关键词： 顾方舟   活疫苗   脊髓灰质炎病毒  

摘要： 顾方舟从31岁开始,就努力在中国消灭导致小儿麻痹症的脊髓灰质炎病毒,为此花了40余年时间。他在中国研制出首批脊灰活疫苗,并把疫苗包裹进糖丸中,以便送到农村和偏远地区。2000年,世界卫生组织宣布中国消灭脊髓灰质炎病毒时,顾方舟曾作为代表在证实报告上签字,但他从来没因此放弃警惕。他研制的糖丸已经被证明可以明

关键词： 脊髓灰质炎   脊灰病毒抗体   胶体金试纸条   Sabin株  

摘要： 脊髓灰质炎病毒(Poliovirus，PV，简称脊灰)是引起脊髓灰质炎的病原体，主要是通过侵犯中枢神经系统，引发弛缓性肌肉麻痹。世界卫生组织(WHO)于1988年提出“到2000年全球消灭脊髓灰质炎”的决议后，全球广泛使用脊灰疫苗，脊髓灰质炎病例也减少了99%以上。目前，世界上除极少数国家偶有少量脊灰病例发生外，世界正处于彻底根除脊髓灰质炎的边缘，世界各国正在为实现全球无脊灰做出最后的努力。脊灰病毒抗体检测对于研究脊灰病毒流行病学监视、疫苗免疫效果评估和衍生型病例具有重要的意义，本论文拟用脊灰病毒Sabin株Ⅰ型单克隆抗体研制检测人类血清中脊灰病毒抗体的试纸条，为临床诊断提供重要参考。　　复苏培养本实验室制备的抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆细胞株62-F5，细胞状态良好。用间接ELISA测定单克隆细胞上清效价为1∶8，与此细胞冻存之前的效价一致，表明此单克隆细胞较稳定。　　用弗氏不完全佐剂对Balb/c雌鼠致敏，一周后，腹腔接种以上杂交瘤细胞，接种一周后开始密切观察小鼠生命体态。当小鼠腹部膨大，有紧绷感时，活体抽取腹水;若小鼠活力下降，体感温度降低，应及时处死小鼠收集腹水。腹水收集后，用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体，通过超滤浓缩后测得单抗浓度为15.364mg/mL，ReducedSDS-PAGE与Non-reducedSDS-PAGE分析纯化后的单抗，结果表明：单抗纯度较高，重链约70KDa，轻链约23KDa;根据Non-reducedSDS-PAGE电泳图谱可知，此单抗分子量约800~900KDa，此单抗类型可能为IgM。用间接Elisa测定浓缩后的单抗效价为1∶51200。　　采用柠檬酸三钠还原法制备40nm胶体金颗粒，用此胶体金标记单抗，再与脊灰Ⅰ型抗原结合，形成胶体金-抗体-抗原复合物，将此复合物固定在金标垫上;将NC膜黏附在PVC板中间位置，在T线处包被浓度为1mg/mL的鼠抗人IgG（2μg/cm）;在C线处包被1mg/mL的羊抗鼠IgG（2μg/cm）;将金标垫黏接在NC膜一端，重叠约2mm;样品垫黏接在金标垫上，重叠约2mm;吸水垫黏接在NC膜另一端，重叠约2mm;最后将试纸条组装在塑料外壳中。该胶体金试纸条检测脊髓灰质炎病毒抗体标准阳性血清的敏感性为1∶80;特异性检测显示对脊灰阳性为阳性结果，对甲型肝炎病毒抗体阳性血清、乙型肝炎病毒抗体阳性血清、麻疹病毒抗体阳性血清、脊灰病毒抗体阴性血清进行检测显示为阴性结果，说明该试纸条特异性良好。与PV-IgGELISA检测符合率为86.7%。在4℃和室温条件下保存3个月，其灵敏度和特异性没有明显变化，该胶体金试纸条稳定性良好。　　本研究初步建立检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金试纸条，该研究为脊灰的流行病学研究以及快速大规模检测脊灰Ⅰ型疫苗免疫效果均具有重要意义。

关键词： 急性弛缓性麻痹   疫苗免疫程序转换   流行特征   病原学监测  

摘要： 目的:分析比较河北省脊髓灰质炎（poliomyelitis,脊灰）疫苗免疫程序转换前后急性弛缓性麻痹（acute flaccid paralysis,AFP）病例流行特征,评价脊灰疫苗免疫程序转换的效果,为继续调整脊灰疫苗免疫策略、消灭脊灰提供科学依据。方法:1.采用描述性流行病学方法比较分析河北省脊灰疫苗免疫程序转换前后两年（2014年5月2016年4月与2016年5月2018年4月）AFP病例的流行病学和病原学特征。2.采用人横纹肌肉瘤细胞（RD细胞）、转人脊灰病毒受体基因的小鼠肺细胞（L20B细胞）分离脊灰病毒,细胞病变效应阳性分离物采用实时荧光定量RT-PCR方法进行型内鉴定;采用细胞中和抗体试验检测血清脊灰中和抗体水平。3.采用SPSS21.0软件进行统计检验:率、构成比的比较采用卡方检验和Fisher's确切概率法,等级资料的比较采用秩和检验,脊灰中和抗体水平比较采用方差分析,检验水准α=0.05;多变量影响因素分析采用Logistic回归。结果:1.脊灰疫苗免疫程序转换前后河北省AFP病例分别报告652例、633例,15岁以下儿童报告发生率分别为2.49/10万、2.26/10万（χ2=2.903,P=0.088）。2.脊灰疫苗免疫程序转换前后0～4岁AFP病例占比分别为63.50%、54.98%,比较年龄构成（Z=-3.438,P=0.001）;男女性别比分别为1.72:1、1.30:1（χ2=5.886,P=0.015）;各月份、各地市病例均散在分布。AFP病例60d残留麻痹率分别为14.72%、16.27%（χ2=0.588,P=0.443）。3.脊灰疫苗免疫程序转换前河北省报告疫苗相关麻痹型脊灰（Vaccine-associated Paralytic Poliomyelitis,VAPP）病例4例、脊灰疫苗衍生病毒（Vaccine-derived Polio virus,VDPV）病例1例,转换后无VAPP病例、VDPV病例的报告。4.脊灰疫苗免疫程序转换前后AFP病例脊灰病毒阳性分离率分别为2.91%、1.26%（χ2=4.252,P=0.039）,血清型分别是Ⅰ型（7株）、Ⅱ型（11株）、Ⅲ型（4株）和Ⅰ型（5株）、Ⅲ型（5株）(P=0.010)。非脊灰肠道病毒（Non-polio entervirus,NPEV）分离率阳性分别为14.88%、12.95%（χ2=0.002,P=0.960）。5.2012～2016年河北省0～2岁儿童Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型脊灰中和抗体几何平均滴度（Geometric Mean Titer,GMT）分别为1:216.93、1:217.18和1:168.04;2017～2018年Ⅰ型、Ⅲ型GMT分别为1:237.15、1:114.71;脊灰疫苗免疫程序转换前后Ⅰ型（F=0.091,P=0.764）、Ⅲ型（F=0.687,P=0.408）GMT比较差异无统计学意义。结论:1.河北省脊灰疫苗免疫程序转换前后脊灰中和抗体GMT水平未发生改变,AFP病例的季节、地区分布、NEPV阳性分离率、AFP病例60天残留麻痹率等流行特征未发生改变。2.河北省脊灰疫苗免疫程序转换后无VAPP、VDPV病例的报告,AFP病例PV阳性分离率下降。

关键词： 脊髓灰质炎减毒活疫苗   脊髓灰质炎灭活疫苗   疑似预防接种异常反应   安全性  

摘要： 目的了解新纳入国家免疫规划的脊髓灰质炎(脊灰)疫苗的疑似预防接种异常反应(AEFI)的发生特征,评价其安全性。方法各接种单位逐级上报2017-2018年口服二价脊灰减毒活疫苗(bOPV)和脊灰灭活疫苗(IPV)的接种剂次数,通过AEFI信息管理系统收集bOPV和IPV的AEFI个案数据,采用描述性方法统计分析AEFI报告发生率及流行病学特征。结果 2017-2018年江西脊灰疫苗AEFI报告434例,发生率为9.69/10万剂次,bOPV、IPV分别为5.85/10万剂次、21.52/10万剂次。AEFI报告例数为男童多于女童,以0岁组儿童为主,一般反应为主,主要发生在接种后48小时以内。异常反应病例的临床诊断主要为过敏性皮疹。bOPV接种后疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎的报告发生率为0.09/10万剂次。结论江西省脊灰疫苗安全性在可接受范围,需进一步防范严重预防接种异常反应病例的发生,并建议国家尽快制定2剂IPV加2剂bOPV的免疫策略。

关键词： 脊灰病毒Ⅰ型   脊灰病毒Ⅰ型单克隆抗体   胶体金试纸条  

摘要： 脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV,简称脊灰)是引起脊髓灰质炎的病原体,主要是通过侵犯中枢神经系统,引发弛缓性肌肉麻痹。世界卫生组织(WHO)于1988年提出“到2000年全球消灭脊髓灰质炎”的决议后,全球广泛使用脊灰疫苗,脊髓灰质炎病例也减少了99%以上。目前,世界上除极少数国家偶有少量脊灰病例发生外,世界正处于彻底根除脊髓灰质炎的边缘,世界各国正在为实现全球无脊灰做出最后的努力。脊灰病毒抗体检测对于研究脊灰病毒流行病学监视、疫苗免疫效果评估和衍生型病例具有重要的意义,本论文拟用脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体研制检测人类血清中脊灰病毒抗体的试纸条,为临床诊断提供重要参考。复苏培养本实验室制备的抗脊灰病毒Sabin株Ⅰ型单克隆细胞株62-F5,细胞状态良好。用间接ELISA测定单克隆细胞上清效价为1:8,与此细胞冻存之前的效价一致,表明此单克隆细胞较稳定。用弗氏不完全佐剂对Balb/c雌鼠致敏,一周后,腹腔接种以上杂交瘤细胞,接种一周后开始密切观察小鼠生命体态。当小鼠腹部膨大,有紧绷感时,活体抽取腹水;若小鼠活力下降,体感温度降低,应及时处死小鼠收集腹水。腹水收集后,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体,通过超滤浓缩后测得单抗浓度为15.364 mg/mL,Reduced SDS-PAGE与Non-reduced SDS-PAGE分析纯化后的单抗,结果表明:单抗纯度较高,重链约70 KDa,轻链约23 KDa;根据Non-reduced SDS-PAGE电泳图谱可知,此单抗分子量约800～900 KDa,此单抗类型可能为IgM。用间接Elisa测定浓缩后的单抗效价为1:51200。采用柠檬酸三钠还原法制备40 nm胶体金颗粒,用此胶体金标记单抗,再与脊灰Ⅰ型抗原结合,形成胶体金-抗体-抗原复合物,将此复合物固定在金标垫上;将NC膜黏附在PVC板中间位置,在T线处包被浓度为1mg/mL的鼠抗人IgG(2μg/cm);在C线处包被1mg/mL的羊抗鼠IgG(2μg/cm);将金标垫黏接在NC膜一端,重叠约2 mm;样品垫黏接在金标垫上,重叠约2 mm;吸水垫黏接在NC膜另一端,重叠约2 mm;最后将试纸条组装在塑料外壳中。该胶体金试纸条检测脊髓灰质炎病毒抗体标准阳性血清的敏感性为1:80;特异性检测显示对脊灰阳性为阳性结果,对甲型肝炎病毒抗体阳性血清、乙型肝炎病毒抗体阳性血清、麻疹病毒抗体阳性血清、脊灰病毒抗体阴性血清进行检测显示为阴性结果,说明该试纸条特异性良好。与PV-IgG ELISA检测符合率为86.7%。在4℃和室温条件下保存3个月,其灵敏度和特异性没有明显变化,该胶体金试纸条稳定性良好。本研究初步建立检测脊髓灰质炎病毒I型抗体胶体金试纸条,该研究为脊灰的流行病学研究以及快速大规模检测脊灰Ⅰ型疫苗免疫效果均具有重要意义。

关键词： 百日咳   白喉   破伤风   脊髓灰质炎   b型流感嗜血杆菌   接种部位   安全性  

摘要： 目的评价两种部位接种吸附无细胞百白破、灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(简称五联疫苗)的安全性。方法上海市奉贤区各预防接种门诊采用逢单月经大腿前外侧肌接种,双月经上臂三角肌接种的原则,在受种者监护人知情同意下,收集2015年1月1日~2017年6月30日期间婴幼儿接种五联疫苗后的安全性相关资料,分析不同接种部位的不良反应发生情况。结果共收集调查接种五联疫苗婴幼儿2 928人,接种7 243剂次,累计发生不良反应1 186人次,不良反应发生率为16. 37%。大腿前外侧肌接种的不良反应发生率(10. 80%)明显低于上臂三角肌(23. 89%),且差异有统计学意义(P <0. 05),其中局部反应、全身反应的轻、中、重度症状发生率也均明显低于上臂三角肌(P <0. 05)。两种不同部位接种第1剂次疫苗后不良反应的发生率均明显高于其他剂次(P <0. 05)。结论两种不同部位接种五联疫苗引起不良反应的发生率较低,均具有良好的安全性,大腿前外侧肌接种相对更安全,是五联疫苗的首选接种部位。

关键词： 脊髓灰质炎   脊髓灰质炎减毒活疫苗   脊髓灰质炎灭活疫苗  

摘要： 自1988年世界卫生大会发起"全球消灭脊髓灰质炎行动"倡议以来,全球脊髓灰质炎发病率已减少了99%以上。如今,全球已进入了后脊灰时代。2013年世界卫生组织制定了《消灭脊髓灰质炎最后阶段战略计划(2013-2018)》,以彻底消灭脊髓灰质炎。由于接种脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)的人群中有可能会出现罕见的疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎(VAPP)病例和疫苗衍生脊髓灰质炎病毒(VDPV)相关病例。因此,彻底消灭脊髓灰质炎的重要途径是研制出有效的疫苗。脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)能避免OPV使用过程中出现的VAPP和VDPV循环(cVDPVs)事件的发生,适用人群较广泛。然而,不同国家的脊髓灰质炎疫苗种类和使用程序不尽相同,本文对脊髓灰质炎流行现状及疫苗免疫策略进展情况进行简述,以期为终结脊髓灰质炎提供理论参考。

关键词： 病毒性心肌炎   儿童   柯萨奇B组病毒   脊髓灰质炎病毒   致死性心律失常   副流感病毒   预后   微小核糖核酸  

摘要： 儿童病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)是病毒侵犯心肌,引起心肌细胞变性、坏死和间质炎症改变的一种疾病[1]。过去认为,肠道病毒和呼吸道病毒是其主要病原,其中以微小核糖核酸病毒群最具亲心性,特别是柯萨奇B组病毒引起的心肌炎最多见,其次为埃可病毒、脊髓灰质炎病毒、流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、EB病毒等[1-2]。而最近研究显示,病毒种类正发生转变,尤其是细小病毒19(BVP19)和人类疱疹病毒-6(HHV-6)变得更为常见[3]。儿童病毒性心肌炎临床症状多种多样,轻症者仅表现为流感样症状、轻微胸痛,而重症患者可出现心源性休克或致死性心律失常,甚至猝死。统计显示,婴儿和儿童心肌炎的病死率可能高达75%和25%[4]。

关键词： 脊髓灰质炎疫苗   胶质母细胞瘤   生存率   患者   改良   CD155   肿瘤微环境   毒性试验  

摘要： 1项工期临床剂量探索与毒性试验招募了61例晚期恶性脑癌患者,接受基于脊髓灰质炎(脊灰)疫苗的免疫疗法,20%患者3年后仍存活,而标准治疗的3年生存率为4%。该疫苗包含非致病i生脊灰一鼻病毒嵌合体,可识别很多实体瘤中超表达的脊灰病毒受体CD155,可在注入肿瘤微环境后激发免疫应答。