关键词:
早发冠心病
血瘀证
DNA甲基化
血脂
炎症因子
养心通脉方
子午流注
摘要:
目的观察养心通脉方子午流注法干预对早发冠心病(PCHD)血瘀证模型大鼠的效果,并从DNA甲基化差异基因表达角度探讨其作用机制。方法1)设空白组、造模组、养心通脉方组SD大鼠各3只,造模组、养心通脉方组大鼠以高脂饲料持续饲养+维生素D3灌胃+盐酸异丙肾上腺素皮下注射方法构建PCHD血瘀证大鼠模型。造模成功后养心通脉方组大鼠以养心通脉方溶液18 g/(kg·d)灌胃,空白组和造模组大鼠以0.9%氯化钠溶液4 ml/(kg·d)灌胃,3周后采集各组大鼠血清样本进行DNA甲基化测序,筛选相关DNA甲基化差异基因。2)另将PCHD血瘀证造模成功的大鼠随机分为模型组、养心通脉方子午流注干预组[养心通脉方溶液18 g/(kg·d)分别于心经时段(12:00)和心包经时段(20:00)两次灌胃]、养心通脉方对照组[养心通脉方溶液18 g/(kg·d)分别于8:00和18:00两次灌胃]和阿托伐他汀钙组[阿托伐他汀钙片溶液1.8 mg/(kg·d)灌胃,时间同养心通脉方对照组],另设空白对照组,每组8只。模型组和空白对照组以0.9%氯化钠溶液4 ml/(kg·d)灌胃,时间同养心通脉方对照组。灌胃3周后,检测各组大鼠血脂[包括总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)]水平,大鼠心肌组织及胸主动脉HE染色观察病理形态学改变,检测血清炎症指标[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)、白细胞介素10(IL-10)]水平,免疫沉淀-实时荧光定量PCR法检测心脏组织筛选差异基因相对表达量。结果1)筛选出差异甲基化区域的基因为钙调蛋白2(Calm2)、钙电压门控通道亚基α1s(Cacna1s)、磷脂酶Cβ1(Plcb1)。2)与空白对照组比较,模型组大鼠TC、LDL、TNF-α、LPS含量均升高,HDL、IL-10含量降低(P<0.05或P<0.01);HE染色显示心肌纤维明显肿胀,并伴有大量炎症细胞浸润,主动脉血管内壁增厚,内壁损伤,可见大量脂质胆固醇结晶,炎症细胞浸润明显。与模型组比较,养心通脉方子午流注干预组、养心通脉方对照组、阿托伐他汀钙组大鼠TC、LDL、TNF-α、LPS含量均降低,HDL、IL-10含量均升高(P<0.05),心肌组织损伤改善,炎性浸润减少,胸主动脉内膜损伤改善,脂质浸润减少。与养心通脉方对照组比较,养心通脉方子午流注干预组LDL、TNF-α、LPS含量降低,IL-10含量升高(P<0.05)。与模型组比较,养心通脉方对照组和养心通脉方子午流注干预组Calm2、Plcb1基因相对表达量降低、Cacna1s基因相对表达量升高(P<0.05);与养心通脉方对照组比较,养心通脉方子午流注干预组Calm2基因相对表达量降低、Cacna1s基因相对表达量升高(P<0.05)。结论养心通脉方于心经(12:00)、心包经(20:00)时段干预更能有效改善PCHD血瘀证模型大鼠血脂水平、抑制炎症反应和改善心肌组织损伤,Calm2、Cacna1s基因可能是养心通脉方干预PCHD血瘀证的关键靶点。