群预防的重要性。最后,阐述了本论文的研究内容及意义。第二章,将熔解阵列分析技术应用于中国人群β-地中海贫血常见突变的检测。按照当前中国人群β-地中海贫血的现状和国家项目管理规范,针对中国人群常见的17种突变类型,建立了一个突变检测及分型体系,能够在一次反应中检测出野生型与突变型,同时准确区分突变类型。体系检测的重复性良好且检测限低至500拷贝/反应(人类基因组约1.5 ng/反应)。最后,利用545份临床样本进行体系的评价,检测到198份阳性样本共携带12种突变类型,CD41-42(-CTTT)、IVS-Ⅱ-654(C>T)、-28(A>G)、CD17(A>T)、CD71-72(+AA)、CD26(G>A)、IVS-Ⅰ-1(G>T)、-29(A>G)八种突变约占突变总数的96%,其中前二个突变频率最高。所有的样本均通过MMCA法外加RDB(Reverse Dot Blot)法或者Sanger测序验证,结果一致,体现出体系具有高准确性,检测结果真实可靠。第三章,对马尔代夫人群β-地中海贫血常见突变类型,应用熔解阵列分析技术结合MMCA技术,建立了一个突变检测及分型体系,可同时对马尔代夫人群10种常见突变进行检测,并且准确区分各突变类型。体系检测限同样能够达到500拷贝/反应(人类基因组约1.5 ng/反应)。挑选各突变基因型共21份临床样本进行体系评价,检测结果均于与验证方法一致。最后,查阅文献整理了东南亚地区国家的β-地中海贫血突变谱,包括柬埔寨、老挝、马来西亚、缅甸、新加坡、印度尼西亚、泰国、越南和文莱等国,发现东南亚各国β-地贫基因突变类型有着极高的相似度,使用前面建立的二个检测体系组合四管联合检测体系,可覆盖这些东南亚国家人群90%以上的突变类型,因此有望形成一个β-地中海贫血基因突变通用检测体系,运用到东南亚地区各国进行人群筛查。

关键词： SUFU   单核苷酸多态性   造血干细胞移植   移植物抗宿主病  

摘要： 目的:探索患者SUFU(rs17114808)单个核苷酸多态性位点(SNP)的不同基因型对地中海贫血患儿异基因造血干细胞移植后GVHD(Graft-versus-host Disease,移植物抗宿主病)的影响。方法:对2018年10月至2020年11月在厦门大学附属中山医院血液科进行异基因造血干细胞移植的44例地中海贫血患儿进行基因型检测,在预处理前采集外周血标本,送检提取外周血基因组DNA,采用Taqman探针法检测该位点SNP基因型,并结合临床资料应用SPSS软件分析比较不同基因型组在移植后植入成功率、血细胞植活时间、急性GVHD总发生率及其受累器官、慢性GVHD及其受累器官、巨细胞病毒及EB病毒血症、尿BK病毒感染、细菌/真菌感染及总生存率等之间是否存在差异。结果:研究共纳入地中海贫血患儿44例,随访截止时间为2021年02月28日,无患儿资料缺失,中位随访时间15月(83天～29月),所有患者中位移植年龄为4岁(2岁～11岁),平均移植年龄为(4.8±2.4)岁。1年总生存率是95.4%,总共死亡2例,移植相关死亡率为4.55%。所有44例患儿的SUFU基因型中CC型有13例(29.55%),CT型23例(52.27%),TT型8例(18.18%),与欧洲个体的基因型频率分布差异较大。CC组、CT/TT两组1年生存率分别92.31%、96.77%。多因素Logistic分析提示,在移植后,CC组II-IV度急性GVHD的发生率为46.15%,显著高于CT/TT组(19.35%),且差异存在统计学意义(p<0.05)。两组在植入成功率、血细胞植活时间、急性GVHD总发生率及其受累器官、慢性GVHD及其受累器官、巨细胞病毒及EB病毒血症、尿BK病毒感染、细菌/真菌感染等方面均无显著差异(p>0.05)。结论:1、异基因造血干细胞移植是目前唯一可治愈输血依赖性地中海贫血的方法,干细胞移植后长期生存率达90%以上。2、在地中海贫血儿童患者中,SUFU(rs17114808)位点基因型的频率分布与欧洲个体差异较大,这可能与种族相关。3、患儿SUFU(rs17114808)单核苷酸多态性位点(SNP)基因型的差异对于地中海贫血患儿造血干细胞移植后GVHD总发生率无显著影响;多因素分析显示该位点基因多态性为CC可能是增加地中海贫血患儿移植后发生II-IV度a GVHD的不利因素。4、a GVHD发生及其严重程度是使尿BKV复制增加的危险因素。

关键词： 地中海贫血   疾病筛查   基因携带者   红细胞参数   血小板参数  

摘要： 目的:　　通过对学龄前非重型地中海贫血儿童的红细胞及血小板参数进行分析，探讨红细胞及血小板参数在筛查地贫基因携带者中的意义，为疑似地中海贫血患者制定一个适合的初筛指标提供参考,优化筛选地贫基因携带者的过程。　　方法:　　本研究选取2019年3月-6月间选择广东省东莞市石龙镇区内5所幼儿园的585例健康儿童作为研究对象，经删除38例血清铁蛋白＜30μg/L的儿童数据后共547例纳入研究。　　1. 所有入组对象均于上午空腹时抽取静脉血标本，分别送检血常规、血清铁蛋白和地中海贫血基因检测。　　2. 根据是否携带地贫基因分为研究组和对照组，对2组患儿的性别、年龄及血清铁蛋白等背景数据进行比较。　　3. 对所有研究对象的血常规参数（RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、PLT、PDW、MPV）与是否携带地贫基因进行相关性分析，绘制点图。　　4. 按是否携带地贫基因分进行分组，对两组RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、PLT、PDW、MPV等参数进行组间比较，确定各参数对筛查地贫基因携带者的意义。　　5. 以是否确诊地中海贫血为因变量，性别、年龄、RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、PLT、PDW、MPV为协变量进行二元Logistic回归分析，模型拟合联合试验检验变量，得出有意义的影响指标，并通过这些有意义的指标进行拟合变量计算，得到一个联合预测因子。　　6. 依据是否携带地贫基因进行分组，绘制RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、MPV、PDW、PLT、联合预测因子等参数的ROC曲线，计算各参数曲线下面积，确定有意义参数的诊断截断点及其诊断敏感性和特异性，对比所获得有意义的参数和联合预测因子的AUC，比较其对地中海贫血筛选优劣程度。　　结果:　　1. 一般资料情况：本研究以2019年3月-6月间选择广东省东莞市石龙镇区内5所幼儿园的健康儿童作为研究对象，根据入组标准及排除标准进行筛选最终共有547例数据纳入统计学分析，其中男310例，女237例，平均年龄4.55±1.016岁。本研究共筛选出地中海贫血基因携带者124例，携带率为22.66%。按是否携带地贫基因分为研究组和对照组，两组儿童的性别、年龄及血清铁蛋白等背景数据无统计学差异（P＞0.05），两组具有可比性。　　2. 将本研究中所有研究对象的血常规参数（RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、PLT、PDW、MPV）与是否携带地贫基因进行相关性分析：所有研究对象的RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、PLT、PDW与是否携带地贫基因具有相关性（均P＜0.05），而MPV与是否携带地贫基因无相关性（P＞0.05）。其中RBC、PLT、PDW参数与是否携带地贫基因呈正相关，HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC参数与是否携带地贫基因呈负相关。　　3. 研究组儿童的HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC均低于对照组，RBC、PLT、PDW均高于对照组，差异有统计学意义（均P＜0.05），而两组儿童的MPV无统计学差异（P＞0.05）。　　4. 以是否确诊地中海贫血为因变量，性别、年龄、RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、PLT、PDW、MPV为协变量进行二元Logistic回归分析，仅HCT、HGB、MCV、MCHC等参数能纳入模型。对上述参数进行联合拟合试验进行变量计算，得到一个联合预测因子，其方差表达为：Logit(y)=188.88-277.741*HCT+0.908*HGB-0.592*MCV-0.463*MCHC。　　5. 依据是否携带地贫基因进行分组，绘制RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、MPV、PDW、PLT、联合预测因子等参数的ROC曲线，计算各参数曲线下面积分别为：0.877，0.758，0.752，0.931，0.950，0.784，0.505，0.654， 0.605，0.968。其中PLT、MPV对筛选地贫基因携带者的诊断效能有限;MCV、MCH以及联合预测因子对筛选地贫基因携带者的诊断效能较高;RBC、HCT、HGB及MCHC对预测地贫基因携带者的诊断效能一般。进一步通过最大约登指数选取各指标的截断值：当HCT取0.385时，其约登指数最大为0.400;当HGB取116.5g/L时，其约登指数最大为0.388;当MCV取80.35μl时，其约登指数最大为0.766;当MCHC取315.5g/L时，其约登指数最大为0.484。综合上述各血常规参数在筛选地贫基因携带者诊断效能大小关系为：联合预测因子＞MCV＞MCHC＞HCT＞HGB，联合预测因子的诊断价值高于MCV、MCHC、HCT及HGB中的任一个。　　结论:　　在地中海贫血筛查中，血小板参数在筛选地贫

关键词： β-地中海贫血   显性突变   移码突变   延长的β-链  

摘要： 研究背景与目的地中海贫血是最常见的单基因遗传病之一,主要分为两类:α-地中海贫血和β-地中海贫血。通常来说,β-地中海贫血是常染色体隐性遗传病,在携带者中仅表现出血液学异常,而纯合子以及复合杂合子的患者表现的最为严重并依赖定期输血。少数情况下会出现罕见的显性β-地中海贫血,这一类患者的α-珠蛋白基因正常,在仅携带一个突变的β-珠蛋白基因的情况下,其在临床上表现为中度至重度的溶血性贫血。这引起了我们的对显性β-地中海贫血的思考和重视。在本研究中,我们收集到一例由HBB基因上的新发突变导致的显性重型β-地中海贫血表型的案例,并对其进行分子学研究分析。材料与方法1.材料:我们的先证者是一名来自中国浙江台州三岁的男童,其表现为不明原因的严重贫血和脾肿大。2.实验方法:采集先证者及其家系成员的血液完成血型学表型分析、异丙醇实验和包涵体试验。通过靶向捕获二代测序技术检测到新突变位点,再设计引物扩增该片段,Sanger测序验证突变位点。对先证者与其父母之间进行亲子鉴定。收集先证者的毛囊、口腔拭子样本及其父亲的精液,提取DNA扩增β-珠蛋白基因验证先证者及其父亲是否存在嵌合。对突变位点进行物种保守性分析以及进行蛋白二级结构和三维结构的预测。构建HBB基因野生型和HBB:c.399delA突变型的过表达载体转染293t细胞,同时进行荧光定量PCR分析被转染细胞的HBB表达量,另外再通过Western-Blot分析HBB的翻译有没有影响。研究结果经二代测序和Sanger测序验证发现先证者携带一个全新的点突变HBB:c.399delA。血红蛋白电泳并未检测到先证者有异常血红蛋白,异丙醇实验和包涵体阴性。父母和哥哥的分子诊断结果表明并未携带该新突变。亲子鉴定证实先证者遗传了分别来自父母的两套遗传物质。先证者毛囊和口腔拭子的HBB基因型与血液样本一致,先证者父亲的精液中未检测到该新突变。物种保守性分析提示序列高度保守,蛋白结构预测结果提示HBB:c.399delA的β-珠蛋白在羧基端延长了10个氨基酸。细胞实验证实HBB:c.399delA能影响β-珠蛋白基因翻译。结论本研究发现了一例在HBB基因3号外显子上的移码突变引起的重型β-地中海贫血。我们的研究表明了新突变报告的重要性并阐述了显性β-地中海贫血的潜在机制,扩展了β-地中海贫血的突变谱,进一步了解该疾病的异质性。