关键词： 婴儿痉挛症   预防接种   分析  

摘要： 1 基本情况 患儿,女,2016年5月9日出生,散居儿童.第二胎第二产,37周剖腹产,出生体重3500克,无窒息抢救史,Apgar评分1分钟9分,5分钟10分.出生后满月以及3月龄健康检查均无异常.出生后接种卡介苗1剂、乙肝疫苗2剂、脊髓灰质炎疫苗减毒活疫苗1剂,接种后无不良反应.否认传染病、外伤手术、血液制品使用史;否认药物、食物过敏史.父母体健、非近亲结婚.母亲孕期血糖偏高(空腹5.7mmol/L),给予控制饮食后好转.无“癫痫”家族史,无家族性遗传病或传染病史.

关键词： 脊髓灰质炎病毒   结构蛋白   非结构蛋白  

摘要： 本研究进展主要从脊髓灰质炎病毒的基因结构,以及RNA编码的4种结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4,7种非结构蛋白2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D,以及连接蛋白VPg,分析对这些病毒蛋白功能机制上的研究进展.

摘要： 脊髓灰质炎是由脊髓灰质炎病毒引起的严重危害儿童健康的急性传染病,脊髓灰质炎病毒有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种血清型,主要侵犯中枢神经系统的运动神经细胞,以脊髓前角运动神经元损害为主.患者多为1岁～6岁儿童,主要症状是发热,全身不适,严重时肢体疼痛,发生分布不规则和轻重不等的弛缓性瘫痪,俗称小儿麻痹症.目前尚无特异的治疗脊髓灰质炎病毒感染的药物,接种脊灰疫苗是预防该病最经济有效的手段.随着口服脊灰减毒活疫苗推广,全球消灭脊灰行动取得了令人瞩目的成绩,我国也于2000年实现无脊灰目标,但我国周边其他国家仍然存在脊灰野病毒病例,存在野病毒输入与传播的风险,因此脊灰疫苗的预防接种尤为重要.

关键词： 脊髓灰质炎疫苗   接种   替代   影响  

摘要： 1.研究背景和目的全球自1988年实施消灭脊髓灰质炎（脊灰）行动计划以来,脊灰发病率大幅度下降,脊灰病毒流行的国家数量也逐渐减少,全球已然进入后脊灰时代。在全球控制脊灰过程中,脊灰减毒活疫苗（Oral Poliomyelitis Attenuated Live Vaccine,OPV）发挥了至关重要的作用,但日渐发生的疫苗相关麻痹型脊灰（Vaccine-associated Paralytic Poliomyelitis,VAPP）和脊灰疫苗衍生病毒（Vaccine-derived Polio Viruses,VDPV）引发的急性弛缓性麻痹病例（Acute Flaccid Paralysis,AFP）,成为后脊灰时代亟需解决的突出问题。使用含灭活脊灰病毒成分疫苗（Inactivated Poliovirus Containing Vaccine,IPCV）逐步取代OPV是减少和控制VAPP和VDPV的最有效方法。2012年,为消灭包括VAPP在内的所有脊灰病例,世界卫生组织（WorldHealth Organization,WHO）制定了《2013～2018年消灭脊髓灰质炎终结战略计划》,明确了消灭脊灰的时间表和免疫策略调整相关内容,提出在维持高水平PV接种率的基础上,全球阻断脊灰野病毒传播后,所有国家应至少使用1剂脊灰灭活疫苗（Inactivate Polio Vaccine,IPV）。中国于2009年和2011年引入IPV、无细胞百白破、灭活脊灰和流感嗜血杆菌联合疫苗（Diphtheria,Tetanus,Pertussis,Poliomyelitis Vaccine and Haemophilus Influenzae Type b Conjugate Vaccine,DTaP-IPV/Hib）,该两种 IPCV均属于自愿自费接种的二类疫苗,人群IPCV接种使用水平较低,与已将IPCV纳入免疫规划的国家如美国、法国等国家相比差距较大。2016年5月1日开始,中国依据国情调整PV免疫策略,与全球150多个国家同步将首剂IPV纳入扩大国家免疫规划（Expanded Program on Immunization,EPI）中,由4剂次三价OPV（Trivalent OPV,tOPV）调整为1剂次IPV和3剂次二价OPV（BivalentOPV,bOPV）的免疫程序,这一变化是中国免疫规划政策重要的事件,预期对个人脊灰疫苗疫苗行为影响深远。本研究通过分析鄞州区1～7岁儿童PV接种行为特征,掌握脊灰疫苗免疫策略调整前儿童PV接种率、IPCV替代接种率及基础免疫程序构成情况,为调整PV免疫策略后的效果评价提供基线数据;此外通过比较分析免疫策略调整前后6个月儿童脊灰疫苗接种行为特征的变化情况,评价免疫策略调整对儿童PV接种行为特征的影响,探讨免疫策略调整实施效果的相关因素,提出适合鄞州区的促进免疫策略转换积极影响的脊灰疫苗接种策略。2.材料与方法于2015年12月31日通过“宁波市免疫规划信息管理系统”导出2008-2014年出生儿童个案资料的access数据库,运用描述性流行病学方法对不同地区和人群的PV接种情况进行统计分析。分别于2016年4月30日、2016年11月30日对鄞州区23个乡镇的2001名和2005名5～7月龄儿童儿童的PV接种情况开展调查,内容包括一般人口社会学特征:性别、年龄、现住址、户籍地址、户籍类型等;（2）PV基础免疫接种情况:PV1接种、PV1-3全程接种、IPCV1替代接种、IPCV1-3全程替代接种、PV1接种疫苗种类、PV1-3免疫程序类别等情况。运用Excel 2010软件建立数据库,采用SPSS19.0软件对儿童脊灰疫苗接种行为特征及免疫策略调整的影响评价进行描述流行病学统计分析、单因素采用χ2检验、多因素采用多因素非条件Logistic回归分析。3.研究结果3.1鄞州区儿童脊髓灰质炎疫苗接种行为特征鄞州区2008年1月1日至2014年12月31日出生儿童为125555人,PV1接种率为99.99%,PV基础免疫全程接种率为99.92%;完成PV1接种的儿童中,IPCV1接种替代率为17.29%,各年龄段儿童的IPCV1接种替代率在0.16%～43.78%之间,随着年龄增长呈下降趋势（χ2趋势=21683.81,P<0.001）,不同户籍类型、居住地区儿童之间比较差异具有统计学意义（P<0.05）;完成PV基础免疫全程接种儿童中,IPCV1-3全程替代率为16.42%,2014年出生儿童IPCV1-3全程替代率最高,为42.28%,2009年出生儿童最低,为0.08%,IPCV1-3全程替代率随年龄增长呈下降趋势（χ2趋势=21039.53,P<0.001）,Logistic回归分析结果显示,本

关键词： 脊髓灰质炎病毒   Sabin株   假病毒   制备  

摘要： 脊髓灰质炎病毒(Poliovirus),简称脊灰病毒,属微小核糖核酸(RNA)病毒科(Picomaviridae),是无包膜的单股正链RNA病毒。因为疫苗的接种脊髓灰质炎的流行得到了有效的控制,消灭脊灰后包括减毒株在内的所有活病毒都要被封存,在脊灰后时代探索脊灰假病毒评价人体免疫力的效果具有重要价值。本研究建立了构建Sabin II型的假病毒颗粒PVS2的方法,并对PVS2的生物学特性进行研究,确定其用于后续实验的有效性,为后期利用假病毒进行中和实验奠定了基础。实验研究中,通过同源重组法构建表达衣壳蛋白的质粒pcDNA-P1-S2和含有报告基因的骨架质粒pRepGL。然后分别利用体内和体外合成的Replicon制备假病毒:依次转染 pcDNA-P1-S2 与由 pRepGL 体外转录的 Replicon RNA;共转染 pcDNA-P1-S2、pRepGL和表达T7 RNA聚合酶的质粒pCAG-T7-puro,两种方法得到的PVS2荧光素酶活性无显著差异。从转染试剂、培养基成份、293T的胞龄、质粒的比例4个方面进行探索后,PVS2的荧光素酶活性为1.2×105RLU。收获的假病毒PVS2经鉴定是直径约30 nm的颗粒,形态结构与原病毒相似,具血清特异性,可与中和抗体有效结合,制备的假病毒可以通过荧光素酶和荧光蛋白的活性检测假病毒滴度,其中荧光素酶检测灵敏度较高,用该方法检测PVS2的滴度为4.0 LgIU/mL。同时以SabinⅡ型的replicon为母本,与SabinI型和III型的衣壳蛋白P1基因重配,获得的重组病毒用不同型别的抗体检测后确定具有血清特异性。综上所述此次研究对转染条件进行了探索并首次建立了运用胞内转录的Replicon RNA制备Sabin株脊灰病毒假病毒颗粒的方法,制备得到的Sabin假病毒颗粒PVS2的形态、血清型和抗原性与Sabin株活病毒相似;II型Replicon与SabinI型、III型的衣壳蛋白P1基因重配后获得了具血清特异性的重组I、III型假病毒颗粒Re-PVS1、Re-PVS3。

关键词： 脊髓灰质炎   疫苗   减毒   灭活   序贯程序   抗体水平  

摘要： 目的评价脊髓灰质炎灭活疫苗（IPV）和减毒活疫苗（OPV）不同序贯免疫程序的免疫效果。方法选取月龄≥2月的婴儿,分为1剂IPV和2剂OPV序贯组（I-O-O组）、2剂IPV和1剂OPV序贯组（I-I-O组）、IPV全程（I-I-I组）和OPV全程组（O-O-O）,分别在2、3、4月龄时各接种1针,检测并比较各组人群血清中脊髓灰质炎中和抗体几何平均滴度（GMT）及抗体阳转率。结果在完成基础免疫后,I-O-O组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体GMT分别为948.78、930.91、955.08;I-I-O组抗体GMT分别为909.43、1 202.34、1 102.83;I-I-I组GMT分别为333.02、298.56、411.98,O-O-O组抗体GMT分别为814.42、778.27、658.52;差异均有统计学意义;各组3个型别的抗体阳转率均为98%100%,差异无统计学意义。接种1针IPV后脊髓灰质炎Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型中和抗体GMT分别为21.77、30.89、26.46,抗体阳转率分别为84.1%、91.5%、91.5%;接种第2剂IPV后,Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型中和抗体GMT分别69.42、133.89、212.58,抗体阳转率分别为100.0%、100.0%、99.9%。结论 IPV与OPV序贯接种后,对象产生的脊髓灰质炎中和抗体GMT比单独接种3剂IPV或3剂OPV高;不同序贯程序中,接种2剂IPV后抗体保护率较高。为了使机体产生更高的抗体水平并且避免疫苗相关麻痹病例发生,可采用IPV与OPV序贯程序,并以2剂IPV和1剂OPV的序贯程序为佳。

关键词： 株脊髓灰质炎病毒D抗原   药物检测   双抗体夹心   标准曲线  

摘要： 脊髓灰质炎是一种以肢体麻痹为主要症状的急性肠道传染病。该病无有效治疗手段，只能通过接种脊髓灰质炎疫苗进行预防。国内外广泛使用的脊髓灰质炎疫苗有两种:口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)和脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)。OPV的研制和使用为控制脊髓灰质炎的发病和流行做出了巨大贡献，但OPV本身具有潜在的致病风险。因此，在全球消灭脊髓灰质炎的最后阶段必将使用最为安全的IPV替代OPV。目前，国际上使用的IPV均是采用脊髓灰质炎野病毒株生产的，该疫苗在生产方面存在生物安全问题。所以，WHO推荐研发IPV的企业采用减毒的Sabin株生产IPV疫苗(sIPV)。脊髓灰质炎病毒有3个血清型，即Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。3个型别的病毒都含有D抗原和C抗原，其中只有D抗原为中和抗原，可诱导机体产生抗体。因此，D抗原是IPV疫苗体外效力的关键指标。而在sIPV的研制和生产过程中建立D抗原特异性定量检测方法尤为关键。为了确保所建立的D抗原含量检测体系能够获得稳定、可靠和准确数据，对于该方法的验证就起着极为重要的作用。通过方法验证的数据可以分析判断该方法的可信性、可靠性和一致性。从而为sIPV生产过程中的质量控制和质量管理提供依据，确保疫苗安全有效。　　本研究采用北京北生研生物制品有限公司建立的3个型别Sabin株D抗原多克隆抗体ELISA检测体系，并对该检测方法进行验证。该方法使用Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒D抗原分别免疫豚鼠和家兔，制备抗脊髓灰质炎病毒D抗原多克隆抗体，经纯化后以辣根过氧化物酶进行标记，通过条件优化确定了最佳包被抗体浓度和酶标抗体浓度，从而建立了双抗体夹心ELISA法检测系统，并确定了该方法的线性围及灵敏度。为了能够更好的验证该方法的适用性，按照北京北生研生物制品有限公司IPV的生产工艺规程，分别模拟四个质量控制阶段，以这四个阶段不含有D抗原的其它成分作为样品背景，在每种样品背景中加入各型别已知量的D抗原标准品，制备成高、中、低三个浓度的样品，分别对该方法的线性、准确性、精密性、专属性和耐用性这五个方面进行适用性的验证。　　该3个型别检测方法的标准曲线的线性相关系数R2均大于0.97。3个型别检测方法对已知D抗原含量样品的回收率在80～120％之间。对同一样品多次检测结果的变异系数小于10％。对于不同试验人员，在不同时间对3个型别同一浓度样品的检测结果的变异系数小于10％。在反应温度（37±2℃）范围内该检测方法的耐用性良好，且具有良好的专属性。　　由北京北生研生物制品有限公司建立的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)D抗原含量检测方法适用于该公司生产的sIPV中D抗原含量的检测。

关键词： 减毒活疫苗   OPV   IPV   脊髓灰质炎病毒   疫苗接种  

摘要： 这几年,国内每隔一段时间就会出现疫苗风波,一些妖魔化疫苗的言论就乘机随之传播开了。最近在网上流传一个说法,说是一位经济学家说的,据说中国疫苗接种非常落后,还在用减毒活疫苗,而国外十几年前就全部改成灭活疫苗了,安全性好太多了。很多人问我是不是真的如此?经济学家对疫苗的了解未必比一般人强。但是很多人在科学问题上不听专业人士的,却相信名人。不管是经济学家、电视主持人还是所谓

关键词： poliovirus   2C   晶体结构   锌指   抗病毒  

摘要： 脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)是脊髓灰质炎的病原体,可侵犯中枢神经系统,损害脊髓前角运动神经细胞。PV属于微小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus,EV),它的基因可以编码一个约250 kDa的前体蛋白(polyprotein)。病毒前体蛋白被自身的蛋白酶2A和3C切割形成11个成熟的具有功能的蛋白,其中包括4种结构蛋白(衣壳蛋白):VPO,VP1和VP3,以及7种非结构蛋白:2A,2B,2C,3A,3B,3C和3D。非结构蛋白2C及其前体蛋白2BC介导了病毒感染的细胞中膜组分的变构与基于膜结构的病毒复制复合物的组装,此外,还参与了包括病毒的脱衣壳、天然免疫逃逸和病毒衣壳的形成等病毒生命周期中的重要过程。2017年关洪鑫博士等解析了EV71 2C 116-329的结构,这项研究成果填补了多年来2C结构信息方面的空缺。本课题成功解析了 PV2C116-329的2.55A的高分辨率晶体结构,这是我们继EV71后解析的第二个微小核糖核酸病毒科的2C蛋白结构。解析的2C蛋白结构当中包含三个subdomain:ATPase结构域,锌指结构域和一个长的C末端两亲性α螺旋(或pocket binding domain,PBD)。其中ATPase结构域和锌指结构域之间的疏水氨基酸形成了一个疏水性的“口袋(pocket)”。这两个结构的不同之处在于锌指结构的构造,EV71的锌指有三个配体,而PV的锌指结构有四个配体。与EV712C蛋白的结构相似的是,PV 2C的C末端两亲性α螺旋通过疏水相互作用与相邻的一个2C蛋白的疏水性“口袋”相互结合,在晶体中同样是以多聚体的形式存在;与此同时分子筛柱层析的实验结果表明PV2C在溶液中是以四聚体的形式存在的。我们挑选了参与构成三个结构域的关键氨基酸进行单点突变,检测其突变体的ATPase酶活性,结果表明这种寡聚化形式是2C蛋白发挥ATPase活性的结构前提。我们知道AAA+ATPase超家族的蛋白通常会形成环状六聚体结构来行使功能,2C蛋白属于该家族成员,并且电镜学研究也表明2C蛋白可以形成环状结构,因此我们推测PV 2C也会形成环状六聚体结构。我们以SV40 Large TAntigen(LTAg)的六聚体为模版,参考EV71 2C 116-329的六聚体模型,模拟构建了 PV2C的六聚体模型。并且我们以该模型为模版,把之前发现的所有的与功能相关的位点以及抑制剂抗性位点都定位到了这个六聚体模型上,这便为进一步深入探讨2C的功能提供了重要的结构生物学基础,同时这个研究成果也将为设计靶向2C抑制剂研发提供了重要的科学依据。

关键词： 单克隆抗体制备   脊髓灰质炎病毒   Vero细胞系  

摘要： 脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)是脊髓灰质炎的病原体。主要是通过侵犯中枢神经系统,引发弛缓性肌肉麻痹。自1988年由世界卫生组织(WHO)提出的“到2000年全球消灭脊髓灰质炎”的决议后,脊髓灰质炎病例减少了99%以上,从当时估计的35万例减至2013年报告的416例;脊髓灰质炎流行国家从1988年的125个减少至2017年的2个(巴基斯坦、阿富汗),世界正处于根除脊髓灰质炎的边缘。脊灰病毒单克隆抗体对于病脊灰病毒流行病学监视、疫苗免疫水平评估和衍生型病例研究具有重要的意义。本论文对脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体的制备进行了探讨。用Vero细胞成功增殖出脊灰病毒Sabin株I型,通过逆转录扩增病毒RNA的VP1基因、同时送于湖北省疾病预防控制中心鉴定,确定了该病毒为脊灰病毒Sabin株I型。Reed-Muench法测得用Vero细胞增殖脊灰病毒效价为108.217TCID50/0.1m L。同时分别扩增了脊灰病毒Sabin株I型、II型和III型并进行了效价的测定,I、II、III型病毒液接种细胞基本在4～5天内出现完全CPE。收集1 L脊灰病毒Sabin株I型培养液,通过PEG浓缩。再经过蔗糖密度梯度离心纯化病毒。SDS-PAGE电泳验证了病毒的结构蛋白VP1、VP2、VP3的存在。纯化病毒蛋白含量为2.764 mg/m L。用纯化的脊灰病毒Sabin株I型,按每2周一次免疫、第4次加强免疫SPF级Balb/c小鼠(6～8周龄、雌性),共免疫4批次小鼠。通过方阵滴定试验确定了抗原的最佳包被浓度,建立筛选抗体的方法间接ELISA,半数小鼠免疫血清效价达到6,400以上。在第4次免疫后的第4天,取免疫小鼠免疫脾淋巴细胞,与骨髓瘤细胞(SP2/0-Ag14)经过PEG融合,六次的细胞融合率分别为15.63%、3.12%、66.49%、33.33%、46.65%、14.21%;利用间接ELISA法筛选到8株阳性杂交瘤细胞,并通过有限稀释法克隆得到1株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株G8G7;细胞培养法制备的单抗,利用间接ELISA测得抗体效价为1:8,中和试验测得中和抗体效价为1:58。