关键词： 脊髓灰质炎病毒   纯化   蛋白成分  

摘要： 目的对本公司研发的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒纯化液进行蛋白成分分析及鉴定。方法按照疫苗生产工艺,应用NBS篮式生物反应器生产单价脊髓灰质炎病毒原液,经超滤浓缩及分子筛和阴离子交换两步柱层析纯化方法,收集并灭活蛋白峰。透射电镜下观察病毒形态及大小;ELISA方法检测宿主细胞蛋白（host cell protein,HCP）及残留牛血清白蛋白含量;HPLC法分析单价灭活病毒纯化液纯度;液相色谱（liquid chromatography,LC）与电喷雾电离质谱（electrospray ionization-mass spectrometry,ESI-MS）相结合的技术鉴定样品中所含蛋白成分。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒纯化液中可见球形病毒颗粒,直径25-30 nm;HCP、残余牛血清白蛋白含量分别低于50 ng/ml、2.5μg/ml;纯度大于95%;单价脊髓灰质炎病毒样品中含有相应血清型的脊髓灰质炎病毒基因组编码蛋白,且相应病毒蛋白成分数据库匹配相对分值在所含蛋白组分中均最高。结论Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒液经纯化后,有效去除了杂质蛋白保留了病毒蛋白组分,单价病毒纯化液病毒蛋白成分明确,纯度较高,为后续该疫苗的研发与生产提供了参考。

关键词： 口服脊髓灰质炎减毒活疫苗   疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎  

摘要： 目的分析河南省口服脊髓灰质炎（脊灰）减毒活疫苗（OPV）接种后疫苗相关麻痹型脊灰（Vaccine-associated Paralytic Poliomyelitis,VAPP）病例发生规律,为其防控措施制定提供科学依据。方法采用描述性分析方法对河南省2004-2015年VAPP病例进行分析。结果 2004-2015年河南省共报告VAPP病例26例,发生率为0.16/100万剂次;其中首剂OPV接种后VAPP 20例（73.08%）,发生率为1.11/100万剂次。发生数男女性比为5.5∶1。23例（88.46%）为2-6月龄儿童。接种至麻痹平均时间间隔为23天。病例麻痹部位主要为双下肢、单下肢。麻痹60天后随访均有残留麻痹。14例（53.85%）病例合并其他疾病,其中9例合并肛周脓肿。在13例脊灰疫苗病毒分离阳性的VAPP病例中,Ⅱ型占61.54%。结论 VAPP病例以低月龄、首剂OPV接种儿童为主。应密切关注脊灰疫苗免疫策略调整后VAPP发生情况。

关键词： 肠道病毒   脊髓灰质炎病毒   药物研究进展   病毒基因组   轻度症状   甲型肝炎病毒   病毒科   解螺旋酶   口服生物利用度   临床试验阶段  

摘要： 人类肠道病毒（EVs）是小RNA病毒科下的一属病毒,通常在夏秋季节爆发流行。在肠道病毒中,目前只有脊髓灰质炎病毒（PV1-3）、甲型肝炎病毒（HAV）和肠道病毒71型（EV71）有相应的疫苗,仍有超过110种的肠道病毒对人类健康造成巨大威胁。

关键词： 脊髓灰质炎灭活疫苗   免疫规划   认可度  

摘要： 目的了解儿童监护人对脊髓灰质炎（脊灰）灭活疫苗（IPV）纳入国家免疫规划（NIP）的认识和有关政策了解情况,为中国脊灰疫苗转换宣传沟通提供依据。方法在天津市、吉林省、湖北省、广东省、宁夏回族自治区,通过省级预防接种信息系统随机抽取500名0-1岁儿童的监护人,借助12320卫生热线平台开展IPV纳入NIP认可程度电话调查。结果实际调查2 198名儿童监护人,有效调查问卷完成95.6%。89.26%调查对象知道口服脊灰减毒活疫苗（OPV）,49.95%知道OPV可以预防脊灰。20.2%知道IPV,仅14.79%知道IPV可以预防脊灰。仅5.28%调查对象知道OPV能引起疫苗相关麻痹型脊灰（VAPP）,知道IPV局部接种反应调查对象比例为3.78%。如果IPV自费,58.83%的儿童监护人会自愿接种;如果IPV免费接种,有88.67%愿意接种,80.57%的儿童监护人愿意接种国产IPV。近10.79%的调查对象知道国家拟计划将IPV纳入常规免疫。当IPV短缺时,82.0%愿意听从医生安排。通过接种点医生来获得疫苗接种有关信息占84.2%。结论儿童监护人对OPV和其预防作用了解较多,但对IPV了解较少,IPV纳入NIP政策知晓率低。监护人愿意为儿童接种IPV,对预防接种人员的安排依从性较好。儿童监护人支持IPV纳入NIP,预防接种人员应将此政策充分告知儿童监护人。

关键词： 脑内法神经毒力试验   脊髓灰质炎疫苗   病理学评价  

摘要： 目的探讨脊髓灰质炎疫苗脑内法猴体神经毒力试验病理评价方法。方法采用恒河猴双侧丘脑内注射给药,观察21 d后进行解剖,完整取出脑和脊髓,经修切后脱水包埋,切片经HE染色和没食子蓝染色后在光镜下观察,对神经组织病变进行评分,根据分值对病变严重程度进行判定。本研究涉及12批实验中的240动物。结果本方法对左右大脑包括针迹在内的不同部位、中脑、小脑、脑桥、延髓、颈膨大、腰膨大进行取材,参照脊髓法神经毒力试验病理学评价的半切面评分方法,对双侧脑干、颈髓和腰髓的病变进行评价并计分,根据平均分值并结合具体病变情况分别判定此3个部位的病变程度。本研究中特异性的神经系统病变的发生率15%。各型疫苗病变发生率相似,轻微病变出现的比例最高。较严重的病变主要见于Ⅲ型疫苗。结论在脑内法神经毒力试验中,用半切面评分方法对病变进行评分,较客观地反映了神经系统病变的情况,方法简便易行,实用性较强,利于判断标准的统一,可作为脊髓灰质炎疫苗脑内法神经毒力试验病理学评价方法的参考。

关键词： 脊髓灰质炎病毒   病毒颗粒   免疫原性  

摘要： 目的评价不同形式的脊髓灰质炎病毒（poliovirus,PV）颗粒的免疫原性。方法采用蔗糖密度梯度超速离心法分别将经56℃加热1.5 h处理和未经加热的PV进行分离纯化,收集相应组分,进行电镜观察及SDS-PAGE分析,并测定各组分的D抗原及蛋白含量。用不同PV颗粒组分分别免疫大鼠,均经腿部肌肉注射,共接种3次,每次间隔21 d,于免疫前和第1、2次免疫后21 d经眼眶采血,末次免疫后21 d经心脏穿刺采血,分离血清,微量细胞病变（CPE）抑制法检测血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV中和抗体几何平均滴度（GMT）。结果未经加热处理的PV可分离获得EP（蔗糖浓度16%~19%）和FP（蔗糖浓度22%~24.5%）两种病毒颗粒,电镜观察分别为空心颗粒和实心颗粒,EP经SDS-PAGE分析可见VP0、VP1和VP3病毒蛋白条带,FP可见VP1、VP2、VP3和VP4条带;经56℃加热处理的PV可分离获得HP（蔗糖浓度15%~17%）一种病毒颗粒,电镜观察为空心颗粒,SDS-PAGE分析可见VP0、VP1、VP2、VP3病毒蛋白条带。EP、FP免疫大鼠后,均可诱导产生针对PV的中和抗体,但EP诱导产生的中和抗体GMT低于FP;HP不能诱导产生中和抗体。结论未经加热的PV可分离获得EP和FP两种病毒颗粒,均具有免疫原性;经加热处理的PV仅分离获得HP一种病毒颗粒,不具有免疫原性。

关键词： 随机对照试验   灰质   脊髓   免疫原性   疫苗   口服   补锌   巴基斯坦  

摘要： 在巴基斯坦，根除脊髓灰质炎仍是一项挑战，消灭脊髓灰质炎失败的原因是复杂的。在巴基斯坦，营养不良和微量营养素缺乏，尤其是锌缺乏，是主要的公共健康问题，可能潜在影响肠道疫苗的免疫应答，包括口服脊髓灰质炎疫苗。

关键词： 急性弛缓性麻痹   脊髓灰质炎病毒   脊髓灰质炎病毒疫苗,口服   序列同源性  

摘要： 目的检测2011—2014年河北省急性弛缓性麻痹（AFP）病例粪便标本中的脊髓灰质炎（脊灰）病毒，并对其VP1基因核苷酸序列进行同源性分析。方法收集2011—2014年河北省AFP监测系统中登记的15岁以下出现AFP症状的1504例病例的粪便标本，每份5g，共3001份（1497例采集双份标本，7例采集单份标本）。采用Real-time PCR对分离到的脊灰病毒进行核酸提取及RNA检测，采用逆转录PCR扩增脊灰病毒VP1基因片段，并对扩增产物进行核苷酸序列测定，以构建系统进化树，与Sabin疫苗株进行同源性比较。采用χ^2检验比较不同年份脊灰病毒阳性率的差异。结果3001份粪便标本共分离到脊灰病毒50株，阳性率为1.7%，其中Ⅰ型10株，Ⅱ型15株，Ⅲ型16株，混合型9株；2011—2014年脊灰病毒阳性率分别为1.0%（9/890）、1.4%（12/824）、2.2%（17/770）和2.3%（12/517）（χ^2=2.24，P=0.525）。VP1基因核苷酸和氨基酸序列同源性分析显示，脊灰病毒Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型株核苷酸序列与Sabin疫苗株的同源性分别为98.8%-100%、99.1%-100％和99.2%-100%，氨基酸序列同源性分别为98.6%-100%、98.3%-100％和98.6%-100%。VP1基因进化分析显示，脊灰病毒Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型株的变异率分别为0.66%、0.66％和0.55%。结论2011—2014年河北省检测出的脊灰病毒除1份为Ⅱ型疫苗衍生脊灰病毒外，其余均为脊灰疫苗类似株，均与Sabin疫苗株具有较高的同源性。

关键词： 呼吸道病毒   快速检测方法   细胞培养技术   脊髓灰质炎病毒   救援   灾后   狂犬病病毒   鸡瘟病毒  

摘要： 病毒学是一门起步较晚的学科,1898年荷兰人Beijerink证明烟草花叶病是由滤过性病原引起,奠定了病毒是一种新的微生物的基础。在此后10多年内相继发现了包括鸡瘟病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒和劳斯肉瘤病毒等10多种病毒。二十世纪30年代,实验动物、鸡胚和细胞培养技术的产生,成功地分离和培养了许多动物病毒,对病毒的检测方法起到巨大的推动作用。

关键词： 脊髓灰质炎病毒   实时荧光定量RT-PCR   应用发展  

摘要： 1996年美国Applied Biosystems公司推出了实时荧光定量PCR技术,该技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法[1-2]。该技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,可动态实时检测核酸产物的形成,无需后处理过程,避免了扩增产物的污染,而且具有直观、重复性好、特异性强、敏感性高、定量准确、自动化程度高、速度快、全封闭和易操作等优点,因而目前已得到广泛应用[3-4]。