关键词： 地中海贫血   基因分型   基因诊断   基因突变  

摘要： 目的了解深圳市龙华区地中海贫血基因突变类型及分布状况,为该地区优生优育提供参考和指导。方法收集2017年1月～2019年12月到深圳市龙华区人民医院进行地中海贫血筛查人群12898例,通过检测血常规,对红细胞平均体积（MCV）<80 fl和/或红细胞平均血红蛋白含量（MCH）<27 pg的标本通过血红蛋白电泳进行地中海贫血的初筛,初筛表型阳性者则进一步行地中海贫血基因诊断,分析基因诊断结果。结果 12,898例地中海贫血初筛阳性受检者3126例,阳性率为24.23%;基因诊断为地中海贫血905例,检出率为7.02%;α-地中海贫血547例,检出率为4.24%,常见缺失类型基因型为--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα、分别占64.53%、20.48%、8.23%,--SEA/αα基因阳性率高于其它基因突变型,不同基因缺失型构成比较,差异有统计学意义（P<0.05）;β地中海贫血基因突变324例,检出率为2.51%,共检出13种基因型,均为杂合子,其常见突变类型基因型为CD41-42、IVS-Ⅱ-654、-28,分别占35.49%、24.69%、15.12%,CD41-42基因突变检出率高于其它基因突变型,不同基因突变类型检出率比较,差异有统计学意义（P<0.05）;α、β复合型地中海贫血34例。结论深圳市龙华区地中海贫血有一定的发病率,基因突变类型十分复杂,东南亚缺失型(--SEA/αα)是α-地中海贫血基因型中最为常见,而β-地中海贫血中,以CD41-42突变和IVS-Ⅱ-654突变最为常见,该地区α、β地中海贫基因型构成排序基本符合广东省地中海贫血基因分布特点,应对该地区育龄人群开展地中海贫血相关知识宣传、加强孕前筛查以及产前诊断,促进优生优育。

关键词： 孕妇   基因检测   α地贫   β地贫  

摘要： 目的:探究孕妇地中海贫血(以下简称地贫)筛查以及基因检测结果分析与临床意义。方法:选择2019年3月—2020年2月本院进行地贫筛查的1 083例孕妇,对其临床资料进行回顾性分析,所有孕妇地中海表型全部使用血常规检查进行分析,筛查选择PCR (聚合酶链式反应)+导流杂交法,并进一步检测表型阳性患者基因。结果:1 083例孕妇表型阳性患者6.74%,PCR+导流杂交法结果显示拟确诊α-地贫患者4.25%、β-地贫患者2.31%、α/β地贫患者0.18%。3种不同类型的地贫患者筛查结果差异有统计学意义(P<0.05)。在确诊率,β地贫、α地贫高于α/β地贫,差异有统计学意义(P<0.05)。46例α地贫患者中,占比最高的为36.96%-SEA/αα;25例β地贫患者中占比最高的为48.00%17M突变杂合子;2例α/β地贫患者中,α3.7复合654M杂合子与SEA复合CS复合17M杂合子各占50.00%。结论:孕妇地贫筛查以及基因检测能够及早发现胎儿是否携带疾病基因和基因分型,预防中重型地贫患儿的出生。

关键词： 三明地区   地中海贫血   基因检测   罕见基因型   产前诊断  

摘要： 目的分析三明地区地中海贫血（地贫）常见和罕见基因型的分布情况,建立三明地区相关的地中海贫血基因库,从而为临床遗传咨询提供精准的数据支持,以降低三明地区地贫的误诊和漏诊率;对可能生出重型地贫患儿的高风险孕妇做产前诊断,及时干预终止妊娠,以减少出生缺陷。方法收集2016年4月至2020年12月期间在三明市第一医院接受地贫基因检测人群（地贫疑似患者以及婚前体检夫妇）的全血标本,对（1）血常规中MCV<80fl或（和）MCH<27pg;（2）血红蛋白电泳值出现异常或是出现异常血红蛋白条带的样本,采用单管PCR加导流杂交的方法进行常见地贫基因型的检测;用DNA琼脂糖凝胶电泳的方法或是一代测序的方法进行罕见型地贫基因型的鉴定。此外,对可能生出重症地贫患儿的高风险孕妇行羊膜腔穿刺,鉴定胎儿地贫的基因型。结果6975例全血样本共检出2744例地贫基因阳性,总检出率39.34%,其中常见基因型2653例,检出率38.04%;罕见基因型91例,检出率1.30%。1.常见基因型检测结果1.1α地贫检出1833例阳性,检出率26.28%,包括三种缺失型和三种突变型,以--SEA/αα基因型检出率最高达18.94%（1321/6975）,-α3.7/αα检出率次之为3.9%（274/6975）,其余基因型检出率3.41%（238/6975）。1.2β地贫检出771例阳性,检出率11.05%,以βIVS-II-654（C→T）/βN基因型检出率最高达5.08%（354/6975）,βCD41-42（-TCTT）/βN检出率次之为3.53%（246/6975）,其余基因型检出率2.45%（171/6975）。1.3α复合β地贫检出49例阳性,检出率0.70%,以-α3.7/αα复合βIVS-II-654（C→T）/βN检出率最高达0.20%,--SEA/αα复合βIVS-II-654（C→T）/βN与-α3.7/αα复合βCD41-42（-TCTT）/βN检出率次之为0.09%,其余复合基因型检出率为0.42%。2.罕见基因型检测结果2.1罕见α地贫检出60例,包括缺失型和突变型。其中α缺失41例,分别是--THAI/αα36例,HKαα/--SEA2例,αααanti3.7/αα、αααanti4.2/αα、--THAI/αα4.2各1例;α突变19例,分别为ααCD30（GAG>CAG）/αα5例,ααIVS II-34（G>A）/αα4例,ααHBA2:c.*29（C>T）/αα、ααHBA2:c.91（G>C）/αα、ααCD74（GAC>CAC）/αα、ααCD89（CAC>CGC）/αα、ααCD117/118（+ATC）/αα、-α4.2/ααCD74（GAC>CAC）、--SEA/-α4.2αCD74（GAC>CAC）、ααIVS II-55（T>G）/αα、ααCD59（GGC>CGC）/αα、ααCD59（GGC>CGC）/ααCAP+14（C>G）各1例。2.2罕见β地贫检出29例,包括10种突变型,分别是βCD113（GTG>GAG）/βN12例,βCD56（GGC>GAC）/βN 8例,βCAP+22（G>A）/βN 2例,βChinese（Aγδβ）0/βN、βCD22（GAA>GGA）/βN、βIVS-I-2（T>C）/βN、βIVS-II-143（G>A）/βN、βIVS-II-781（C>G）/βN、β-90（C>T）/βN、β131（CAG>AAG）/βN各1例,其中β131/βN与βIVS-II-143/βN为三明地区首次报道的两种新发突变。2.3罕见α复合β地贫检出2例,分别是ααIVS-II-55（T>G）/αα复合βCD54-58（-13bp）/βN1例、αααanti3.7/αα复合βCD 27-28（+C）/βN 1例。3.产前诊断结果127例行羊膜腔穿刺的产前诊断病例共检出98例地贫阳性。3.1α地贫检出87例阳性,检出率68.5%,其中静止型17例;轻型41例;中间型14例;重型15例。3.2β地贫检出10例阳性,检出率8.67%,其中轻型8例;中重型3例。3.3α复合β地贫检出1例阳性。结论本研究通过建立三明地区常见和罕见地贫的基因库,填补了三明地区相关研究领域的空白,为地贫的临床遗传咨询提供了精准的数据支持。三明地区罕见型地贫检出率达1.3%,其中β131/βN和βIVS-II-143/βN为三明地区首次报道的两种新发突变,因此应高度重视三明地区罕见型地贫突变或缺失位点的检测。

关键词： 高通量测序技术   新生儿   地中海贫血   基因筛查  

摘要： 目的:浅析在新生儿地中海贫血(以下简称地贫)基因筛查中应用高通量测序技术(NGS)的检验价值.方法:纳入本单位2018年01月至2019年12月间50例经双脱氧链终止法确诊地贫阳性的新生儿作研究样本,行NGS、反向点杂交技术(RDB)与跨越断裂点的PCR技术(gap-PCR)筛查,分析不同筛查技术的检验价值.结果:α-地贫缺陷基因检出率方面,NGS(95.24%)高于常规筛查(80.95%),差异有统计学意义(P＜0.05);β-地贫缺陷基因检出率方面,NGS(96.55%)高于常规筛查(79.31%),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在新生儿地贫基因筛查中应用NGS检验价值高,相较于常规筛查检出率更好,有助于临床早期掌握患儿健康水平.

关键词： 沙利度胺   β地中海贫血   γ珠蛋白   红系分化  

摘要： 目的:本研究探索沙利度胺对重型β地中海贫血患者以及体外红系细胞珠蛋白表达及分化的作用及相关调控机制。方法:首先以二阶段法体外培养红系细胞,沙利度胺为实验组、羟基脲为阳性对照、等体积溶剂二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照组,分别作用于体外培养的重型β地中海贫血患者红系细胞。利用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测珠蛋白基因及参与调控的转录因子的转录水平;蛋白免疫印迹法(WB)检测珠蛋白的表达水平;流式细胞仪检测各组细胞在分化不同阶段的成熟情况。其次,收集服用过沙利度胺药物的中重型β地中海贫血患者的不同时期骨髓液与外周血,分别检测其用药后不同临床指标的改变。结果:1.人红系细胞体外培养与分化体系本实验室体外红系分化培养体系,可以使CD34+定向分化为红系细胞。镜下观察细胞呈圆形或椭圆形,细胞胞质透亮,细胞直径随着分化天数的增加减小。分化第21天时,可见胞质边缘区透亮度增强,中心透亮度减低,形似双凹圆盘状,成熟红细胞。细胞数量在培养至第12天时达到最高,从6×10个最大可扩增为3×10个细胞,红系表面标记物CD235a最高可达92%±1.32%,去核率约为40%±5.12%。2.沙利度胺对重型β地中海贫血患者红系的珠蛋白表达的影响在最佳作用时间与浓度作用下(200μmol/L下作用72 h),沙利度胺组HBG m RNA在分化第7天开始升高,在红系细胞分化第14天时表达量高于对照组3倍(P<0.05),与阳性对照组无差异(P>0.05)。在分化21天时沙利度胺组HBG m RNA表达为对照组2倍(P<0.05)。而沙利度胺组对于HBA与HBB在分化过程中的表达无明显影响(P>0.05)。利用WB检测重型β地中海贫血患者红系γ珠蛋白在分化阶段的表达情况发现,沙利度胺组γ珠蛋白在分化第14天高表达,与q PCR结果显示一致。结果显示,沙利度胺可以在分化中不影响红系HBA、HBB转录水平的情况下,提升γ珠蛋白的转录和翻译水平,并且在分化第14天时提升最明显。3.沙利度胺对重型β地中海贫血患者体外培养红系分化的影响沙利度胺组红系表面分化标记物较DMSO组在分化后期有所降低(P<0.05),提示沙利度胺可能对红系分化产生抑制效果。4.参与重型β地中海贫血患者红系γ珠蛋白与分化调控基因的表达情况与DMSO组相比,沙利度胺组BCL11A的转录及翻译水平较DMSO组减少;ATF4在分化21天、HRI在分化第14、第21天表达下降(P<0.05);KLF1在分化第7、第21天表达下降(P<0.05);KLF2在分化中的表达与DMSO组比较,差异无统计学意义(P>0.05);GATA1表达量在分化第7、第21天下降(P<0.05);SOX6在分化第14、第21天表达下降(P<0.05);TAL1在分化第21天表达下降(P<0.05)。使用沙利度胺后,红系细胞内BCL11A下降,同时HRI、ATF4均为下降趋势,提示沙利度胺可能通过HRI、ATF4通路下调BCL11A。KLF1、GATA1、SOX6、TAL1的下调变化可能在沙利度胺提升红系细胞内γ珠蛋白的过程中发挥作用。5.患者服用沙利度胺前后对比患者用药后外周血血红蛋白水平与用药前相比,使用沙利度胺29天与85后,患者体内血红蛋白水平表达增高,具有统计学意义(P<0.05)。而组间比较结果显示,29天与85天较15天升高(P<0.05)。沙利度胺后,患者体内γ珠蛋白转录水平增高,具有统计学意义(P<0.05)。在用药15天、29天、85天时分别升高约为用药前的2.5倍、5倍、3倍。其中用药29天γ珠蛋白转录水平最高,用药15天与用药85天患者体内γ珠蛋白表达无差异。与用药前相比,使用沙利度胺后,患者体内α珠蛋白转录水平增高,具有统计学意义(P<0.05)。组间比较无差异。患者用药后体内β珠蛋白转录水平各组与用药前相比,无统计学差异(P>0.05),组间比较亦无统计学差异。与用药前相比(SF为5379.0253±3980.02656μg/L),用药后患者SF有下降趋势,SF为3819.5072±2786.48126μg/L,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.本实验室改良的二阶段红系分化培养法扩增效率和分化效率较高,能更好的模拟体内环境。2.沙利度胺能提升体外培养重型β地中海贫血患者红系细胞γ珠蛋白转录及翻译水平。3.沙利度胺可能影响体外培养重型β地中海贫血患者红系细胞分化,在分化末期,沙利度胺可能通过下调SOX6与TAL1减缓红系的分化,增加未成熟红细胞的增殖,调节血红蛋白转录,从而有效诱导γ珠蛋白。***1A、KLF1、GATA1等转录因子可能参与沙利度胺调控γ珠蛋白表达的过程。HRI、ATF4通路可能参与沙利度胺调控BCLl1A的过程。5.在临床上,沙利度胺能提升中重型β地中海贫血患者

关键词： 地中海贫血   聚类分析   K-means算法   Canopy算法   改进  

摘要： 随着我国信息化程度的不断提高,各类信息技术和手段也在医疗行业得到了广泛的应用,信息系统的应用能够有效记录患者信息、检验结果、诊断数据等信息,如果能从这些大量的信息中挖掘出具有价值的规律或关系,就能够为诊断决策或科研辅助提供支持。地中海贫血作为一种遗传性疾病,多发于我国两广地区,作为地域性疾病的代表,无论是在优生优育检测中,还是在个人疾病预防的检测中,都占有一席之地。目前地中海贫血疾病的诊断以基因检测诊断为主,并伴随常规地中海贫血筛查检验,但基因检测因其造价较高、检测时间较久,并不是临床首选检测项目,因此常规地中海贫血筛查检验结果对是否需要进一步施行基因检测起到关键作用。而常规地中海贫血筛查检验项目中,由于涉及到的检验指标较多,需要进行综合考量才能得出最终结果。目前临床医学诊疗行为受制于个人经验和知识水平,如果能够通过信息化手段自动实现对多指标综合分析判断,得出诊断结果及其分类,将对临床进一步诊疗起到指导意义。本文基于临床对地中海贫血疾病自动化诊断的强烈需求,针对广西壮族自治区某三甲医院现有LIS系统(实验室信息管理系统)中地中海贫血疾病自动化诊断功能缺失的问题,结合Canopy算法与K-means算法相结合的聚类算法速度快、聚类中心点敏感、能够自动解决分类问题的特性,提出了针对该疾病的自动化诊断解决方案,以降低临床依赖个人经验和知识造成的误诊漏诊率。为实现该疾病的自动诊断功能进行了如下研究工作:(1)在对聚类分析算法进行研究的基础上,结合地中海贫血疾病诊断的实际应用场景,针对Canopy算法与K-means算法相结合的聚类算法对初始聚类中心敏感、易陷入局部最优解的问题对其采用平均差异度方法进行改进,并对Canopy算法T值选取的方法进行改进,进一步提高算法的运算速度和聚类精度。采用该医院的真实地中海贫血筛查检验数据进行实验,结果表明本文提出的融合后的聚类分析算法能够提高分类结果的准确率,并且在对大数据集进行计算时速度较快。(2)将本文提出的融合后的聚类分析算法应用到该医院的LIS系统中,设计并实现了地中海贫血疾病自动化诊断功能模块。通过测试,地中海贫血疾病自动化诊断功能模块能够有效提高地中海贫血疾病诊断的正确率,并提供了异常结果自动提醒功能。结果表明,地中海贫血疾病自动化诊断功能模块能够实现地中海贫血疾病的自动化诊断,并能够有效降低人为因素造成的误诊、漏诊几率。

关键词： 地中海贫血   疾病筛查   筛查模式  

摘要： 地中海贫血症常见于我国南方地区,主要集中在广东、广西、海南、福建、贵州、重庆、四川、云南、江西、湖南这10个省(区、市),其中两广地区——广东、广西是地贫发生率最高的。据不完全统计,我国南方地区地贫基因携带者高达3000万人,共有重型、中间型地贫患者共计30万人左右,其中重型地贫患者有1.5万人左右,从这些数据来看,疾病流行情况形式十分严峻。随着我国政府对人民健康状况的愈加重视,2018年,国家卫健委的《关于印发全国出生缺陷综合防治方案的通知》(国卫办妇幼发201819号)中,明确提出要求“在南方10个高发省份深入开展地中海贫血筛查项目,逐步扩大覆盖范围”。地中海贫血疾病是一个可以被筛查和被治愈的疾病,筛查工作如果做得到位,那么可以杜绝这类疾病的发生,所以地中海贫血筛查工作已经得到了越来越多执行组织、老百姓的关注,政府关于地中海贫血筛查体系的工作目前仍然有很多不足之处。因此,发现实践中政府关于地中海贫血筛查体系的不足之处并加以改善,可以更有效地进行筛查,并且对于我国卫生工作和人民健康事业的发展,具有重要的现实意义和历史意义。随着各省公共卫生层面的工作推进,在开展过程中暴露出现有筛查模式的相关问题,主要表现在“筛查过程中采取的筛查技术需要进行更新、筛查过程中的流程需要进行优化、筛查过程中医疗数据管理需要进一步提升”等方面。本项研究通过对目前我国两广地区——广东、广西政府地中海贫血筛查模式进行分析,发现我国现有两广地区地中海贫血筛查存在的问题,通过借鉴其他国家的筛查措施,提出两广地区地中海贫血筛查模式。并提出具体政策建议:(1)针对观念保守的地区采取折中模式,只对检测技术进行革新;(2)采取稳健模式对现有筛查流程进行集约化管理,不仅对检测技术进行革新,还采用全新的筛查流程;(3)采取前瞻模式对筛查数据进行管理与挖掘,不仅对检测技术进行革新、筛查流程进行更新,还对疾病数据进行管理。最后,根据三种创新模式,提出相应的实施策略。

关键词： α-地中海贫血   血红蛋白H病   罕见缺失型基因突变   基因型   表型  

摘要： 目的:分析α-地中海贫血血红蛋白H病(Hb H病)的基因型,了解其分子特点和临床特征。方法:对2020年5月至2021年2月到广西医科大学第一附属医院进行地中海贫血诊疗的病例,应用血细胞自动分析仪检测血常规,应用高效液相色谱法(HPLC)进行血红蛋白分析。对检测出的Hb H病病例使用跨越断裂点PCR(Gap-PCR)、荧光PCR熔解曲线法(FMCA)检测常见的缺失型和非缺失型α-地中海贫血基因突变以及β-地中海贫血基因突变,高通量测序技术检测罕见基因突变。应用SPSS 22.0软件对所得数据进行分析。结果:1.一般资料:在1485例病例中检测到77例Hb H病。年龄范围在1月至78岁之间,14岁以下儿童23人,成人54人。女性41人,男性36人。2.77例Hb H病病例中检出缺失型Hb H病45例,包括28例--SEA/-α3.7,13例--SEA/-α4.2,3例--SEA/-α27.6,1例--SEA/-α2.4。缺失型Hb H病的血常规结果:Hb 57～130.6g/L,MCV 45～74.6f L,MCH 14.2～23.1pg,MCHC 279.7～324g/L。缺失型Hb H病的血红蛋白分析结果:Hb H 3～23.6%,Hb A2 0.6～2.1%。3.77例Hb H病病例中检出非缺失型Hb H病32例,包括26例--SEA/αCSα,6例--SEA/αQSα。非缺失型Hb H病的血常规结果:Hb 52.7～100g/L,MCV 56.4～82.01f L,MCH 16～23.9pg,MCHC 237～320g/L。非缺失型Hb H病血红蛋白分析结果:Hb H 10～26%,Hb A2 0.3～2.5%。4.在77例Hb H病病例中发现4例罕见缺失型Hb H病。其中病例1为-α2.4缺失突变复合--SEA缺失突变(--SEA/-α2.4),病例2、病例3、病例4为-α27.6缺失突变复合--SEA缺失突变(--SEA/-α27.6)。血液学特点为:病例1无贫血(Hb 120.7g/L),病例2、病例3、病例4为中度贫血(Hb 77g/L,Hb 76g/L,Hb 77.3g/L),4例病例的MCV和MCH均低于正常值。血红蛋白分析结果:除病例2检出Hb Bart's(7%),其余3例病例均检出不同水平的Hb H(9%,4%,3%)。结论:1.本研究共发现6种Hb H病基因型,分别是--SEA/-α3.7、--SEA/αCSα、--SEA/-α4.2、--SEA/αQSα、--SEA/-α27.6、--SEA/-α2.4。缺失型Hb H病更常见,其中--SEA/-α3.7最常见,其次是--SEA/αCSα。2.等位基因中--SEA的检出率最高,其次是-α3.7、αCSα、-α4.2、αQSα。3.非缺失型Hb H病的血常规MCV、MCH以及血红蛋白分析Hb H水平比缺失型Hb H病高,Hb A2比缺失型Hb H病低。缺失型Hb H病中--SEA/-α4.2的Hb H水平比--SEA/-α3.7的高。非缺失型Hb H病中--SEA/αCSα的MCV比--SEA/αQSα高,但Hb H水平比--SEA/αQSα低。4.首次在广西地区发现罕见的α-珠蛋白基因-α27.6缺失突变复合--SEA缺失突变导致Hb H病,临床上表现为中度贫血。首次在此类型Hb H病中检测出Hb H或Hb Bart's。α-珠蛋白基因-α2.4缺失突变复合--SEA缺失突变导致Hb H病,临床上无贫血,仅MCV和MCH降低,Hb H 9%。以上两种罕见缺失型基因突变应用常规检测方法无法检出,容易漏诊。

关键词： 造血干细胞   UM171   SR1   β-地贫人源化小鼠模型  

摘要： 【背景与目的】造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)是决定造血作用的缔造者,即在生物体生命过程中不断产生的血细胞。HSC因具有能够实现自我更新和分化为多种类型血液细胞的潜能,来自骨髓和其他组织来源的HSC已被应用于治疗获得性或遗传性、恶性和非恶性血液系统疾病、遗传性代谢疾病、血红蛋白病、骨髓增生性疾病和免疫系统疾病等,所以HSC的体外扩增培养一直是生物医学领域的研究热点,然而,当前体外扩增过程中HSC的干性维持仍是个急需解决的问题。UM171和Stem Regenin 1(SR1)分别是嘧啶吲哚类衍生物和嘌呤衍生物,这两个小分子化合物都被认为是安全有效的HSC体外扩增剂。本研究的目的是探究UM171和SR1小分子化合物的各自添加和联合使用对人造血干细胞体外扩增的影响。之后,将HSC体外扩增培养体系与人源化小鼠模型技术相结合,构建与人类地中海贫血疾病相似的人源化小鼠动物模型,该模型对研究贫血性疾病的发病、治疗和预防有重大的意义。【材料与方法】1.材料本研究所用的脐带血和16-23周胚胎均由广州医科大学附属第三医院妇产科产妇捐赠。本研究经广州医科大学附属第三医院医学伦理委员会批准,所有患者或家属均签署临床研究知情同意书。2.方法2.1体外高效扩增CD34HSC根据Easy Sep?Human Cord Blood CD34 Positive Selection Kit II试剂盒的说明书,经细胞分选仪提取新鲜脐带血样本中的CD34HSC。CD34HSC的体外基础体系为:Stem Span?SFEM II培养基+干细胞生长因子(SCF)、血小板生成素(TPO)+酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)+白细胞介素(IL-6)。为探究小分子化合物UM171和SR1在HSC体外培养中的作用,我们建立了4种不同培养体系对CD34HSC进行体外培养:对照组(基础培养体系)、SR1组(基础培养体系+SR1)、UM171组(基础培养体系+UM171)、SR1+UM171组(基础培养体系+SR1+UM171)。CD34HSC经体外培养5天后,取各组细胞分别进行(1)CFU集落形成实验,观察统计集落形成情况,验证体外培养的CD34HSC的多能性维持情况和(2)流式细胞分选鉴定HSC特异性标记物CD34和CD133的表达情况,用以筛选最佳培养体系。收集该培养体系培养下的细胞,根据CD34和CD133的表达差异细分为H组(CD34CD133)、L组(CD34CD133)、N组(CD34CD133)并进行流式分选。富集到的三组细胞进行进一步两两组合,每组分别取5×10的细胞量,继续分组,即H+H组,L+L组,N+N组,H+L组,L+N组,H+N组,另加一组1×10的未经流式分选的体外培养五天的细胞作为对照组,用以研究CD34CD133细胞群对HSC增殖和干性的影响。在最佳培养体系下培养5天后,再次进行流式细胞实验分析CD34,CD133的表达情况,验证添加小分子化合物结合细胞分群后,体外HSC的增殖及干性维持情况。2.2构建人源化地中海贫血症模型小鼠提取含CD41-42(-CTTT)纯合突变的重型β-地中海贫血胎儿肝脏中的CD34HSC。之后,将CD41-42(-CTTT)纯合突变胎肝来源的人CD34HSC和正常脐带血来源的人CD34HSC分别经尾静脉注射入免疫缺陷小鼠体内。在这里,我们用的是维通利华的NOG-EXL小鼠,其专业名称为***-PrkdcIl2rgTg(SV40/HTLV-IL3,CSF2)10-7Jic/Jic,优点是hu HSC-CD34+移植后,不仅可以分化出淋巴细胞,还可以分化出多种髓系细胞(粒细胞,单核细胞,巨噬细胞等),是目前免疫系统人源化最完全的模型。相较于基础NOG/NSG,hu HSC-CD34+移植后,人源免疫系统重建率更高。将正常脐带血来源的人CD34细胞作为对照组,纯合β-地中海贫血胎肝来源的CD34细胞作为实验组。分别于移植后8周和12周,对小鼠进行取材,检测外周血中人CD45细胞和鼠CD45细胞所占的比例。分离提取检测后各组小鼠的骨髓中的CD34HSC,对其进行二次尾静脉注射移植入免疫缺陷小鼠体内,移植12周后,再次检测小鼠外周血中人CD45细胞和鼠CD45细胞所占的比例,验证人源化小鼠模型的构建情况。【结果】(1)脐带血来源的人HSC体外培养5天后,细胞计数统计结果个数显示:与对照组(5.86±2.04×10),UM171组(7.22±2.42×10),SR1组(10.31±1.23×10)相比,UM171+SR1组(14.05±2.05×10)的细胞扩增的数量最多。(2)脐带血来源的人HSC体外培养5天后,经流式细胞仪检测细胞CD34和CD133表达情况显示:UM171组(62.4

关键词： 地中海贫血   超声心动图   斑点追踪技术   心肌做功   儿童  

摘要： 背景:地中海贫血(thalassemia,Th)是一种遗传性溶血性贫血。根据血红蛋白的肽链缺失类型,分为α地中海贫血、β地中海贫血及其他类型地中海贫血。重型β地中海贫血可简称重型地中海贫血(thalassemia major,TM)。重型地中海贫血患儿由于铁超载、心脏高输出状态,导致心肌的机械运动功能出现异常,可表现为铁超载性心肌病、心律失常、肺动脉高压以及慢性心力衰竭,严重者可导致不可逆心脏损伤。超声心动图的斑点追踪技术定量心肌做功来评估左心室收缩功能,是一种评估心肌运动功能的全新方法。目的:本研究探讨应用斑点追踪超声心动图(speckle tracking echocardiography,STE),检测重型β地中海贫血患儿的左室整体纵向应变(global longitudinal strain,GLS)、整体做功指数(global work index,GWI)、整体有效功(global constructive work,GCW)、整体无效功(global wasted work,GWW)和整体做功效率(global myocardial work efficiency,GWE),评价重型β地中海贫血患儿的心肌收缩功能,探讨超声心动图心肌做功技术用于重型β地中海贫血患儿心脏功能监测的价值。研究方法:选取2018年8月至2020年8月,深圳市儿童医院对经基因检测确诊的91例TM患儿,其中有37例接受造血干细胞移植的TM患者。根据血清铁蛋白(serum ferritin,SF)含量将TM患儿分为高铁负荷组以及低铁负荷组。选取体表面积(body surface area,BSA)匹配的正常儿童作为正常对照组。研究对象分组如下:91例TM组(91例对照组)、34例高铁负荷组(SF≥2500ng/ml)、32例低铁负荷组(SF<2500ng/ml)、37例造血干细胞移植组(36例对照组)。所有患者均测量身高、体重、血清铁蛋白等临床数据。采用VividE95三维彩超仪进行超声心动图成像。测量受检者的肱动脉压,应用EchoPAC软件检测受检者的左心收缩功能及心肌做功。结果:与正常对照组比较,TM组的GLS、GWI、GCW、GWE均减小,差异有统计学意义(P<0.05)。与低铁负荷组相比,高铁负荷组的GLS、GWI、GCW、GWE减小,GWW增大,但差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组相比,造血干细胞移植组的GLS、GWI、GCW、GWE减小,GWW增大,差异有统计学意义(P<0.05)。与移植前比较,造血干细胞移植后患儿GLS、GWI、GCW、GWE减小,GWW增大,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TM儿童亚临床状态下左心收缩功能下降。不同血清铁蛋白水平的TM患儿,左心收缩功能无明显变化。造血干细胞移植后的儿童左心收缩功能依旧低于正常儿童。造血干细胞移植后患儿的左心收缩功能无明显变化。