关键词:
脊髓灰质炎
病毒
非同位素杂交
摘要:
以脊髓灰质炎(简称脊灰)病毒Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型2500~2600碱基区域(病毒VP1氨基末端)为目的基因片段,人工合成了寡核苷酸引物和探针。以Digoxigenin-11-dUTP代替^(32)P-dATP,建立了Digoxige-11-dUTP末端标记寡核苷酸探针,以及在PCR过程中Digoxigenin-11-dUTP直接掺入扩增产物制备探针的方法,并将探针应用于分离的脊灰野毒株和疫苗相关株的鉴别诊断。Digoxigenin末端标记探针和掺入PCR探针均具有型特异性,用于鉴别我国部分地区分离的脊灰毒株的结果表明,Ⅰ型分离株中90%为野毒株,Ⅱ、Ⅲ型分离株均为疫苗相关株,说明我国近年引起脊灰暴发的仍以Ⅰ型野毒株为主。探针可检测至少10~2~10~3TCID_(50)/ml样品。与同位素标记探针敏感性一致。在PCR过程中直接掺入Digoxigenin标记探针,不需纯化,大大简化了操作步骤,提高了标记效率。Digoxigenin标记探针敏感、特异,对人体无害,不受同位素半衰期影响,可回收反复使用;操作简单,出结果快,易于判断,适合在我国推广使用。