关键词： 2-苯氧乙醇   Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗   气相色谱法  

摘要： 目的 建立用于检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（Sabin inactivated poliovirus vaccine,sIPV）(Vero细胞)中2-苯氧乙醇含量的气相色谱法（gas chromatography,GC），并进行验证，以期为生物制品中2-苯氧乙醇含量的检测提供可靠的方法。方法 采用聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）GC柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）进行2-苯氧乙醇含量检测。色谱条件：载气为氮气，进样量为1μL，分流比为1∶10，载气流速为1 mL/min；程序升温：起始柱温为90℃，以每分钟10℃的速率升温至220℃，维持10 min，采用火焰离子化检测器（flame ionization detector,FID）采集信号。验证方法的线性范围、重复性、准确性及专属性。分别采用建立的方法及高效液相色谱法（high performance liquid chro-matography,HPLC）检测3批sIPV（Vero细胞）中2-苯氧乙醇含量，并进行比较。结果 对照品溶液在0.2～1.0 mg/mL浓度范围内，与峰面积呈良好的线性关系，线性方程为：y=4 021.44 x+97.07,R2=0.998;6份供试品溶液中2-苯氧乙醇含量RSD<2.0%;9份供试品的高、中、低浓度加样回收率均在90%110%范围内；对照品及供试品溶液均于9.1 min处可见2-苯氧乙醇色谱峰，阴性样品未见该色谱峰，对供试品无干扰。GC及HPLC法检测3批供试品中2-苯氧乙醇含量均值分别为（4.990±0.175）和（4.986±0.122）mg/mL，差异无统计学意义（t=0.045 6,P=0.967 8）。结论 建立的GC法具有良好的重复性、准确性及专属性，有望成为替代HPLC的新方法。

关键词： Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗   基础免疫   加强免疫   同时接种   安全性  

摘要： 目的评价一款国产Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin-strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)上市后在婴幼儿中基础免疫和加强免疫与其他疫苗同时接种的安全性。方法在江西省两个地区招募2月龄和18-26月龄受试者分别进行3剂次sIPV基础免疫和1剂次加强免疫,并按一定比例随机单独接种和与其他疫苗同时接种,收集每剂次接种后0-30 d内不良反应,分析不良反应发生率。结果sIPV基础免疫组和加强免疫组分别纳入受试者1999例和1199例。基础免疫组总不良反应发生率为1.77%(103/5823),其中sIPV单独接种、sIPV与无细胞百白破联合疫苗同时接种的不良反应发生率分别为1.81%(71/3926)、1.69%(32/1897)(χ^(2)=0.11,P=0.742)。加强免疫组总不良反应发生率为2.67%(32/1199),其中sIPV单独接种、sIPV与任何其他三种疫苗同时接种的不良反应发生率分别为2.25%(9/400)、2.88%(23/799)(χ^(2)=0.41,P=0.524)。所有不良反应的严重程度为1-3级,未报告4级或严重不良反应。结论适龄儿童sIPV基础免疫和加强免疫或与其他疫苗同时接种具有良好的安全性。

关键词： 脊髓灰质炎病毒   qPCR方法   病毒载量   小鼠模型  

摘要： 目的建立减毒的脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)Sabin株的荧光定量PCR检测方法,为PV病毒载量检测提供快速、精准的检测方法。方法首先,针对PV的3个血清型VP1基因编码特异序列构建标准质粒;其次,将经PCR鉴定和测序分析验证的质粒按10倍稀释制作标准曲线,从而建立检测PV的SYBR Green荧光定量PCR(qPCR)方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性;最后,将本方法用于检测经减毒活疫苗株感染人源化小鼠模型组织中的病毒载量。结果经PCR鉴定和测序分析,标准质粒序列正确;PV 3种血清型的标准曲线特异性好,log拷贝数与Ct值具有良好的线性关系,相关性系数(R)均大于0.99,扩增效率在99%~110%,检测灵敏度为10 copies/μL,高于普通PCR 100倍。荧光定量PCR反应的扩增曲线呈S型,且熔解曲线主峰单一,表明特异性较好,扩增条件可靠。应用该方法检测感染后hPVR小鼠模型的不同组织的病毒载量,发现仅在脊髓和脑组织中检测出PV,呈现神经组织噬性。结论本文建立的SYBR Green荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可用于检测感染的hPVR小鼠模型组织中的病毒载量,为后续研究PV发病机制及PV疫苗体内安全性及有效性提供了可靠的实验方法。

关键词： 急性弛缓性麻痹   脊髓灰质炎病毒   疫苗高变异株  

摘要： 目的了解河南省2023年急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例中脊髓灰质炎(脊灰)病毒VP1区核苷酸突变个数、突变位点及其氨基酸变异情况。方法对AFP病例中分离到的11株脊灰病毒进行VP1区核苷酸序列测定和分析,使用Contig Express软件对序列进行拼接,使用MEGA软件对序列进行比对分析。结果通过Realtime RT-PCR鉴定的11株脊灰病毒,均为疫苗相似株(Sabin-Like,SL),1株为SLIII,3株为SLI,7株为SLI+SLIII,其中2023-506F1 III型为6个核苷酸变异,是疫苗高变异株脊灰病毒(Vaccine-hypervariable Poliovirus,VHPV)。10株SLI毒株与SLI参考株相比,发现nt2749是常见突变位点,同时导致编码氨基酸的改变;与WPVI参考株相比,nt2749为毒力回复突变。8株SLIII毒株与SLIII参考株相比,发现nt2832、nt3353和nt3357为常见突变位点,同时导致编码氨基酸的改变;与WPVIII参考株相比,nt2832和nt3301为毒力回复突变。结论河南省2023年AFP中分离到的11株脊灰病毒均为疫苗相似株,某些位点发生毒力回复突变。

关键词： 脊髓灰质炎   脊髓灰质炎疫苗高变异株病毒   急性迟缓性麻痹   健康携带者  

摘要： 脊髓灰质炎(poliomyelitis, 以下简称"脊灰")是一种由脊灰病毒(polio virus, PV)引起的急性肠道传染病, 临床表现为急性迟缓性麻痹(acute flaccid paralysis, AFP), 主要感染5岁以下儿童, 可造成患者永久瘫痪甚至死亡, 曾在全球广泛流行。由于口服脊灰减毒活疫苗(oral polio vaccine, OPV)的广泛应用, 由野生脊灰病毒(wild polio virus, WPV)引起的脊灰总发病率下降了99.9%[1]。虽然OPV在全球脊灰根除行动中发挥了非常重要的作用, 但由于基因突变或重组, 如脊灰疫苗高变异株病毒(vaccine-hypervariable polio virus, VHPV)和脊灰疫苗衍生病毒(vaccine-derived polio virus, VDPV)等均可导致患儿残留麻痹[2,3,4], 这给维持无脊灰工作带来了新的挑战。2021年12月在江西省九江市1例AFP病例的接触者A粪便样本中分离出Ⅲ型VHPV, 现将现场调查与应急处置有关情况报告如下。

关键词： 脊髓灰质炎病毒   质量控制标准株   细胞系敏感性实验   支原体检测   脊髓灰质炎实验室   分析  

摘要： 目的评估2012—2022年陕西省脊髓灰质炎(简称“脊灰”)实验室所用细胞系对脊灰病毒细胞敏感性(cell sensitivity,CS)的监测,为保持无脊灰状态提供质量保证。方法选择陕西省脊灰实验室2005年制备的实验室质量控制(laboratory quality control,LQC)标准Sabin株Ⅰ﹑Ⅱ﹑Ⅲ型,以及国家脊灰实验室(National Polio Laboratory,NPL)提供的转人脊灰病毒受体的小鼠肺细胞(mouse L cells expressing the human Poliovirus receptor,L20B)系、人横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞,采用96孔微量培养板滴定法测定陕西省疾病预防控制中心脊灰实验室2012—2022年所用细胞系对脊灰病毒敏感性,使用Karber公式计算病毒滴度,并对检测结果进行分析描述。结果RD细胞均数±标准差:Ⅰ型(7.57±0.19),Ⅱ型(7.55±0.11),Ⅲ型(7.78±0.17);L20B均数±标准差:Ⅰ型(6.80±0.25),Ⅱ型(6.83±0.25),Ⅲ型(6.74±0.23)。与陕西省疾病预防控制中心脊灰实验室的LQC株的参考值相比其滴度均在±0.5log 10CCID_(50)/0.1ml以内波动。结论2012—2022年陕西省脊灰实验室所用细胞系对脊灰病毒敏感性较好,敏感性未下降,为陕西省维持无脊灰状态提供了坚强的保障。

关键词： 二代测序   Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗   质量控制   突变频率  

摘要： 目的将二代测序(next generation sequencing,NGS)技术应用至Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)(Sabin strain inactivated poliomyelitis vaccine,sIPV)生产质量监控中,以期确保疫苗的安全性和批间一致性。方法将脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)Sabin株Ⅰ型、Ⅱ型和Pfizer株Ⅲ型工作种子批分别接种至生物反应器微载体培养的单层Vero细胞上,33℃培养3~4 d,获得疫苗代次病毒液,每个型别制备3批。提取各型别工作种子批毒种和疫苗代次病毒液RNA,用NGS技术分析基因突变频率、神经毒力决定位点、突变热点及批间一致性。结果3种型别PV工作种子批毒种经培养后,Sabin株Ⅱ型和Pfizer株Ⅲ型比Sabin株Ⅰ型更易发生突变,非编码区神经毒力决定位点突变频率明显上升(t=3.21~5.83,P均<0.05),编码区神经毒力决定位点突变频率变化较小(t=1.29~2.34,P均>0.05)或明显下降(t=6.01~9.62,P均<0.05);Sabin株Ⅱ型毒株的nt869位点及Pfizer株Ⅲ型毒株的nt2493位点各发生1个突变热点,突变方式均为C→T,其中nt2493既是神经毒力决定位点,也是突变热点。3种型别各3批疫苗代次病毒液均具有良好的批间一致性,基因组VP1区域各核酸位点突变频率批间拟合R2为0.947~0.995。结论NGS技术可高效检测sIPV生产过程中PV基因组的突变,且稳定可靠,可用于该疫苗的质量控制。

关键词： 假病毒   脊髓灰质炎   重组脊髓灰质炎疫苗  

摘要： 目的初步研究基于脊髓灰质炎假病毒的中和试验在重组脊髓灰质炎疫苗的免疫原性评价和大鼠效力试验中的适用性。方法对重组脊髓灰质炎疫苗免疫后的大鼠血清同时采用假病毒中和试验和Sabin株中和试验进行检测,分别采用Kappa检验和Spearman秩相关分析两种方法的一致性和相关性。结果针对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体,两种方法一致性检验的Kappa值分别为0.914、1.000、0.751;相关系数R值分别为0.833、0.927、0.859,P值均<0.001。结论两种方法的结果具有一致性,相关性较好,表明脊髓灰质炎假病毒中和试验可用于疫苗免疫原性评价和大鼠效力试验。

关键词： 急性弛缓性麻痹   脊髓灰质炎病毒   非脊髓灰质炎肠道病毒   核苷酸序列   监测   分析  

摘要： 目的分析陕西省急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例及接触者病毒分离和鉴定情况,为继续维持无脊髓灰质炎状态提供理论依据。方法采用描述性流行病学方法进行指标描述,将2014—2021年陕西省报告的AFP病例及接触者粪便标本,采用转人类脊髓灰质炎病毒受体小鼠肺细胞(mouse cell line expressing the gene for human cellular receptor for Poliovirus,L20B)系和人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞,根据WHO《脊髓灰质炎实验室手册》开展脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)检测,对L20B阳性分离物采取逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法扩增VP1区片段,同时开展核苷酸序列测定分析。结果从1104份AFP病例及接触者粪便标本检出7份PV阳性,14株PV,分离率为0.63%,分离非脊髓灰质炎肠道病毒(non-polio Enteroviruses,NPEV)36株,分离率为3.26%。相比昆明株和Sabin株,脊髓灰质炎病毒VP1区核苷酸<6个变异的为13株,1株发生9个变异;NPEV阳性分离例数7月和8月较多,占总数的30.56%。结论陕西省AFP监测系统运行良好,2014—2021年未发现野生型脊髓灰质炎病毒(wild Poliovirus,WPV)及疫苗衍生脊髓灰质炎病毒(vaccine-derived Poliovirus,VDPV),继续保持无脊髓灰质炎状态。

关键词： 脊髓灰质炎疫苗   实验者   顾方舟   一生  

摘要： “我的孩子小东算一个!”1960年的一天,病毒学家顾方舟作了一个足以赌上他一生幸福的决定——让自己未满周岁的儿子小东,作为脊髓灰质炎疫苗I期临床试验的首个儿童实验者。