关键词： 脊髓灰质炎疫苗   脊灰疫苗   脊髓灰质炎减毒活疫苗   脊髓灰质炎灭活疫苗   含麻疹成分疫苗   免疫规划   常规免疫   适龄儿童  

摘要： 1月7日,国家卫健委发布《我国调整免疫规划脊髓灰质炎疫苗和含麻疹成分疫苗免疫程序》,这意味着我国将改变2016年以来实施的适龄儿童常规免疫第1剂次接种脊灰灭活疫苗,第2、3、4剂次接种脊灰减毒活疫苗程序。具体来说,调整后适龄儿童将在2月龄和3月龄各接种1剂次脊髓灰质炎灭活疫苗,4月龄和4周岁各接种1剂次2价脊髓灰质炎减毒活疫苗。

关键词： 全球   脊髓灰质炎病毒   疫苗供应   封存与认证   第十八次会议  

摘要： 2019年10月15日,WHO-UNICEF与IPV/OPV生产商、国家封存监管机构(National Authority for Containment,NAC)关于脊髓灰质炎(脊灰)病毒封存与疫苗采购的第十八次磋商会议在瑞士日内瓦召开。世界卫生组织(WHO)、联合国儿童基金会(United Nations International Children′s Emergency Fund,UNICEF)、全球消灭脊灰行动(Global Polio Eradication Initiative,GPEI)策略委员会、相关国家封存监管机构、IPV/OPV生产厂家的相关代表出席了会议。会议围绕阻断脊灰病毒的传播、扩大脊灰疫苗生产的监管审批途径、新产品的创新与研发及其对供应可能产生的影响、脊灰病毒的封存与认证、Sabin IPV研发最新进展等内容进行了主题报告;对《2019~2023年脊灰尾声战略》进行了全面的介绍和分享,脊灰疫苗生产商与WHO、UNICEF有了充分的交流,进一步加强了参与全球消灭脊灰行动的各个组织、协会、生产商与国家监管机构之间的合作,推进了全球消灭脊灰行动策略的部署。

关键词： 吸附无细胞百日咳   白喉   破伤风   乙型肝炎   Sabin株灭活脊髓灰质炎   加强免疫   安全性  

摘要： 目的评价不同剂量配比及制备工艺的吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP-HepB-sIPV)免疫大鼠后加强免疫效果及安全性。方法以中、低剂量与铝佐剂相互配伍的不同sIPV配方设计4个DTaP-HepB-sIPV联合疫苗实验组,即中剂量含铝佐剂sIPV组(A组)、中剂量不含铝佐剂sIPV组(B组)、低剂量含铝佐剂sIPV组(C组)、低剂量不含铝佐剂sIPV组(D组),并设相应各组分的对照组和Infanrix hexaTM疫苗参考组。以已完成3剂基础免疫的Wistar大鼠为实验动物,在全程免疫第16个月接种1剂次加强免疫,进行安全性评价,并比较加强免疫前后各组大鼠血清中各组分抗体水平、中和抗体几何平均滴度(GMT)及阳转率,同时观察加强免疫对大鼠外周血中淋巴细胞的影响。结果加强免疫后未观察到不良反应,大鼠接种部位未见红肿、硬结、溃烂等现象,且各组大鼠体重维持稳定。加强免疫后30 d,各组大鼠各型别脊灰病毒中和抗体均为阳性,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率A组分别为100%、71.4%、85.7%,B组分别为71.4%、85.7%、100%,C组分别为80%、80%、100%,D组分别为71.4%、100%、85.7%;A组诱导的各型别脊灰病毒中和抗体GMT均高于B组,且可达到或超过参考组;B、D组诱导产生的各型脊灰病毒中和抗体GMT均能达到同等剂量相应对照组水平。加强免疫后,各组百白破各组分抗体GMT有5~106倍增长,联合疫苗实验组GMT与对照组相比,总体上差异无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后,乙肝抗体阳转率乙肝对照组为66.7%,B组为55.6%,C组为50%,A组为16.7%,D组为14.3%,参考组为0%;各组Anti-HBsAg水平有不同程度的升高,但两两相比,各组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DTaPHepB-sIPV具有良好的安全性,sIPV中剂量含铝佐剂的DTaP-HepB-sIPV联合疫苗所诱导的各抗体水平更加稳定持久,可作为未来疫苗最佳配比的参考。

摘要： 近日,世卫组织宣布非洲地区已根除野生脊髓灰质炎病毒。这标志着自1980年根除天花,第2种在非洲广泛传播的病毒得到根除。脊髓灰质炎俗称小儿麻痹症,是婴幼儿易感的急性传染病,可通过接种疫苗预防。世卫组织说,非洲最近一例脊灰病例于2016年8月份出现在尼日利亚,经世卫组织有关认证部门多年考察,非洲现已符合"无脊灰"标准。

关键词： 脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株   假病毒   ELISA抗体检测法   中和试验   D抗原  

摘要： 脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)是造成五岁以下儿童麻痹瘫痪的主要病原微生物,有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个血清型。1955年灭活脊髓灰质炎疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)和 1963 年口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(Oral poliovirus vaccine,OPV)的相继应用以及全球对该病毒的管理与监控,脊灰发病率逐年下降。世界卫生组织(WHO)于1988年发起全球根除脊髓灰质炎行动(GPEI),继2015年9月宣布消灭了脊灰Ⅱ型野生病毒后,于2019年10月24日宣布全球又消灭了脊灰病毒Ⅲ型野生病毒,当前全球仅有Ⅰ型野生毒株在阿富汗和巴基斯坦两个国家流行。此外,由于OPV的使用,疫苗相关麻痹性脊髓灰质炎病例(vaccine-associated paralytic poliomyelitis,VAPP)和疫苗衍生病毒(vaccine-derived poliovirus,VDPV)备受关注。目前全球针对脊髓灰质炎病毒的任务是完全根除,针对这一目的,我们不仅要消除现在流行的Ⅰ型野生毒株,还必须消除VAPP、VDPV以及由感染患者排入环境中的长期存活的脊髓灰质炎病毒,VDPV主要是OPV免疫人体后由于机体免疫缺陷或者其他原因减毒株在体内恢复其毒力与传播性变为有致病能力的一种病毒,包括循环型疫苗衍生病毒(circulating vaccine-derived poliovirus,cVDPVs)和免疫缺陷型疫苗衍生病毒(immunodeficiency-associated vaccine-derived poliovirus,iVDPVs)在全球根除脊髓灰质炎病毒这一背景下,灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗终将替代减毒活疫苗。与此同时,脊髓灰质炎病毒根除最后阶段,WHO第三版《世界卫生组织全球行动计划》(GAPⅢ)中指出脊髓灰质炎病毒需在BSL-3实验室进行操作且全球只有少数实验室可以保存脊髓灰质炎病毒减毒株。为满足一般实验室的工作需求,急需可替代真病毒的中和抗体检测新方法。本研究就构建脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株假病毒以检测人群中脊髓灰质炎病毒抗体水平展开。首先以脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株为参考,通过构建表达SabinⅢ型衣壳蛋白P1质粒(pcDNA3.1-P1),将其与含T7RNA聚合酶、P1段被Iuciferase所替代的脊髓灰质炎病毒骨架质粒(酶切体外转录为RNA)共转染293T细胞,包装出只具备一次性感染细胞能力的脊髓灰质炎Ⅲ型Sabin株假病毒代替真病毒作为检测工具。经测定,假病毒颗粒的直径约为30 nm且形态与相应的真病毒相似,可用于评价血清中和抗体效价。同时,本研究对检测脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株D抗原ELISA方法进行了改造,将其改良成检测抗脊灰抗体。首先,包被牛抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株D抗原IgG,BSA封闭后添加D抗原,然后同时加入兔抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株D抗原IgG和人血清进行竞争性结合,最后加入羊抗兔酶标抗体,改造后的方法可作为以检测血清中和抗体效价的替代方法。该实验确定酶标抗体不与血清发生反应,同时也确定了 ELISA板上所包抗原的最适浓度,酶标抗体稀释度1:1000。通过参考临床血清脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株微量中和试验的结果,找到血清中和效价较高的血清作为该研究的样品,得出R2=0.972的OD值标准曲线。用该方法对来自昆明地区8份血清的中和抗体滴度进行检测,得到血清抗体阳性率与传统微量中和试验法中和抗体阳性率均为75%,两种方法无显著性差异。综上,本实验通过脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株假病毒的构建以及ELISA方法的改进,建立了安全可靠的替代活病毒测定血清中和抗体的新方法。在脊髓灰质炎消灭的最后阶段,对人群中血清抗体的检测和监控人群中抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株保护率,防止该型病毒再次爆发。

摘要： 琼卫疾控〔2020〕1号各市、县、自治县卫生健康委，洋浦经济开发区卫生计生局，省疾控中心：根据我国脊髓灰质炎传染病防控需要，近日国家卫生健康委、财政部、工业信息化部、药监局联合下发了《关于国家免疫规划脊髓灰质炎疫苗和含麻疹成分疫苗免疫程序调整相关工作的通知》(国卫疾控发〔2019〕65号)，决定自2019年12月起，在全国范围内实施2剂次脊髓灰质炎灭活疫苗和2剂次脊髓灰质炎减毒活疫苗的免疫程序。为确保我省免疫规划脊髓灰质炎疫苗免疫程序调整工作顺利进行，我委制定了《海南省免疫规划脊髓灰质炎疫苗免疫程序调整暨脊灰疫苗“2+2”免疫程序实施方案》，请各市县、各有关单位按方案要求，

关键词： 脊髓灰质炎病毒   Ⅱ型   假病毒   中和抗体   免疫原性  

摘要： 自1988年全球实施根除小儿麻痹症计划以来,经过世界各国的努力取得了瞩目的进展,野生毒株引发的小儿麻痹症病例下降了99.9%。在三个型的野生脊髓灰质炎病毒(wild poliovirus,WPV)中,Ⅱ型(WPV2)最后一例病例发生在1999年,以后再也没有发生WPV2感染所致的麻痹,并于2015年被全球消灭脊髓灰质炎认证委员会(the Global Commission for the Certification of Poliomyelitis Eradication,GCC)宣布在全球范围内消灭;Ⅲ型野毒株也于2019年宣布全球消灭。但只要减毒活疫苗(attenuated oral polio vaccine,OPV)使用就不可避免的会出现服苗者将Ⅱ型减毒株经肠道复制后排到环境中,引发循环疫苗衍生脊髓灰质炎病毒(Circulating Vaccine Derived Poliovirus,cVDPV)的发生。为此,在2016年全球实现了将Ⅱ型疫苗株从常规三价口服脊髓灰质炎病毒疫苗(the trivalent oral polio vaccine,tOPV)中撤出。但脊灰病毒属于肠道病毒,以往服苗排放到污水中的病毒可存活一定时间,环境中的病毒偶然感染人群。甚或,口服疫苗感染免疫缺陷患者中,可以长期带毒并可在复制过程中产生变异恢复野生脊髓灰质炎病毒(immunodeficiency-associated vaccine-derived poliovirus,iVDPV)的神经毒力和传播特性。所以,cVDPVs和iVDPV的变异引起人们的担忧。出于生物安全考虑,将实施全球性的Ⅱ型脊髓灰炎病毒(poliovirus type 2,PV2)封存,只允许在WHO认可的少数几个P3实验室中使用,将给以中和抗体评价群体免疫力带来不便。我们采用生物信息学预测OPV2的中和抗原变异,并制备假病毒和免疫动物,进行了免疫原性及其交叉中和活性研究。研制假病毒来替代活的脊髓灰质炎病毒用于中和试验,建立安全可靠的免疫力评价新方法对脊灰根除的最后阶段维持无脊灰状态具有重要意义。本文构建Ⅱ型Sabin PV假病毒颗粒(简称pseudo-S-Ⅱ),通过Westren分析、感染性测定和电镜形态观察等研究,发现其免疫原性与感染性病毒颗粒相近,直径大小约30 nm。使用Ⅱ型病毒和pseudo-S-Ⅱ进行中和试验测定40份血清样本中的特异性中和抗体,其平均几何效价分别为36.47、55.90,相关性好(R2=0.87),无统计学差异。进行11次独立重复试验,95%置信区间为2012.37-2828.36,CV 值为 0.29。美国疾控中心选用免疫缺陷病人分离的一株Ⅱ型iVDPV(iVDPV2)与OPV、Sabin IPV(sIPV)和Salk IPV(wIPV)疫苗人体免疫血清进行交叉中和试验发现中和活性显著降低。本研究通过生物信息学技术等对这株iVDPV的VP1、VP2和VP3主要中和位点进行分析,发现其主要中和位点的一级氨基酸结构中有16个氨基酸位点发生改变,其中有13个氨基酸发生带电性质或极性的改变。以 Poliovirus type 2(strain Lansing)(PDB 序列号:1EAH)为模板使用同源建模SWISS MODEL预测iVDPV2、SabinⅡ的衣壳蛋白构像。使用Pymol 2.1软件显示预测构像。VP1的679和680,VP2的141三个氨基酸残基的改变影响了病毒中和位点的空间构象。本研究对三个位点进行定点突变构建11株突变假病毒,分别与兔抗SabinⅡ多抗和接种过脊灰疫苗的人血清进行中和试验,发现突变都会影响血清交叉中和能力,其中抗血清对RA141679S的突变组合交叉中和效价下降最显著(p<0.001)。以上11株假病毒分别与脊髓灰质炎病毒受体(human poliovirus receptors,hPVRs或CD155)进行亲和力测定,结果显示VP1的679位氨基酸的改变(突变为D或缺失)能增加与CD155的结合能力,推测PV2的VP1,679位氨基酸对中和位点和受体结合位点均有影响。鉴于脊灰疫苗对个别VDPV2保护性差及VP1的679位氨基酸和VP2的141位氨基酸对中和位点的影响不同。制备R141S,A679D,A679缺失假病毒,纯化后各免疫6只Wistar大白鼠。R141S突变体免疫动物血清与PV2产生交叉中和作用。R141S突变体免疫动物的抗血清与MEF-1、Sabin PV2和4株VDPV2假病毒交叉中和试验测定出的GMT分别为16.64、10.28、14.56、16.32、30.50、30.50,抗体阳转率均达到了 100%,无统计学差异(p>0.05)。综上所述,本文利用PV2假病毒替代活病毒建立了中和试验检测方

关键词： 脊髓灰质炎灭活疫苗   安全性   剂次   不良事件  

摘要： 目的:评价脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine,IPV)不同剂次接种的安全性。方法:2018年12月—2019年4月,以IPV作为研究疫苗,将360例2月龄婴儿作为研究对象,观察其在2,3,4月龄分别接种1剂次IPV后的不良事件发生情况。结果:各剂次注射部位不良事件症状以触痛、红肿、硬结为主,第1剂、第2剂和第3剂注射部位不良事件发生率分别为6.39%,3.06%和2.25%,各剂次间发生率差异有统计学意义(P=0.010),第1剂注射部位不良事件发生率高于第2剂、第3剂。各剂次全身不良事件症状以发热、易激惹、嗜睡和进食障碍为主,第1剂、第2剂和第3剂全身不良事件发生率分别为21.67%,14.44%和8.71%,各剂次间发生率差异有统计学意义(P <0.001),第1剂全身不良事件发生率高于第2剂、第3剂。各剂次不良事件严重程度以轻度反应(1级)为主,全部、注射部位及全身不良事件严重程度分布在各剂次间差异均无统计学意义(P> 0.05)。在研究观察期间,各剂次接种后均未观察到严重不良事件发生。结论:全程使用IPV具有良好的安全性,接种第2,3剂次IPV后的注射部位和全身不良事件发生率均低于第1剂次。

关键词： 病毒样颗粒   寨卡病毒   脊髓灰质炎病毒   克里米亚刚果出血热病毒   相互作用组  

摘要： 病毒样颗粒(Virus-Like Particle,VLP)是由一个或多个病毒结构蛋白组装形成的颗粒状结构,与天然病毒粒子形态、抗原性相似。VLP缺失病毒的遗传物质,没有复制和感染能力。VLP的免疫原性良好,研制快速,制备成本较低并且安全,在应对新发、突发病毒疾病的疫苗研制中具有独特优势。杆状病毒表达系统是常用的真核表达系统之一,广泛应用于蛋白功能研究,抗原及疫苗制备。我们利用杆状病毒表达系统构建了几种危害人类健康的病毒VLPs,并初步探究了其作为候选疫苗的免疫原性。寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是蚊传黄病毒,近年发现其感染与新生儿小头畸形有关,且能引起格林-巴利综合征等神经系统疾病。目前,对于ZIKV引起的疾病,尚无有效的疫苗和特异性治疗药物,ZIKV严重危害人类健康。我们利用杆状病毒表达系统,构建了表达ZIKV pr ME蛋白的重组病毒。经蔗糖密度梯度离心,从感染的昆虫细胞中纯化得到由ZIKV pr M蛋白和E蛋白自组装形成的ZIKV VLPs。以ZIKV pr ME VLPs免疫小鼠能够诱导小鼠产生中和抗体,及ZIKV特异的体液和细胞免疫反应,表现出良好的免疫原性,为以VLP为基础的ZIKV疫苗研发奠定了基础。我们也构建了表达ZIKV囊膜蛋白E的重组病毒,结果显示在昆虫细胞中囊膜蛋白E可以不依赖于pr M蛋白共表达组装成与ZIKV病毒粒子形态类似的VLP,并且释放到胞外。E蛋白保留膜融合活性,可以诱导合胞体形成,这一现象同样适用于包括日本脑炎病毒、登革热病毒和蜱传脑炎病毒在内的黄病毒。基于杆状病毒表达黄病毒囊膜蛋白E诱导合胞体形成的现象,我们还建立了靶向黄病毒E蛋白的抗病毒药物筛选平台。脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)是脊髓灰质炎(简称脊灰)的病原体。目前脊灰没有特异治疗方法,只能通过接种疫苗来预防。目前世界上普遍使用的脊灰疫苗有两种,即口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)和灭活脊髓灰质炎疫苗(IPV)。自从1988年世界卫生组织(WHO)发起全球消灭脊灰行动以来,世界各国大力推广OPV的使用,2015年和2019年,WHO先后宣布Ⅱ型和Ⅲ型脊灰野病毒的消灭。在根除脊灰的最后阶段,OPV和IPV都不可避免存在安全性问题,面临着免疫策略调整的挑战,在无PV的环境下生产疫苗更安全可靠。我们利用杆状病毒表达系统共表达PV的P1和3CD蛋白,P1前体可以被3CD蛋白酶成功剪切成衣壳蛋白VP0、VP1和VP3,经过蔗糖密度梯度离心结合氯化铯密度梯度离心可以纯化出PV VLPs,与天然PV病毒颗粒的形态、大小相似。克里米亚刚果出血热病毒(Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus,CCHFV)是一种高致病性病毒,可以导致克里米亚刚果出血热,一种以出血为典型特征的蜱媒自然疫源性疾病。CCHFV感染能引起人发热、出血以及多器官的功能衰竭,进而导致死亡,致死率高达30%-50%,没有有效的抗CCHFV的药物和疫苗,CCHFV是人类健康的潜在威胁。在我国病毒分类目录中,CCHFV属于第一类危害程度的病毒;在国外,CCHFV是生物安全4级的病毒。CCHFV在体外通过细胞培养进行病毒的分离和扩增较困难,极大限制了CCHFV的研究进展。我们构建重组病毒在昆虫细胞中共表达CCHFV的膜蛋白和核衣壳蛋白,或者单独表达膜蛋白。通过蔗糖密度梯度离心,成功从感染的细胞中制备出CCHFV VLPs。CCHFV病毒粒子表面是膜蛋白Gn和Gc,为了形成感染性病毒粒子,膜蛋白前体在细胞内经过复杂的剪切、加工和定位从而形成结构蛋白Gn和Gc,非结构蛋白GP160,GP85,GP38和NSm。在整个生命周期中CCHFV膜蛋白Gn和Gc在病毒入侵、膜融合、致病性、宿主选择和免疫逃逸等方面有重要作用。对CCHFV膜蛋白Gn和Gc宿主互作蛋白的研究,探索CCHFV与宿主的相互作用有利于了解CCHFV的分子生物学,找到病毒感染的关键宿主因子。为了研究CCHFV膜蛋白Gn/Gc与宿主的相互作用,我们首先制备了CCHFV膜蛋白Gn/Gc的单克隆抗体。以原核表达的Gn/Gc胞外区作为免疫原免疫小鼠,通过有限稀释法,以真核表达的Gn/Gc蛋白作为检测抗原,经ELISA方法初筛融合上清,结合蛋白免疫印迹分析和细胞免疫荧光检测。经过综合评定和比较,筛选出8株Gn单克隆化的杂交瘤细胞和10株Gc单克隆化的杂交瘤细胞。分别以不同截短形式的Gn/Gc原核表达蛋白为抗原,对融合上清的识别区段进行鉴定,最终鉴定出2株Gn单克隆抗体和1株Gc单克隆抗体及其识别的抗原表位。为了探索膜蛋白Gn/Gc的宿主互作蛋白,我们以带有Twin-strep标签的Gn或Gc作为诱饵蛋白,对样品进行细胞亲和纯化-质谱(AP-MS)鉴定。共鉴定出45个Gn或Gc相关宿

关键词： 脊髓灰质炎   序贯程序   免疫原性   安全性  

摘要： 目的:比较脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)与二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV) 3种序贯免疫接种程序的免疫原性和安全性。方法:2月龄的健康婴儿随机分配到3个研究组,于2,3,4月龄按照IPVbOPV-bOPV,IPV-IPV-bOPV和IPV-IPV-IPV的免疫程序完成基础免疫程序。分别于免前和最后一次接种后28～40 d内采血,采用细胞培养微量中和试验检测脊灰Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型中和抗体水平。采用发放日记卡的形式收集每次接种后30 d内的不良事件。结果:共入组648例符合条件的2月龄婴儿,每个研究组216例。入组性别、3种抗体的免前阳性率与几何平均滴度(GMT)在3个研究组间的统计学差异不显著。完成基础免疫后,Ⅰ型、Ⅲ型抗体免后阳性率均为100%,阳转率全部99%以上,3个研究组间统计学差异显著(P>0.05)。对于Ⅱ型抗体,免后阳性率分别为97.20%,100%和99.53%,阳转率分别为66.82%,93.02%和94.42%,3个研究组间的统计学差异具有显著性(P <0.001)。不良事件症状以发热为主,3个研究组发热发生率分别为15.89%,21.40%和27.91%,组间统计学差异具有显著性(P=0.010)。结论:3种脊灰疫苗序贯程序均有良好的安全性,目前国家免疫规划推荐的IPV-IPV-bOPV序贯接种程序相比IPV-bOPV-bOPV序贯接种程序具有更好的免疫效果。