关键词： immunocompetent   immunodeficient children   OPV strains   prolonged excretion   stool specimens   vaccine-derived polioviruses  

摘要： After exposure to the oral poliovirus vaccine (OPV), immunocompetent persons excrete poliovirus (PV) vaccine strains for a limited period. In contrast, immunodeficient individuals remain sometimes chronically infected, and in some cases, PV excretion times as long as 10 years have been reported. During prolonged replication in the human intestine, the PV vaccine strain almost invariably reverts its attenuated character and acquires neurovirulent properties (vaccine-derived PVs, or VDPVs), which resemble wild-type PV strains. The aim of this study was to determine the occurrence of OPV strains in stools of immunodeficient children from a selected area in South Africa, as a first step toward future research on the prevalence and potential health impact of VDPVs. In a period of I year, a total of 164 stool samples of HIV-positive children aged 4 months to 8 years were studied for the excretion of OPV strains. In addition, 23 stool samples from healthy immunocompetent children were analyzed after receiving their OPV immunization. By applying a reverse transcription-polymerase chain reaction in combination with a nested PCR, a total of 54 enteroviruses (EVs) were detected in the stool specimens of the immunodeficient children. Using restriction enzyme analysis, 13 PVs were distinguished from 41 nonpolio EVs (NPEVs). A Sabin-specific RT-triplex PCR confirmed the presence of 7 Sabin PV type 1, 4 Sabin PV type 3, and 2 Sabin PV type 2 isolates. The majority of the NPEV group was made up of 7 coxsackievirus 133 (CBV3), 6 echovirus 11 (ECV11), 5 ECV9, and 3 coxsackievirus A6 (CAV6) isolates. According to the results, two of the immunodeficient patients (P023 and P140) who had received their last OPV immunization more than 15 months before (vaccinated at 14 weeks of age) tested positive for Sabin PVs types 3 and 1, respectively. A 5-year-old immunodeficient patient (P052) who had received her last OPV immunization more than 42 months before (vaccinated at 18 months of age) tes

关键词： 噬菌体   脊髓灰质炎病毒   外环境   三氯异氰尿酸   正交试验   影响因素  

摘要： 消毒试验的指标微生物，应易于培养和检测、生长稳定、形态典型、对消毒因子的抵抗力在同类微生物中有代表性、对人畜无毒或弱毒。在消毒与灭菌效果评价中，指标微生物分为细菌繁殖体、分枝杆菌、细菌芽胞、真菌、病毒等。其中由于病毒试验要求高、培养时间长，特别是部分病毒还不能人工培养，因此，寻找病毒替代指标微生物一直受到广泛的关注。噬菌体是细菌的病毒，由核酸和外膜蛋白两部分组成。噬菌体的生物学特性与甲型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒相似，对消毒剂的抗力与致病性肠道病毒相似，检测方法较病毒简便，且对人不致病，因此噬菌体值得作为病毒污染和病毒灭活指示物进行研究。 在消毒和防护效果的评价指标中，需要一种既能代表病毒对常用消毒处理的抗力，又容易操作，对人安全无害的指标微生物。本课题主要通过悬液定量病毒灭活试验，研究比较了三种噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株对外环境和三氯异氰尿酸溶液中有效氯的抗力，并以T7噬菌体为指标毒株，观察了含氯消毒剂浓度、作用时间、有机干扰物和温度等因素对灭活病毒效果的影响。主要结果总结如下： 1 三种噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株对外环境抗力的比较 为了解噬菌体对外环境的抵抗力，采用悬液和载体定量试验方法，对F2噬菌体、T4噬菌体、T7噬菌体在干燥环境和潮湿环境中的抗力进行了观察，并与脊髓灰质炎病毒作平行比较。结果，在温度20℃、相对湿度8％—14％的干燥环境中，布片上脊髓灰质炎病毒—1型疫苗株，于生物安全柜中放置2h，病毒滴度下降5个对数值；f2噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体在同样条件下放置72h其滴度分别下降1.98、3.43、2.83；在干燥的布片上，三种噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株

关键词： 基因重组   gp120基因片段   DNA序列   HIV疫苗   脊髓灰质炎病毒  

摘要： 目的： 用基因重组技术，构建含有中国流行株HIV-1 CN54 gp120基因的重组PV载体，为HIV疫苗的进一步研究奠定基础。 方法： 采用加端PCR的方法，扩增出两端带有AatⅡ和SnaBⅠ限制性内切酶位点的gp120基因片段，经双酶切回收纯化后，将这段基因片段与经过双酶切消化后回收纯化的PV载体大片段进行连接。将重组子转化***感受态细胞，提取质粒，进行PCR、酶切鉴定和DNA序列分析。鉴定基因重组正确的表达质粒经大量扩增纯化后，转染处于对数生长期的HeLa细胞，提取细胞总RNA，进行RT-PCR检测目的基因在mRNA水平上的表达情况;提取细胞总蛋白，进行Western-Blot分析检测目的基因在蛋白水平上的表达情况。 结论： 1.首次成功构建了包含中国主要流行株HIV-1 B'/C重组毒株CN54 gp120基因的重组PV缺陷型疫苗表达载体。 2.完成对重组PV载体的鉴定，并将其转染HeLa细胞，对目的基因在mRNA和蛋白水平的表达进行了检测。 3.对PV基因组P1区整个VP3区和部分VP2、VP1区1118～2954位处进行双酶切处理，切除1836bp的原基因片段，然后插入大片段外源性基因——1524 bp的gp120基因片段后，仍能维持基因组的翻译阅读框的稳定，转染HeLa细胞后能使外源性抗原得到表达。 4.为中国HIV候选疫苗的进一步研究如衣壳化及进一步动物实验等奠定了基础。

关键词： 噬菌体   脊髓灰质炎病毒   三氯异氰尿酸   正交试验   病毒灭活  

摘要： 消毒试验的指标微生物，应易于培养和检测、生长稳定、形态典型、对消毒因子的抵抗力在同类微生物中有代表性、对人畜无毒或弱毒。在消毒与灭菌效果评价中，指标微生物分为细菌繁殖体、分枝杆菌、细菌芽胞、真菌、病毒等。其中由于病毒试验要求高、培养时间长，特别是部分病毒还不能人工培养，因此，寻找病毒替代指标微生物一直受到广泛的关注。噬菌体是细菌的病毒，由核酸和外膜蛋白两部分组成。噬菌体的生物学特性与甲型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒相似，对消毒剂的抗力与致病性肠道病毒相似，检测方法较病毒简便，且对人不致病，因此噬菌体值得作为病毒污染和病毒灭活指示物进行研究。 在消毒和防护效果的评价指标中，需要一种既能代表病毒对常用消毒处理的抗力，又容易操作，对人安全无害的指标微生物。本课题主要通过悬液定量病毒灭活试验，研究比较了三种噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株对外环境和三氯异氰尿酸溶液中有效氯的抗力，并以T7噬菌体为指标毒株，观察了含氯消毒剂浓度、作用时间、有机干扰物和温度等因素对灭活病毒效果的影响。主要结果总结如下： 1.三种噬菌体与脊髓灰质病毒I型疫苗株对外环境抗力的比较 为了解噬菌体对外环境的抵抗力，采用悬液和载体定量试验方法，对F2噬菌体、T4噬菌体、T7噬菌体在干燥环境和潮湿环境中的抗力进行了观察，并与脊髓灰质炎病毒作平行比较。结果，在温度20℃、相对湿度8％-14％的干燥环境中，布片上脊髓灰质炎病毒-1型疫苗株，于生物安全柜中放置2h，病毒滴度下降5个对数值;f2噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体在同样条件下放置72h其滴度分别下降1．98、3．43、2．83;在干燥的布片上，三种噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株的存活时间的长短顺序为：f2噬菌体>T7噬菌体>T4噬菌体>脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株(PV-1)。在模拟潮湿环境的标准硬水中存放14d，F2、T4、T7噬菌体下降的对数值依次为3．67、0．44、0．05，脊髓灰质炎病毒下降对数值为1．72;三株噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株的存活时间的长短顺序为：T7噬菌体>T4噬菌体>脊髓灰质病毒I型疫苗株(PV-1)>f2噬菌体。结论，三种噬菌体和脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株在干燥或潮湿条件下均呈随时间延长其滴度逐渐下降：在干燥环境中滴度下降速度明显快于潮湿环境;以T7噬菌体对干燥和潮湿环境耐受力最强。 2.三种噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株对三氯异氰尿酸消毒剂抗力的比较。 试验结果表明，三种噬菌体与脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株，对三氯异氰尿酸消毒剂的浓度系数(η值)由大到小的顺序为：f2噬菌体>T4噬菌体>T7噬菌体>脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株;在三氯异氰尿酸溶液中的有效氯含量为200mg／L时，各指标毒株的抗力由大到小顺序为：f2噬菌体>T4噬菌体>T7噬菌体>脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株，其速度常数(K值)的顺序由小到大为：f2噬菌体消毒剂浓度>灭活时间>灭活时间*小牛血清含量>消毒剂浓度木小牛血清含量;温度、消毒剂浓度与灭活时间之间的交互作用对结果的影响无显著性意义。4个因素对T7噬菌体灭活效果的影响程度依次为小牛血清的含量、消毒剂的浓度、灭活时间和温度。 本课题通过对f2噬菌体、T7噬菌体、T4噬菌体与脊髓灰质炎病毒作平行比较，得出如下结论：T7噬菌体不仅在外环境中生存能力最强，而且对三氯异氰尿酸溶液中有效氯的抗力与脊髓灰质炎病毒的抗力相当，基本上符合消毒试验标准菌株应具备的条件，只是有机干扰物对T7噬菌体的灭活效果影响较大。

关键词： 脊髓灰质炎病毒   Sabin株   D抗原   单克隆抗体  

摘要： 脊髓灰质炎(poliomyelitis)(脊灰)是一种传播广泛、侵犯中枢神经系统的病毒性传染病，自1988年实施消灭脊髓灰质炎(脊灰)战略以来，我国通过接种口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)消灭了本土野毒株引起的脊髓灰质炎。但是仍存在OPV引起的疫苗相关麻痹病例(VAPP)和疫苗衍生株(VDPV)，脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)基本可避免OPV上述缺点。WHO指出当全球证实消除脊灰后，将停止使用OPV，届时可能需要脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)来长期保持脊灰免疫水平。相对于野毒株IPV，Sabin株IPV在制造和使用过程中更安全，对它的研究受到了WHO的高度重视。目前生产减毒株灭活疫苗的国家有中国、日本及荷兰。我所正在积极研制Sabin IPV，D抗原量是体外测定IPV效力的关键指标，与疫苗在人体内免疫效力有较好的一致性。目前国际上尚缺乏Sabin IPV D抗原检测的标准化的试剂，本实验应用杂交瘤技术所制备的抗Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体分子量为150KD；纯化抗体的ELISA效价为1：2.4×10～6，中和抗体效价为1：1.3×10～4；与Ⅱ型Sabin株C抗原、Ⅰ型、Ⅲ型Sabin病毒抗原不发生交叉反应，特异性良好。并用此单克隆抗体的ELISA法与本室建立的多抗方法进行比较，同时对三价Sabin IPV疫苗中Ⅱ型D抗原的含量进行测量，发现在0.125Du／ml-2 Du／ml范围内应用单抗测量D抗原的直线相关系数为0.998、0.966、0.903；而使用本室建立的多抗方法直线相关系数为1.000、0.998、0.986。本实验制备的单克隆抗体具有良好的特异性，可为Sabin IPV体外效力检测的标准化奠定基础。

关键词： 严重急性呼吸综合征   脊髓灰质炎病毒   呼肠病毒  

摘要： 严重急性呼吸综合征(SARS)作为一种新发传染病,2003年4月WHO已正式宣布SARS-冠状病毒(SARS-CoV,SARS Coronavirus)是导致SARS的病原体。然而2003年军事医学科学院微生物流行病研究所却从北京第一例确诊SARS患者及其母亲的咽拭子标本中分离到了呼肠病毒,在我们进一步研究呼肠病毒的基因序列时,却意外的在标本中检测到了脊髓灰质炎病毒。为了进一步研究SARS的病原学,我们采用细胞培养法、RT-PCR、中和试验、血清学检测等方法对SARS患者发病时及痊愈2年后的临床标本进行呼肠病毒和脊髓灰质炎病毒的分离鉴定。 在SARS发病时,我们利用HEp-2细胞对4份确诊SARS患者的咽拭子标本进行病毒分离,接种后细胞均在培养第3d开始出现细胞病变效应。采用随机引物RT-PCR对细胞培养上清液进行了病毒核酸扩增,结果在4份标本中扩增出了脊髓灰质炎病毒,3份标本中扩增到了呼肠病毒,4份咽拭子标本接种HEp-2细胞后,细胞病变均不能被呼肠病毒1、2、3型抗血清中和,但却可以被含有1型脊髓灰质炎病毒的混合标准抗血清中和,中和试验结果显示这4份咽拭子标本中均含有Ⅰ型脊髓灰质炎病毒,而所扩增到的呼肠病毒可能是一种新型的呼肠病毒。采用脊髓灰质炎病毒和呼肠病毒特异性引物RT-PCR方法,对上述4份细胞培养上清液进行扩增,并将PCR产物克隆到T-easy载体后测序,测序结果显示在4份标本中均检测到了脊髓灰质炎病毒,而在3份咽拭子标本中检测到了呼肠病毒。为了进一步明确脊髓灰质炎病毒在SARS患者体内存在的真实状态,我们采用特异性引物RT-PCR的方法对25例确诊SARS患者的临床标本进行检测,结果Ⅰ型脊髓灰质炎病毒阳性率为60%(15/25),呼肠病毒阳性率为18.2%(8/25);而对照组中的25例患者,脊髓灰质炎病毒的阳性率仅为4%(1/25),呼肠病毒阳性率为0(0/25)。脊髓灰质炎病毒的阳性率经统计学分析,两组之间具有显著性差异(P<0.01)。测序结果显示这些检测到的脊髓灰质炎病毒与Ⅰ型脊髓灰质炎病毒具有99%的同源性,但在480nt和2795nt两个重要的减毒位点上均发生了回复突变;我

关键词： ORAL poliomyelitis vaccine   VIRAL vaccines   POLIOVIRUS   VACCINATION   POLYMERASE chain reaction   IMMUNITY  

摘要： Inactivated poliovirus vaccine (IPV) is believed to induce significantly lower mucosal immunity than oral poliovirus vaccine (OPV). Most of the data supporting this were generated before enhanced IPV (eIPV) was introduced. Excretion of poliovirus by OPV recipients can be used to assess intestinal immunity. We studied polymerase chain reaction amplification of viral complementary DNA from the stool of children vaccinated with either OPV alone or eIPV. Of first-time OPV recipients, 92% excreted virus after 1 week, and 81% excreted virus after 3 weeks. Prior vaccination with OPV reduced the number to 22% and shortened the duration of virus excretion (to 5% after 3 weeks). Two doses of IPV reduced the number of poliovirus-positive 1-week samples (to 76%), the duration of shedding (to 37% at 3 weeks), and the quantity of excreted virus. This suggests that IPV-vaccinated communities are partially protected from the spread of poliovirus. Further enhancement of IPV potency may lead to even higher levels of mucosal immunity.

关键词： ORAL poliomyelitis vaccine   VACCINATION   IMMUNITY   VIRAL vaccines   PUBLIC health -- United States  

摘要： The article focuses on the use of oral poliovirus vaccine (OPV) in the U.S. In the years before the introduction of live, attenuated OPV, there was a vigorous debate between advocates of killed and live vaccines. Proponents of live vaccine took the position that OPV would produce immunity more similar to that produced by wild viruses, providing superior individual and population protection. Proponents of inactivated poliovirus vaccine (IPV) felt that there was a risk that attenuated viruses would regain their virulence and that person-to-person spread could permit continuous circulation of vaccine virus. Apart from the public health and ethical issues associated with continued vaccination against a nonexistent disease, OPV cannot simply be supplanted by IPV.

关键词： Polioviruses   HIV   Poliovirus Vaccines   Virus   脊髓灰质炎病毒   Oral Poliovirus Vaccine   Poliovirus   campaign life   Virus Shedding   HIV   Persons   Poliovirus Vaccines   shedding   viruses  

摘要： Background. As polio eradication nears, the development of immunization policies for an era without the disease has become increasingly important. Outbreaks due to circulating vaccine-derived poliovirus (VDPV) and rare cases of immunodeficient persons with prolonged VDPV shedding lend to the growing consensus that oral poliovirus vaccine (OPV) use should be discontinued as soon after polio eradication as possible. The present study was conducted to assess whether persons infected with human immunodeficiency virus (HIV) experience prolonged VDPV shedding and serve as a source of reintroduction of virus into the population. Methods. Adults infected with HIV had specimens tested (1) 8 months after a mass OPV campaign, to determine whether poliovirus related to OPV administered during the campaign was present (i.e., prolonged excretion), and (2) starting 7 weeks after a subsequent campaign, to determine whether poliovirus could be detected after the height of OPV exposure. Results. A total of 419 participants were enrolled-315 during the 8-12 months after an OPV campaign held in 2001 and 104 during the 7-13 weeks after a 2002 campaign. No poliovirus was isolated from any participants. Conclusions. It appears unlikely that adults infected with HIV experience prolonged vaccine virus shedding, and, therefore, they probably represent a minimal risk of reintroducing vaccine virus into the population after poliovirus has been eradicated.

关键词： 脊髓灰质炎病毒   细胞系敏感性实验   质量控制参考株   中国疫苗参考株  

摘要： 目的评价中国疾病预防控制中心(CDC)病毒病预防控制所国家脊髓灰质炎(脊灰)实验室所用细胞系对脊灰病毒的敏感性,制备国家脊灰实验室质量控制株(China Sabin Master Reference,CSMR)和用于脊灰实验室网络的中国Sabin参考株(China Sabin Test Reference Strain;CSTRS),提供给省级CDC脊灰实验室用于其对所使用的RD-A、L20B细胞系的敏感性评价。方法96孔微量培养板滴定法。结果国家脊灰实验室CSMR 3次独立的细胞敏感性实验结果的滴度波动在±0.5log10,同时用英国国家生物标准品与控制样品研究所(NIBSC)提供的已知滴度Sabin脊灰病毒参考株(NIBSC原始株)作平行对照,NIBSC原始株3次滴度结果与其本身提供的参考值相比较,其滴度波动也均在±0.5log10。结论通过NIBSC原始株3次滴度结果作平行对照,证实中国CSMS结果符合实验要求,国家脊灰实验室的内部CSMR结果有效;从而制定了国家脊灰实验室质量控制参考株的滴度参考值,表明国家脊灰实验室所用细胞系的敏感性未下降,实验程序无误。CSTRS可作为标准株分发到省级CDC脊灰实验室用于进行细胞系敏感性实验。