关键词： α-地中海贫血   氧化应激   临床异质性   转录组   miRNA  

摘要： 目的和意义:地中海贫血(地贫)是人类最常见的单基因遗传病之一。α-地贫发病率高,发病人群基数大,部分患者需要终身输血,且易继发出现并发症,严重影响患者的生活质量,给家庭及社会造成极大的经济负担,针对α-地贫的发病及临床异质性研究具有十分重要的意义。氧化应激水平失调是影响地贫发病临床症状严重程度的重要因素之一,本研究旨在通过RNA及mi RNA转录组测序方法探索与H-CS型α-地贫氧化应激相关的核心基因及mi RNA,为探索α-地贫及其他类型地贫的发生机制,寻找缓解及治疗地贫的有效途径提供依据。 方法:本研究采用高通量RNA转录组测序及mi RNA转录组测序的方法检测H-CS型α-地贫(H-CS组,n=6)和健康对照(N组,n=3)外周血有核红细胞样本转录组的变化,采用GO富集分析、KEGG富集分析等生物信息学分析方法对测序数据进行分析,采用RT-q PCR法对差异表达基因及mi RNA进行验证,探索差异表达基因及mi RNA在H-CS型α-地贫中潜在的功能。在细胞机制实验中,取H-CS型α-地贫患者及健康对照人群新鲜抗凝血,应用流式细胞术及比色法检测两组人群外周血ROS、MDA水平,探索H-CS型α-地贫患者氧化应激水平。以“oxidative”为关键词在“Gene Cards”数据库取得氧化应激相关基因集,与RNA测序所得的差异表达基因集相交集寻找可能的目标的基因,扩大人群样本量应用RT-q PCR的方法进行验证。利用生物信息学技术,预测mi RNA与靶基因的靶向关系,利用双荧光素酶实验对靶向关系进行验证,应用Western blot的方法检测过表达mi RNA后靶基因的蛋白水平;扩大人群样本,提取RNA后应用RT-q PCR的方法验证mi RNA在H-CS型α-地贫患者中的表达水平;在K562细胞中构建过表达与抑制表达mi RNA模型,应用流式细胞术检测ROS的水平,应用RT-q PCR的方法,检测mi RNA、靶基因及氧化应激相关标志性基因的表达水平。 结果:本研究总共筛选出差异表达基因1585个,差异mi RNA 358个。对差异基因联合“Gene Cards”数据库分析,发现8个明显与地贫发生发展相关的基因。GO富集分析显示,差异基因主要富集在细胞核、细胞质和核仁等细胞成分,参与了泛素结合、泛素样蛋白结合等分子功能。KEGG富集分析显示,差异基因主要富集在泛素介导的蛋白质水解、FOXO信号通路等方面。我们对差异显著的5个基因及7个mi RNA进行RT-q PCR临床标本验证,结果与测序数据中的表达变化趋势一致。流式细胞术实验结果显示,与健康对照人群相比,H-CS型α-地贫患者ROS水平上升;比色法实验结果显示,与健康对照人群相比,H-CS型α-地贫患者MDA表达水平较高;生物信息学分析可能参与调控H-CS型α-地贫氧化应激的基因有24个,其中FOXO3可能起重要作用;扩大人群样本量应用RT-q PCR方法验证结果显示,H-CS型α-地贫患者FOXO3基因表达明显增高。mi RNA的靶基因预测数据库预测显示,mi R-132-3P的编码区与FOXO3 3’UTR区域碱基互补;双荧光素酶报告基因实验显示mi R-132-3P和FOXO3基因存在靶向关系;Western blot实验显示mi R-132-3p能抑制FOXO3的蛋白表达;构建氧化应激模型,质粒转染后,RT-q PCR结果显示过表达及抑制mi R-132-3P均成功,FOXO3及CAT、SOD1的m RNA表达水平检验结果显示,过表达mi R-132-3P后,FOXO3及CAT、SOD1的m RNA表达水均下降,抑制mi R-132-3P后,FOXO3及CAT、SOD1的m RNA表达水均上调;流式细胞术结果显示,过表达mi R-132-3P后,K562细胞中ROS水平上升,抑制mi R-132-3P后,K562细胞中ROS水平下降。 结论:我们的研究初步探索了H-CS型α-地贫有核红细胞的转录组变化水平。根据测序分析结果我们推测:FOXO信号通路可能对H-CS型α-地贫的发病及临床表型具有一定的作用。H-CS型α-地贫患者红细胞内氧化应激水平增高,FOXO3的升高可能与H-CS型α-地贫患者氧化应激水平的调节存在一定的关系。mi R-132-3P可能通过mi R-132-3P/FOXO3轴影响氧化应激失调产物ROS以及活性氧清除酶SOD1和CAT的表达。

摘要： 广西是地中海贫血(以下简称"地贫")高发地区,据不完全统计,全区输血依赖型地贫大约有10万人,要治疗这一病症,每年所需费用高达数万元。为了尽可能救治地贫患儿,助力广西地贫防治工作,广西壮族自治区人民医院内科第二党支部在"我为群众办实事"实践活动中,发起了"关爱生命"地中海贫血救助行动,针对影响地贫患儿接受规范化诊治的痛点、难点,开展一系列救助活动。

关键词： 贫血   血液检查   地中海贫血   缺铁性贫血   巨幼红细胞贫血  

摘要： 目的：探讨血液检验在贫血临床诊断、鉴别中的价值。方法：选取我院健康体检者40例并将其纳为A组，选取我院贫血患者120例，其中地中海贫血、缺铁性贫血、巨幼红细胞贫血患者各40例，分别纳为B1组、B2组、B3组，开展研究，均予以血液检查，观察检查结果。结果：检查后，A组红细胞体积分布宽度（RDW）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HB）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）检查结果分别为（14.71±1.28）%、（4.31±1.68）×10～9/L、（124.35±19.98） g/L、（92.08±8.41）fL、（29.78±1.23）pg;B1组检查结果分别为（17.58±1.08）%、（6.28±0.87）×10～9/L、（102.50±14.28）g/L、（72.58±5.98）fL、（20.86±1.25）pg;B2组检查结果分别为（22.18±1.15）%、（5.14±0.63）10～9/L、（85.68±28.32）g/L、（75.82±6.89） fL、（24.21±2.98） pg;B3组检查结果分别为（19.05±3.82）%、（3.56±0.78）×10～9/L、（71.80±13.26） g/L、（114.25±7.38）fL、（35.87±7.58）pg。经对比，各组各项血液检查指标均存在一定差异，具有统计学意义（P<0.05）。结论：血液检验在贫血临床诊断、鉴别中的应用效果理想，可推广。

关键词： α地中海贫血   三维能量多普勒超声   早中孕期   胎盘血管化指数   静脉导管  

摘要： 目的:探讨三维能量多普勒超声监测早中孕期不同类型α地中海贫血胎儿胎盘血管化相关指数,并结合静脉导管血流参数,评估及预测胎儿α地中海贫血风险的临床价值。 方法:选择2020年8月至2021年8月在广西医科大学第一附属医院产前诊断中心就诊的夫妇双方均诊断为α地中海贫血基因携带者72例为实验组,夫妇双方均不携带α地中海贫血基因30例为对照组,两组中夫妇双方均不合并心肝肾等其他疾病。对实验组及对照组所有胎儿均行常规二维超声检查,了解胎儿生长发育情况。应用三维能量多普勒超声监测胎盘血管指数（VI）、血流指数（FI）、血管血流指数（VFI）,同时,测量胎儿静脉导管DV-S、DV-a、DV-PI。对72实验组胎儿均经绒毛膜或羊膜腔穿刺行α地中海贫血基因诊断。 结果:1、胎儿α地中海贫血基因诊断结果:重型α地中海贫血21例,中间型α地中海贫血12例,轻型α地中海贫血31例,无α地中海贫血8例。2、实验组和对照组间年龄、孕周差异均无统计学意义（P>0.05）。3、实验组中重型及中间型α地中海贫胎盘VI、FI、VFI及DV-S、DV-a显著高于轻型α地中海贫血组及对照组胎儿,DV-PI低于轻型α地中海贫血组及对照组胎儿,差异具有统计学意义（P<0.05）,重型与中间型α地中海贫血比较,胎盘VI、FI、VFI差异无统计学意义（P>0.05）。4、胎盘VI、FI、VFI与DV-S、DV-a均呈正相关关系（rs=0.255、rs=0.241、rs=0.304;rs=0.389、rs=0.297、rs=0.414,P均<0.05）,胎盘VI、FI、VFI与DV-PI呈负相关关系（rs=-0.413、rs=-0.312、rs=-0.438,P均<0.05）。5、胎盘VI、FI、VFI及DV-S、DV-a、DV-P均可以用于预测重型及中间型α地中海贫血胎儿风险,差异均有统计学意义（P<0.05）,ROC曲线下面积分别为0.903、0.770、0.923、0.765、0.784、0.737,胎盘血管化指数联合DV血流参数预测重型及中间型α地中海贫血胎儿灵敏度及特异度均较高。 结论:1、胎盘血管化指数VI、FI、VFI可作为预测重型及中间型α地中海贫血风险性一项新的非侵入性检查方法,是预测早中孕期胎儿贫血的可靠参数。2、胎盘VI、FI和VFI与DV-S、DV-a以及DV-PI均有一定相关性,二者联合可提高其预测重型及中间型α地中海贫血风险的灵敏度及特异度。

关键词： 地中海贫血   筛查情况   血红蛋白电泳  

摘要： 目的了解广州市育龄期夫妇α、β地中海贫血基因的携带情况, 为遗传咨询和产前基因诊断提供临床参考。方法选取2020年参加广州市免费产前筛查和诊断项目的夫妇39 928对, 采用平均红细胞体积、平均血红蛋白浓度指标作为初筛, 高效液相色谱法测定血红蛋白电泳进行复筛, Gap-PCR检测与PCR-反向斑点杂交(PCR reverse dot blot, PCR-RDB)用于确诊α、β地中海贫血。结果在筛查的39 928对夫妇中, 共检出地中海贫血阳性8459例, 发生率为10.59%。其中缺失型α地中海贫血5671例, 发生率为7.10%;非缺失型α地中海贫血253例, 发生率为0.32%;β地中海贫血2535例, 发生率为3.17%。结论广州市育龄期夫妇地中海贫血的发病率较高, 其中缺失型α地中海贫血最常见, 其次是β地中海贫血和非缺失型α地中海贫血, 符合广东地区地中海贫血的基因型分布特点。对于地中海贫血预防和控制, 应建立网络和广泛实施婚前和产前筛查, 以增加地中海贫血干预的可行性。

关键词： 地中海贫血   干细胞移植   异基因   单倍体   移植物抗宿主病   环磷酰胺   预防  

摘要： 目的:评价低剂量后置环磷酰胺(Low-dose Post-transplantation Cyclophosphamide,LD-PTCY)用于预防地中海贫血儿童造血干细胞移植后移植物抗宿主病(Graft-versus-host Disease,GVHD)的临床疗效和毒副作用,方法:回顾性分析38例重型地中海贫血(Thalassemia Major,TM)儿童接受异基因造血干细胞移植(Hematopoietic Stem Cell Transplantation,HSCT)后采用低剂量后置环磷酰胺方案(Cy 25mg/kg/d,+3d、+4d)预防移植后GVHD的临床资料,统计移植后患者血细胞植活时间、总生存(Overall Survival,OS)率、急性GVHD(Acute Graft-versus-host Disease,a GVHD)发生率及其受累器官、慢性GVHD(Chronic Graft-versus-host Disease,c GVHD)发生率及其受累器官、EB病毒激活率、巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)激活率、细菌/真菌/其他病原体感染率、粘膜炎、出血性膀胱炎发生率和其他并发症的发生情况等。结果:38例患者中位随访13.5个月(3-33个月),患者接受移植时中位年龄为5.5岁(年龄范围2-12岁),随访结束时所有患者均稳定植入,2年OS达92.1%,共3名患者死亡,移植相关死亡率为7.9%。II-IV度a GVHD和c GVHD发生率分别为23.7%和20%,其中III-IV度a GVHD发生率仅为10.5%,移植后细菌感染和真菌感染发生率分别为13.2%和5.3%。移植后100天EBV激活率为44.7%,CMV激活率为26.3%。38例患者中非亲缘移植30例,单倍体移植8例,非亲缘组和单倍体组a GVHD、III-IV度a GVHD发生率分别为23.3%vs.25%、10%vs.12.5%,两组c GVHD发生率分别为11.1%和50%,两组OS分别为90%和100%,Fisher确切概率法比较两组a GVHD、III-IV度a GVHD发生率显示差异无统计学意义(p>0.05),而亲缘单倍体组c GVHD发生率则高于非亲缘移植组,且差异具有统计学意义(p<0.05),log-rank分析显示两组OS差异无统计学意义(p>0.05)。结论:(1)LD-PTCY方案用于地中海贫血儿童造血干细胞移植后GVHD的预防安全有效。(2)在非亲缘移植和单倍体移植中,LD-PTCY方案显著减少了a GVHD的发生,特别是重度a GVHD的发生率,改善了地贫儿童单倍体和非亲缘移植的预后。(3)LD-PTCY应用不增加移植相关的病毒激活率,值得推广。

关键词： β地中海贫血   传统治疗   基因治疗   基因添加   基因编辑  

摘要： β地中海贫血主要是由于β珠蛋白基因突变引起的慢性溶血性孟德尔遗传病。目前定期输血、祛铁、脾摘除以及异体造血干细胞移植(HSCT)仍面临巨大挑战。基于病毒载体介导的基因添加和核酸酶介导的基因编辑在靶细胞中的成功，基因治疗逐渐成为根治β地中海贫血的新疗法，临床应用中具有非常明显的优势，但也存在一定局限性。本文围绕β地中海贫血基因治疗的基础研究以及临床应用展开综述，总结了基因治疗机制、现状，以期为β地中海贫血基因治疗的相关研究和临床应用提供参考。

关键词： 地中海贫血   全自动红细胞渗透脆性分析仪   红细胞渗透脆性实验   联合筛查  

摘要： 目的应用新型全自动红细胞渗透脆性分析仪RA-800(散射比浊法)进行红细胞脆性实验(erythrocyte fragility test,EFT)检测,验证其对地中海贫血筛查的临床性能,及此方法检测EFT联合平均红细胞体积(Mean corpuscular volume,MCV)、平均红细胞血红蛋白量(Mean corpuscular hemoglobin,MCH)和血红蛋白(hemoglobin,Hb)电泳等初筛指标筛查地中海贫血的价值。方法以深圳市罗湖区人民医院行孕检疑似地中海贫血人员100例为研究对象,以基因检测结果为金标准,用新型全自动红细胞渗透脆性分析仪RA-800与临床实验室现用的科方EFT检测试剂盒(直接比色法)组成的检测系统结果进行比较。以罗湖区人民医院接收的220例确诊为地中海贫血患者作为观察组,同期220例健康体检者作为对照组。对其血液进行MCV、MCH、Hb电泳试验、EFT检测,并对各指标单一筛查和联合筛查灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确率进行分析比较。结果RA-800散射比浊法筛查地贫的灵敏度、特异度、正确率分别为66.67%、92.86%、85.00%,科方直接比色法对应结果分别为76.67%、81.43%、80.00%。两种方法对地贫的筛查Kappa检验值为0.558,结论为一致性中等,ROC曲线(receiver operating characteristic curve,ROC curve)表明两者对地贫的诊断价值都具有诊断意义。观察组MCV、MCH、Hb电泳、EFT和四项联合筛查检测阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),四项联合筛查检测灵敏度、准确性和阴性预测值均高于MCV、MCH、Hb电泳、EFT单一筛查,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论新型红细胞渗透脆性分析仪RA-800适用于地中海贫血筛查,性能指标符合临床要求,并且MCV、MCH、Hb电泳、EFT各指标联合筛查可优势互补有效提高地中海贫血阳性检出率和诊断准确率。图1表4参28

关键词： 散射比浊法   红细胞渗透脆性   参考区间   地中海贫血   供者血  

摘要： 目的通过分析健康人群中散射比浊法检测的红细胞渗透脆性(erythrocyte osmotic fragility,EOF)分布特征,建立散射比浊法检测EOF的参考区间并对其在地中海贫血(以下简称“地贫”)及血源筛查的临床应用价值进行初步探讨。方法首先根据卫生行业标准对检测系统进行性能评估;然后检测2451例健康查体者剩余全血样本的EOF,依据其分布特征建立生物参考区间并进行初步验证;再选取其中170例应用试管法平行进行红细胞渗透脆性的定性检测,比较两种方法的检测结果一致性;122例地贫筛查者全血样本进行的EOF、平均红细胞体积(mean corpuscular volume,MCV)、平均红细胞血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin,MCH)及地贫基因检测,以基因检测结果为金标准,初步评价EOF在地贫筛查中的临床应用价值。收集临床合格供者血样300例进行MCV、MCH、EOF、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate Dehydrogenase,G6PD)活性、地中海贫血基因和G6PD突变基因的检测,初步探讨EOF在血源筛查中的应用价值。结果自动化的散射比浊法测红细胞渗透脆性的高、低值批内精密度及总精密度分别为2.97%、1.69%,3.74%、1.71%;本底计数为0%,携带污染率为1.49%,检测系统的分析性能达临床应用要求。依据其分布特征,本实验室的参考区间为男性>73%、女性>74%。以此为阴阳性界值,其测定结果与试管法的阴性符合率为96%,阳性符合率是100%,检测结果差异没有统计学意义(P>0.05)。单独应用到地贫筛查时,EOF敏感性为73%、特异性为95%、阳性预期值为81%、阴性预期值为91%;联合MCV、MCH检测后,敏感性为93%、特异性为83%、阳性预期值为64%、阴性预期值为97%。300例供者血样的地贫和G6PD突变基因检出率为11.3%、6.67%,共检出 8 种 α、β地贫基因型,-α3.7/αα、-α4.2/αα、-SEA/αα、αWSα/αα、αCSα/αα、αQSα/αα、βCD41-42M/β、βIVS-II-654M/β和 7 种 G6PD 突变位点,c.519G>A、c.1388G>A、c.1376G>T、c.392G>T、c.95A>G、c.592C>T、c.871G>A。在地贫基因携带与非携带的供者血样中MCV、MCH、EOF的差异有统计学意义(P<0.01),但G6PD酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。在G6PD突变基因携带与非携带中,MCV、MCH、EOF的差异无统计学意义(P>0.05),G6PD酶活性差异有统计学意义(P<0.01)。结论自动化散射比浊法测红细胞渗透脆性是一种满足临床分析性能要求的新方法。该方法本实验室的生物参考区间为男>73%、女>74%。该方法与MCV、MCH联合使用可显著提高地贫筛查的敏感性与阴性预期值。该方法在地贫高发区也有助于从献血者中简便地筛选出地贫携带者,为进一步保障输血安全,实现精准输血提供支持。

关键词： α地中海贫血   -α3.7和-α4.2缺失型α地中海贫血   HKαα   α珠蛋白三联体   Hb H病  

摘要： 目的和意义:探讨香港型地中海贫血基因（HKαα）及其复合缺失型α地中海贫血的临床表型和血液学特征,为临床诊疗提供依据。方法:对2021年5月至2022年3月在广西医科大学第一附属医院进行地中海贫血检测的病例,采用血细胞分析仪进行血液学分析,高效液相色谱法（HPLC）进行血红蛋白分析;采用跨越断裂点聚合酶链反应（Gap-PCR）方法和荧光PCR熔解曲线法（FCMA）进行α和β地中海贫血基因分析,采用Gap-PCR检测HKαα及反香港型地中海贫血基因（anti HKαα）。应用SPSS 22.0软件对所得数据进行分析。结果:1.一般资料:本研究检出的153例病例年龄范围在1个月至89岁,14岁以下儿童30人（19.6%）,成人123人（80.4%）。女性103例,占67.3%,男性50例,占32.7%。2.基因检测结果:（1）HKαα及anti HKαα的检测结果:153例病例中检出6例HKαα携带者,其中5例HKαα/αα、1例HKαα/-α;HKαα在153例病例中的检出率为3.92%（6/153）。153例病例中均未检出anti HKαα。（2）α-地中海贫血基因检测结果:检出58例-α3.7缺失型α地中海贫血杂合子(-α/αα);14例-α4.2缺失型α地中海贫血杂合子(-α/αα);7例-α3.7缺失型α地中海贫血复合-α4.2缺失型α地中海贫血双重杂合子(-α/-α);3例-α3.7缺失型α地中海贫血纯合子(-α/-α);及71例Hb H病(40例--/-α和31例--/-α)。未检出非缺失型α-地中海贫血基因突变。（3）β-地中海贫血基因突变分析结果:153例病例均未检出β-地中海贫血基因突变。3.血常规检测结果:（1）HKαα/αα和HKαα/-α的血常规结果:5例HKαα/αα的血常规结果:Hb 135.68±4.37g/L,MCV 86.25±4.05f L,MCH 28.47±1.12pg,MCHC330.48±3.75g/L。1例HKαα/-α的血常规结果:Hb 166 g/L,MCV 88.60f L,MCH 29.70 pg,MCHC 335.00 g/L。（2）-α/αα和-α/αα的血常规结果:53例-α/αα的血常规结果:Hb120.17±21.31g/L;MCV 79.40±6.89f L;MCH 25.98±2.48pg;MCHC327.09±10.77g/L。14例-α/αα的血常规结果:Hb 123.15±17.92 g/L;MCV81.77±6.62f L;MCH 26.71±2.80pg;MCHC 325.98±12.19 g/L（3）-α/-α和-α/-α的血常规结果:6例-α/-α的血常规结果:Hb 117.43±14.17 g/L;MCV 71.07±5.00f L;MCH 22.27±1.38 pg;MCHC313.57±5.85 g/L。3例-α/-α的血常规结果:Hb 111.90±46.65 g/L;MCV72.66±2.38f L;MCH 22.79±0.27 pg;MCHC 313.23±6.53 g/L。（4）Hb H病的血常规结果:40例--/-α的血常规结果:Hb89.43±8.92g/L;MCV 61.94±5.70f L;MCH 18.20±1.55pg;MCHC294.00（287.00,302.00）。31例--/-α的血常规结果:Hb 90.23±12.80g/L;MCV61.11±6.81f L;MCH 18.30±1.92pg;MCHC 300.01±11.55g/L。4.血红蛋白分析结果:（1）HKαα/αα和HKαα/-α的血红蛋白分析结果:5例HKαα/αα的血红蛋白分析结果:Hb A 2.86±0.05%;Hb F 0.36±0.11%。1例HKαα/-α的血红蛋白分析结果:Hb A 2.60%,Hb F 1.50%。（2）-α/αα和-α/αα的血红蛋白分析结果:53例-α/αα的血红蛋白分析结果:Hb A2.72±0.26%;Hb F0.5（0.3,0.75）。14例-α/αα的血红蛋白分析结果:Hb A2.76±0.32%;Hb F0.30（0.20,0.50）。（3）-α/-α和-α/-α的血红蛋白分析结果:6例-α/-α的血红蛋白分析结果:Hb A 2.74±0.11%;Hb F 0.84±0.71%。3例-α/-α的血红蛋白分析结果:Hb A 2.63±0.25%;Hb F 0.60±0.17%。（4）Hb H病的血红蛋白分析结果:40例--/-α的血红蛋白分析结果:Hb H 11.00±4.11%;Hb A 1.51±0.21%;Hb F 0.61±0.53%。31例--/-α的血红蛋白分析结果:Hb H 11.87±4.03