摘要： 琼卫疾控〔2020〕1号各市、县、自治县卫生健康委，洋浦经济开发区卫生计生局，省疾控中心：根据我国脊髓灰质炎传染病防控需要，近日国家卫生健康委、财政部、工业信息化部、药监局联合下发了《关于国家免疫规划脊髓灰质炎疫苗和含麻疹成分疫苗免疫程序调整相关工作的通知》(国卫疾控发〔2019〕65号)，决定自2019年12月起，在全国范围内实施2剂次脊髓灰质炎灭活疫苗和2剂次脊髓灰质炎减毒活疫苗的免疫程序。为确保我省免疫规划脊髓灰质炎疫苗免疫程序调整工作顺利进行，我委制定了《海南省免疫规划脊髓灰质炎疫苗免疫程序调整暨脊灰疫苗“2+2”免疫程序实施方案》，请各市县、各有关单位按方案要求，

关键词： 脊髓灰质炎病毒   Ⅱ型   假病毒   中和抗体   免疫原性  

摘要： 自1988年全球实施根除小儿麻痹症计划以来,经过世界各国的努力取得了瞩目的进展,野生毒株引发的小儿麻痹症病例下降了99.9%。在三个型的野生脊髓灰质炎病毒(wild poliovirus,WPV)中,Ⅱ型(WPV2)最后一例病例发生在1999年,以后再也没有发生WPV2感染所致的麻痹,并于2015年被全球消灭脊髓灰质炎认证委员会(the Global Commission for the Certification of Poliomyelitis Eradication,GCC)宣布在全球范围内消灭;Ⅲ型野毒株也于2019年宣布全球消灭。但只要减毒活疫苗(attenuated oral polio vaccine,OPV)使用就不可避免的会出现服苗者将Ⅱ型减毒株经肠道复制后排到环境中,引发循环疫苗衍生脊髓灰质炎病毒(Circulating Vaccine Derived Poliovirus,cVDPV)的发生。为此,在2016年全球实现了将Ⅱ型疫苗株从常规三价口服脊髓灰质炎病毒疫苗(the trivalent oral polio vaccine,tOPV)中撤出。但脊灰病毒属于肠道病毒,以往服苗排放到污水中的病毒可存活一定时间,环境中的病毒偶然感染人群。甚或,口服疫苗感染免疫缺陷患者中,可以长期带毒并可在复制过程中产生变异恢复野生脊髓灰质炎病毒(immunodeficiency-associated vaccine-derived poliovirus,iVDPV)的神经毒力和传播特性。所以,cVDPVs和iVDPV的变异引起人们的担忧。出于生物安全考虑,将实施全球性的Ⅱ型脊髓灰炎病毒(poliovirus type 2,PV2)封存,只允许在WHO认可的少数几个P3实验室中使用,将给以中和抗体评价群体免疫力带来不便。我们采用生物信息学预测OPV2的中和抗原变异,并制备假病毒和免疫动物,进行了免疫原性及其交叉中和活性研究。研制假病毒来替代活的脊髓灰质炎病毒用于中和试验,建立安全可靠的免疫力评价新方法对脊灰根除的最后阶段维持无脊灰状态具有重要意义。本文构建Ⅱ型Sabin PV假病毒颗粒(简称pseudo-S-Ⅱ),通过Westren分析、感染性测定和电镜形态观察等研究,发现其免疫原性与感染性病毒颗粒相近,直径大小约30 nm。使用Ⅱ型病毒和pseudo-S-Ⅱ进行中和试验测定40份血清样本中的特异性中和抗体,其平均几何效价分别为36.47、55.90,相关性好(R2=0.87),无统计学差异。进行11次独立重复试验,95%置信区间为2012.37-2828.36,CV 值为 0.29。美国疾控中心选用免疫缺陷病人分离的一株Ⅱ型iVDPV(iVDPV2)与OPV、Sabin IPV(sIPV)和Salk IPV(wIPV)疫苗人体免疫血清进行交叉中和试验发现中和活性显著降低。本研究通过生物信息学技术等对这株iVDPV的VP1、VP2和VP3主要中和位点进行分析,发现其主要中和位点的一级氨基酸结构中有16个氨基酸位点发生改变,其中有13个氨基酸发生带电性质或极性的改变。以 Poliovirus type 2(strain Lansing)(PDB 序列号:1EAH)为模板使用同源建模SWISS MODEL预测iVDPV2、SabinⅡ的衣壳蛋白构像。使用Pymol 2.1软件显示预测构像。VP1的679和680,VP2的141三个氨基酸残基的改变影响了病毒中和位点的空间构象。本研究对三个位点进行定点突变构建11株突变假病毒,分别与兔抗SabinⅡ多抗和接种过脊灰疫苗的人血清进行中和试验,发现突变都会影响血清交叉中和能力,其中抗血清对RA141679S的突变组合交叉中和效价下降最显著(p<0.001)。以上11株假病毒分别与脊髓灰质炎病毒受体(human poliovirus receptors,hPVRs或CD155)进行亲和力测定,结果显示VP1的679位氨基酸的改变(突变为D或缺失)能增加与CD155的结合能力,推测PV2的VP1,679位氨基酸对中和位点和受体结合位点均有影响。鉴于脊灰疫苗对个别VDPV2保护性差及VP1的679位氨基酸和VP2的141位氨基酸对中和位点的影响不同。制备R141S,A679D,A679缺失假病毒,纯化后各免疫6只Wistar大白鼠。R141S突变体免疫动物血清与PV2产生交叉中和作用。R141S突变体免疫动物的抗血清与MEF-1、Sabin PV2和4株VDPV2假病毒交叉中和试验测定出的GMT分别为16.64、10.28、14.56、16.32、30.50、30.50,抗体阳转率均达到了 100%,无统计学差异(p>0.05)。综上所述,本文利用PV2假病毒替代活病毒建立了中和试验检测方

关键词： 脊髓灰质炎灭活疫苗   安全性   剂次   不良事件  

摘要： 目的:评价脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine,IPV)不同剂次接种的安全性。方法:2018年12月—2019年4月,以IPV作为研究疫苗,将360例2月龄婴儿作为研究对象,观察其在2,3,4月龄分别接种1剂次IPV后的不良事件发生情况。结果:各剂次注射部位不良事件症状以触痛、红肿、硬结为主,第1剂、第2剂和第3剂注射部位不良事件发生率分别为6.39%,3.06%和2.25%,各剂次间发生率差异有统计学意义(P=0.010),第1剂注射部位不良事件发生率高于第2剂、第3剂。各剂次全身不良事件症状以发热、易激惹、嗜睡和进食障碍为主,第1剂、第2剂和第3剂全身不良事件发生率分别为21.67%,14.44%和8.71%,各剂次间发生率差异有统计学意义(P <0.001),第1剂全身不良事件发生率高于第2剂、第3剂。各剂次不良事件严重程度以轻度反应(1级)为主,全部、注射部位及全身不良事件严重程度分布在各剂次间差异均无统计学意义(P> 0.05)。在研究观察期间,各剂次接种后均未观察到严重不良事件发生。结论:全程使用IPV具有良好的安全性,接种第2,3剂次IPV后的注射部位和全身不良事件发生率均低于第1剂次。

关键词： 病毒样颗粒   寨卡病毒   脊髓灰质炎病毒   克里米亚刚果出血热病毒   相互作用组  

摘要： 病毒样颗粒(Virus-Like Particle,VLP)是由一个或多个病毒结构蛋白组装形成的颗粒状结构,与天然病毒粒子形态、抗原性相似。VLP缺失病毒的遗传物质,没有复制和感染能力。VLP的免疫原性良好,研制快速,制备成本较低并且安全,在应对新发、突发病毒疾病的疫苗研制中具有独特优势。杆状病毒表达系统是常用的真核表达系统之一,广泛应用于蛋白功能研究,抗原及疫苗制备。我们利用杆状病毒表达系统构建了几种危害人类健康的病毒VLPs,并初步探究了其作为候选疫苗的免疫原性。寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是蚊传黄病毒,近年发现其感染与新生儿小头畸形有关,且能引起格林-巴利综合征等神经系统疾病。目前,对于ZIKV引起的疾病,尚无有效的疫苗和特异性治疗药物,ZIKV严重危害人类健康。我们利用杆状病毒表达系统,构建了表达ZIKV pr ME蛋白的重组病毒。经蔗糖密度梯度离心,从感染的昆虫细胞中纯化得到由ZIKV pr M蛋白和E蛋白自组装形成的ZIKV VLPs。以ZIKV pr ME VLPs免疫小鼠能够诱导小鼠产生中和抗体,及ZIKV特异的体液和细胞免疫反应,表现出良好的免疫原性,为以VLP为基础的ZIKV疫苗研发奠定了基础。我们也构建了表达ZIKV囊膜蛋白E的重组病毒,结果显示在昆虫细胞中囊膜蛋白E可以不依赖于pr M蛋白共表达组装成与ZIKV病毒粒子形态类似的VLP,并且释放到胞外。E蛋白保留膜融合活性,可以诱导合胞体形成,这一现象同样适用于包括日本脑炎病毒、登革热病毒和蜱传脑炎病毒在内的黄病毒。基于杆状病毒表达黄病毒囊膜蛋白E诱导合胞体形成的现象,我们还建立了靶向黄病毒E蛋白的抗病毒药物筛选平台。脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)是脊髓灰质炎(简称脊灰)的病原体。目前脊灰没有特异治疗方法,只能通过接种疫苗来预防。目前世界上普遍使用的脊灰疫苗有两种,即口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)和灭活脊髓灰质炎疫苗(IPV)。自从1988年世界卫生组织(WHO)发起全球消灭脊灰行动以来,世界各国大力推广OPV的使用,2015年和2019年,WHO先后宣布Ⅱ型和Ⅲ型脊灰野病毒的消灭。在根除脊灰的最后阶段,OPV和IPV都不可避免存在安全性问题,面临着免疫策略调整的挑战,在无PV的环境下生产疫苗更安全可靠。我们利用杆状病毒表达系统共表达PV的P1和3CD蛋白,P1前体可以被3CD蛋白酶成功剪切成衣壳蛋白VP0、VP1和VP3,经过蔗糖密度梯度离心结合氯化铯密度梯度离心可以纯化出PV VLPs,与天然PV病毒颗粒的形态、大小相似。克里米亚刚果出血热病毒(Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus,CCHFV)是一种高致病性病毒,可以导致克里米亚刚果出血热,一种以出血为典型特征的蜱媒自然疫源性疾病。CCHFV感染能引起人发热、出血以及多器官的功能衰竭,进而导致死亡,致死率高达30%-50%,没有有效的抗CCHFV的药物和疫苗,CCHFV是人类健康的潜在威胁。在我国病毒分类目录中,CCHFV属于第一类危害程度的病毒;在国外,CCHFV是生物安全4级的病毒。CCHFV在体外通过细胞培养进行病毒的分离和扩增较困难,极大限制了CCHFV的研究进展。我们构建重组病毒在昆虫细胞中共表达CCHFV的膜蛋白和核衣壳蛋白,或者单独表达膜蛋白。通过蔗糖密度梯度离心,成功从感染的细胞中制备出CCHFV VLPs。CCHFV病毒粒子表面是膜蛋白Gn和Gc,为了形成感染性病毒粒子,膜蛋白前体在细胞内经过复杂的剪切、加工和定位从而形成结构蛋白Gn和Gc,非结构蛋白GP160,GP85,GP38和NSm。在整个生命周期中CCHFV膜蛋白Gn和Gc在病毒入侵、膜融合、致病性、宿主选择和免疫逃逸等方面有重要作用。对CCHFV膜蛋白Gn和Gc宿主互作蛋白的研究,探索CCHFV与宿主的相互作用有利于了解CCHFV的分子生物学,找到病毒感染的关键宿主因子。为了研究CCHFV膜蛋白Gn/Gc与宿主的相互作用,我们首先制备了CCHFV膜蛋白Gn/Gc的单克隆抗体。以原核表达的Gn/Gc胞外区作为免疫原免疫小鼠,通过有限稀释法,以真核表达的Gn/Gc蛋白作为检测抗原,经ELISA方法初筛融合上清,结合蛋白免疫印迹分析和细胞免疫荧光检测。经过综合评定和比较,筛选出8株Gn单克隆化的杂交瘤细胞和10株Gc单克隆化的杂交瘤细胞。分别以不同截短形式的Gn/Gc原核表达蛋白为抗原,对融合上清的识别区段进行鉴定,最终鉴定出2株Gn单克隆抗体和1株Gc单克隆抗体及其识别的抗原表位。为了探索膜蛋白Gn/Gc的宿主互作蛋白,我们以带有Twin-strep标签的Gn或Gc作为诱饵蛋白,对样品进行细胞亲和纯化-质谱(AP-MS)鉴定。共鉴定出45个Gn或Gc相关宿

关键词： 脊髓灰质炎   序贯程序   免疫原性   安全性  

摘要： 目的:比较脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)与二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV) 3种序贯免疫接种程序的免疫原性和安全性。方法:2月龄的健康婴儿随机分配到3个研究组,于2,3,4月龄按照IPVbOPV-bOPV,IPV-IPV-bOPV和IPV-IPV-IPV的免疫程序完成基础免疫程序。分别于免前和最后一次接种后28～40 d内采血,采用细胞培养微量中和试验检测脊灰Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型中和抗体水平。采用发放日记卡的形式收集每次接种后30 d内的不良事件。结果:共入组648例符合条件的2月龄婴儿,每个研究组216例。入组性别、3种抗体的免前阳性率与几何平均滴度(GMT)在3个研究组间的统计学差异不显著。完成基础免疫后,Ⅰ型、Ⅲ型抗体免后阳性率均为100%,阳转率全部99%以上,3个研究组间统计学差异显著(P>0.05)。对于Ⅱ型抗体,免后阳性率分别为97.20%,100%和99.53%,阳转率分别为66.82%,93.02%和94.42%,3个研究组间的统计学差异具有显著性(P <0.001)。不良事件症状以发热为主,3个研究组发热发生率分别为15.89%,21.40%和27.91%,组间统计学差异具有显著性(P=0.010)。结论:3种脊灰疫苗序贯程序均有良好的安全性,目前国家免疫规划推荐的IPV-IPV-bOPV序贯接种程序相比IPV-bOPV-bOPV序贯接种程序具有更好的免疫效果。

关键词： 非脊髓灰质炎肠道病毒   环境污水   柯萨奇病毒B5  

摘要： 目的分析2015-2018年上海市闵行区和嘉定区环境污水监测中非脊髓灰质炎肠道病毒(NPEV)的分布特征,探讨环境污水、健康儿童和急性弛缓性麻痹(AFP)病例监测中柯萨奇病毒B组5型(Cox B5)分离株之间的关系和变迁规律。方法选择上海市闵行区和嘉定区污水处理厂作为长期固定监测点,每月采集监测点的污水进行浓缩富集,取上清液并接种于人横纹肌肉瘤细胞(RD)和人喉癌上皮细胞(Hep-2)进行病毒分离。通过反转录–聚合酶链式反应(RT-PCR)获得VP1区序列并进行分析。结果 2015-2018年共采集污水样本84份,共分离242株NPEV,包含19个基因型,Cox B5为比例较高的基因型,占18.18%(44/242)。2015-2018年,环境污水、健康儿童和AFP病例监测中的Cox B5分离株形成2个基因型和3个传播链,即C3、C4和D3基因亚型。C3基因亚型在上海市属于优势基因亚型,而D3基因亚型是2016-2018年新出现的传播链。结论 2015-2018年上海市2个区环境污水中常见的优势基因型为ECHO11、Cox B5、Cox B3和ECHO6。Cox B5在环境污水、健康儿童和AFP病例中存在共循环现象。我国尚未建立完善的NPEV相关疾病监测系统,环境污水监测可作为病例监测的重要补充方法。

关键词： 脊髓灰质炎病毒   轮状病毒   疫苗   免疫原性  

摘要： 目的评价同时接种脊髓灰质炎减毒活疫苗是否会影响轮状病毒减毒活疫苗的免疫原性。方法以葛兰素史克公司生产的Rotarix作为研究对象,将接种人群随机分为两组。均在第0天、第1个月口服接种两剂Rotarix,并根据国家规划接种计划在第0天、第1个月和第2个月口服接种脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)。Rotarix和OPV在不同天接种为间隔接种组,Rotarix和OPV在同一天接种为同时接种组。分别在第0天、第2个月、第12个月采集血清,用酶联免疫吸附法测定血清RV-IgA。通过统计分析两组的RV-IgA血清阳转率和水平分布是否有统计学差异。结果间隔接种和同时接种组的第2个月血清RV-IgA阳转率分别为73.84%和63.95%,差异有统计学意义(P<0.05);两组的免疫后RV-lgA抗体几何平均浓度(GMC)分别为97 EU/ml和90 EU/ml,差异无统计学意义(P>0.05)。与同时接种组相比,间隔接种组第12个月的血清RV-IgA阳转率和GMC均较高,差异有统计学意义(P<0.05).结论同时接种脊髓灰质炎减毒活疫苗会影响轮状病毒减毒活疫苗的免疫应答,尤其是RV-IgA抗体水平的维持。

关键词： 脊髓灰质炎疫苗   序贯程序   抗体   免疫效果  

摘要： 目的评估脊髓灰质炎疫苗2种序贯程序下不同剂次的免疫效果,为新免疫策略和免疫程序制定提供依据。方法2016-2017年随机抽取天津市适龄接种脊髓灰质炎疫苗的新生儿128人,分A、B、C 3组,A组42人,B组44人,C组42人。A、B 2组接种1剂脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)和2剂脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)(I-O-O),C组接种3剂IPV(I-I-I)。各组研究对象分别于接种疫苗后不同时间点采血,采用微量中和试验进行抗体检测,并对抗体阳性率和抗体几何平均滴度水平(GMT)进行分析。结果接种1剂次IPV后,A组Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型脊髓灰质炎抗体阳转率分别为69.05%(29人)、71.43%(30人)、71.43%(30人)(P>0.05),抗体阳性率分别为97.62%(41人)、95.24%(40人)、80.95%(34人),3型脊髓灰质炎抗体GMT间差异无统计学意义(P>0.05);接种OPV2或IPV2后,除B组Ⅲ型阳性率为97.73%(43人)外,B组Ⅰ型、Ⅱ型及C组各型阳性率均达到100%,仅Ⅱ型脊髓灰质炎抗体GMT在B、C组间(B组357.42,C组172.28)差异有统计学意义(P<0.05);按I-O-O完成全程接种后,A组各型脊髓灰质炎抗体阳性率均为100%,3型脊髓灰质炎抗体GMT分别为1075.05、464.67、786.53(P<0.05)。结论接种1剂次IPV或接种IPV1+OPV2后各型脊髓灰质炎抗体阳性率未全部达到100%,接种2剂次IPV后各型脊髓灰质炎抗体阳性率均可达到100%;I-O-O序贯程序可以诱导研究对象产生保护性抗体,但在降低脊髓灰质炎的发生可能性方面,I-I-O序贯程序优于I-O-O。

关键词： 神经毒力   Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒   分子水平   动物水平  

摘要： 目的用PCR扩增及限制性酶切分析突变技术(MAPREC)和猴体神经毒力试验(MNVT)评价同一批Ⅲ型Sabin株脊灰病毒神经毒力的结果差异。方法采用MAPREC技术,检测Ⅲ型Sabin株脊灰病毒神经毒力关键位点472位点突变率;采用MNVT病理切片分析,评价Ⅲ型Sabin株脊灰病毒神经毒力。结果 MAPREC检测待测样品核酸472位点突变率均值为0.324%,低于高突变参考品的0.621%。MNVT切片结果分析表明,xtest–xref=0.169,小于C1。对同一批样品,MAPREC与MNVT分析结果一致。结论在Ⅲ型Sabin株脊灰病毒神经毒力检测方面,操作简单,试验周期短的MAPREC技术可作为金标准MNVT的有益补充。