关键词： 脊灰病毒   层析纯化   凝胶过滤   离子交换  

摘要： 脊髓灰质炎(Poliomyelitis,以下简称脊灰)是由脊灰病毒(Poliomyelitis Virus,PV)感染引起、危害极大的急性传染病,尚无有效治疗方法,只能通过疫苗预防。口服脊灰减毒活疫苗(Oral Poliomyelitis Vaccine,OPV)因接种方便,成本相对较低而一度被广泛使用,但可能引起疫苗相关麻痹病例(Vaccine-Associated Paralytic Poliomyelitis,VAPP)和疫苗衍生株脊灰病毒(Vaccine-Derived Poliovirus,VDPV),灭活脊灰疫苗(Inactivated Poliomyelitis Vaccine,IPV)能有效避免 VAPP 和 VDPV,采用IPV取代OPV是《全球消灭脊灰战略终结计划》的要求。而在全世界消灭脊灰后,采用野毒株(Salk株)生产IPV对生物安全水平要求更加严格,因此WHO鼓励疫苗厂家研发Sabin株脊灰灭活疫苗(Inactivated Poliomyelitis Vaccine,Sabin strain,sEPV)。按我所现行sIPV生产工艺,病毒培养后进行病毒液收获、过滤澄清、超滤浓缩,获得的病毒浓缩液以Sepharose CL-6B凝胶和DEAE Sepharose FF离子交换填料进行纯化。当前我所纯化工序所用时间较长,为满足后续工艺规模,我们需要选择更高效和快速的凝胶介质。本研究通过按3%和6%两种柱体积上样量,依次对Sepharose CL-6B和Sepharose 6FF两种不同的凝胶填料进行脊髓灰质炎病毒的纯化比较,并完成后续的DEAE Sepharose FF离子交换层析。通过结果的比较分析,验证两种凝胶过滤填料对脊髓灰质炎病毒的纯化效果的影响,为改进sIPV生产工艺提供相应的数据支持。目的比较两种不同的凝胶过滤介质层析对Sabin株脊髓灰质炎病毒的分离纯化效果。方法将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒收获液各3批经超滤浓缩后,分别采用Sepharose CL-6B和Sepharose 6FF填料进行凝胶过滤纯化,分段收集各纯化峰,检测D抗原及蛋白含量,计算比活性、蛋白去除率及抗原回收率,确定病毒峰收集范围。然后,进一步利用DEAE Sepharose FF离子交换填料对凝胶层析纯化液进行纯化后,检测Vero细胞DNA、Vero细胞蛋白、牛血清白蛋白、卡那霉素等残留含量。结果Sepharose 6FF填料按6%柱体积上样进行凝胶纯化,纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒收获液抗原回收率均值分别为78.69%、78.03%和78.37%,与Sepharose CL-6B填料按3%柱体积上样(77.29%、78.60%和77.36%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。两种填料纯化的各型收获液再经离子交换纯化后,蛋白去除率、比活性、Vero细胞DNA残留量、Vero细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量、卡那霉素残留量检测结果均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求,两种填料纯化的各型收获液比活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用Sepharose6FF纯化的各型病毒纯化液抗原回收率和比活性与Sepharose CL-6B无明显差异,但Sepharose6FF可以增加上样量,从而减少层析纯化次数,大幅提高纯化效率,可用Sepharose6FF替代SepharoseCL-6B纯化脊灰病毒。

关键词： 脊髓灰质炎   疫苗   免疫效果  

摘要： 目的 了解山东省临沭县脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)接种后的免疫效果.方法 通过分层随机抽样、问卷调查和脊髓灰质炎病毒抗体水平检测,对全县儿童OPV免疫效果进行综合评价.结果 共检测我县10540例OPV接种0-15岁儿童血清样本,总体抗体阳性率为97.22％.不同年龄组抗体阳性率无差别,接种≤3次的儿童与接种≥4次的儿童在抗体阳性率方面有显著性差别.4-15岁儿童约1.31％没有进行加强接种.结论 临沭县儿童群体针对脊髓灰质炎病毒已经建立了较为牢固的免疫保障,在免疫常规工作中还需注意OPV加强剂次的接种工作.

关键词： 脊髓灰质炎   母传抗体   脊髓灰质炎减毒活疫苗   几何平均增长倍数  

摘要： 目的了解新沂市婴儿OPV（口服脊髓灰质炎减毒活疫苗）基础免疫的效果,探索脊髓灰质炎（脊灰）母传抗体对OPV效果评价的影响。方法以2009-2011年新沂市198名2月龄婴儿作为研究对象,OPV基础免疫,免疫前和免疫后1个月分别采集静脉血2 ml,采用微量中和法检测血清中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰的中和抗体,评价免疫效果。结果 2009-2011年的198名婴儿中,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰中和抗体的免疫后阳性率除2010年的Ⅲ型脊灰中和抗体为89.23%外,均能达到98%以上。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰免疫前中和抗体滴度<1∶8时,免疫后GMI（几何平均增长倍数）2009-2011年分别为357.74、279.71、93.75,288.67、185.07、50.09,138.64、139.32、43.60;免疫前滴度1∶8~<32时,GMI分别为58.71、42.24、33.34,92.04、61.91、2.94,46.17、27.71、10.84;免疫前滴度1∶32～1∶128时,GMI分别为5.34、21.77、5.66,4.59、8.00、1.80,10.68、14.49、1.15。结论脊灰母传抗体对其免疫效果有一定的干扰,母传抗体滴度越高免疫后抗体增长倍数越小。

关键词： 免疫原性   技术人员征集   规划专业   论文稿件   规划工作者   学术交流   科研技术   脊髓灰质炎疫苗   荣誉证书   接种异常反应  

摘要： 为促进免疫规划工作者学术交流和新技术应用,促进＂十三五＂期间免疫规划科研技术进一步创新发展,《预防医学》编辑部与浙江省预防医学会免疫规划专业委员会联合举办＂2017年免疫规划新技术征文活动＂,面向免疫规划专业技术人员征集论文稿件。经专家评审,对优秀论文作者予以奖励并颁发荣誉证书。

关键词： 疫苗接种   乙肝疫苗   新生儿   脊髓灰质炎病毒   小儿麻痹症  

摘要： 2017年3月8日晚,某微信公众号晒出了几张"关注疫苗安全"的文章评论截图,引起了广泛关注。引发争议的是该公众号2月27日发布的一篇已经被鉴定为谣言的文章。该谣言文章作者告诉人们:艾滋病是专家发明并通过疫苗传播的,被疯狗咬了也不能打狂犬病疫苗,否则会变笨、视力下降、记忆力衰退。总之,"所有的疫苗都是有害的",因此"不能给孩子注射任何疫苗,否则会留下终身残疾"。其实,妖魔化疫苗的文字不止这一篇,但它唤起了人们对2015年乙肝疫苗死亡案、2016年

关键词： 脊髓灰质炎   疫苗   强化免疫   效果分析  

摘要： 开展tOPV强化免疫活动是消灭脊髓灰质炎重要的策略之一.近年来强化免疫主要针对各大农贸市场、流动人口聚集地及免疫规划薄弱地区,使我州保持了高水平的脊灰疫苗接种率,有效阻断了脊灰野病毒传播.

关键词： 甲醛   Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)   灭活动力   二苯氧基乙醇   抑菌效力  

摘要： 根据世界卫生组织(WHO)1988年推出全球根除脊髓灰质炎行动,脊髓灰质炎病毒疫苗的全球使用是预防和脊髓灰质炎疫情控制的最有效的方法,有两个主要的脊髓灰质炎疫苗在世界上使用,即口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)和灭活的脊髓灰质炎疫苗(IPV)。然而,OPV由于保留一定病毒活性,它也偶尔会引起麻痹型脊髓灰质炎(VAPP)或疫苗衍生脊髓灰质炎病毒源循环(cVDPVs)病例的暴发。因此,为了避免长期使用OPV可能出现的毒力恢复,灭活脊髓灰质炎病毒疫苗(IPV)可能是一个必须的选择。国际上生产IPV的厂家均采用该病毒野毒株(Salk株)制备,使得在生产中对生物安全要求级别较高,增加了生产成本,因而价格昂贵,为此,WHO建议,使用脊灰减毒疫苗株(Sabin株)开发制备Sabin株灭活疫苗(Sabin inactivated poliovirus vaccine,sIPV)并在发展中国家进行推广使用,这将对实现全球最终根除脊灰目,并确保无脊灰状态的维持具有重要的意义。本论文旨在探讨sIPV规模化生产两个关键工艺过程(病毒灭活剂防腐剂的抑菌效果)中不同的灭活剂甲醛对病毒灭活效果和对抗原的影响;以及疫苗中加入防腐剂二苯氧基乙醇对抑菌效力的评价。为在实际生产过程中,建立甲醛灭活效果的内控方法和二苯氧基乙醇抑菌效力检测内控标准提供参考,为保证用于病毒灭活的甲醛和用于抑菌的二苯氧基乙醇符合工艺要求,同时,也为sIPV病毒灭活及疫苗防腐两个关键生产工艺中物料的质量控制及供应商筛选提供依据。本研究第一部分观察四个不同厂家的四种甲醛对脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株的灭活效果。用四种甲醛(终浓度为92.5μg/ml)对三批脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株进行灭活,采用微量滴定法测定病毒感染性滴度进行病毒灭活效果试验,绘制灭活动力曲线,并用ELISA法检测灭活病毒液D抗原含量。结果四种甲醛对三批脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株灭活后,病毒感染性滴度均成下降趋势。在37℃灭活1天滴度直线下降103CCID50/ml以上,灭活到第4天均检测不到病毒,灭活后的病毒液D抗原含量回收率均大于80%,且四种甲醛对三个型不同批次的脊髓灰质炎病毒灭活后抗原影响无差异(P>0.05)。结论四种甲醛对脊髓灰质炎病毒Sabin株样品灭活彻底,对脊髓灰质炎病毒Sabin株的D抗原破坏小,能较好地保持疫苗的有效成分,为甲醛质量控制及供应商筛选提供依据。本研究第二部分对Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabine IPV)中所添加的二苯氧基乙醇的抑菌效力进行确认。方法将大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉和白色念珠菌作为挑战菌株,分别加入到二苯氧基乙醇含量为5mg/ml的Sabin IPV中,在不同时间段检测样品中微生物的存活情况。结果二苯氧基乙醇含量为5mg/ml的Sabin IPV,可有效抑制微生物的生长繁殖;以2-苯氧乙醇作为防腐剂的Sabin IPV抑菌效力符合《中国药典》三部(2015版)抑菌效力的要求。结论可选择5mg/ml的二苯氧基乙醇作为Sabin IPV的抑菌剂。

关键词： 脊髓灰质炎疫苗   VAPP   诊断   IPV替代  

摘要： 目的 探讨基层接种脊髓灰质炎疫苗后发生的疑似疫苗相关脊灰病例(VAPP)调查诊断及有效处置方法.方法 通过回顾性调查研究,对病例脊髓灰质炎疫苗接种情况、临床资料、诊断结果以及AFP监测系统情况、适龄儿童脊髓灰质炎疫苗接种率、异常反应赔偿等进行分析论证.结果 泰州市医学会鉴定,结论为“属于疑似疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎(VAPP)病例,不排除系脊髓灰质炎减毒活疫苗预防接种异常反应”,由靖江市政府给予适当经济补偿.结论 进一步明确VAPP和疑似VAPP诊断标准,使用灭活脊髓灰质炎疫苗(IPV)代替脊髓灰质炎减毒疫苗(OPV)避免VAPP发生.

关键词： 脊髓灰质炎灭活疫苗   MAPREC实验   神经毒力决定位点   突变比率  

摘要： 随着全球消灭脊灰进程的推进,为了避免脊灰疫苗衍生病毒(Vaccine-derived Poliovirus,VDPV)和脊灰疫苗相关麻痹病例(vaccine-associated paralytic poliomyelitis,VAPP)的产生,WHO建议使用脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated Poliovirus Vaccine,IPV)逐渐替代OPV进行免疫,这也是《全球消灭脊灰战略终结计划》的要求。在sIPV的生产过程中,要求毒种和疫苗都必须保持减毒株的特性,严格控制其神经毒力。猴体神经毒力实验(Monkeys Neurovirulence Test,MNVT)被认为是Sabin株病毒和Sabin株疫苗神经毒力评价的重要指标和标准方法,但猴子资源有限,成本较高而且关系到伦理问题。MAPREC技术(Mutant Analysis by PCR and Restriction Enzyme Cleavage,MAPREC)是指用聚合酶链反应(PCR)和限制性内切酶裂解技术分析突变的方法,可以降低成本减少试验动物的使用量,主要用于神经毒力试验前的筛选。目前国外实验室对MAPREC方法的研究较多,国内虽有研究但未见文献报道,随着全球消灭脊灰计划的进展,大批量的疫苗需要进行神经毒力检测,WHO鼓励进行MAPREC方法的研究。目的:采用MAPREC实验检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine,Sabin strain,sIPV)生产时,病毒收获液中病毒神经毒力决定位点的基因突变情况,以评估疫苗神经毒力的回升情况,对疫苗的安全性进行评价。方法:①利用MAPREC技术检测疫苗株病毒Sabin Ⅰ型(480-A、525-C)位点,Sabin Ⅱ型(481-C)位点以及Pfizer Ⅲ型(472-C)位点在生物反应器中培养时的突变率。②在培养瓶中改变培养温度、感染系数(multiplicity of infection,MOI)、传代次数后,观察突变率的变化情况。结果:MAPREC技术能够检测出sIPV的病毒上述位点在正常培养条件下较低的突变率,当培养条件发生改变后,该方法检测出的这些位点的突变也随之改变。结论:MAPREC实验可以快速有效的检测脊髓灰质炎疫苗病毒收获液的基因突变率,从而确定疫苗的神经毒力是否通过标准,确保生产出安全有效的疫苗。

关键词： 雌激素受体信号通路   研究者   肺部   PI   减毒   疫苗   菌苗   小儿麻痹病毒   肠道病毒   脊髓灰质炎病毒   小鼠肺  

摘要： 肺部也能造血在一项新的研究中,通过在活的小鼠肺部使用视频显微镜,来自美国加州大学旧金山分校和加州大学洛杉矶分校的研究人员揭示,肺部在血液产生中发挥着一种之前未被识别出的作用。研究者发现肺部产生小鼠血液循环中的一半以上的血小板,即形成止血的凝块所需的血液组分。研究者还在小鼠肺部中鉴定出一种之前未知的造血干细胞库,当骨髓中的造血干细胞耗尽时,肺