关键词： 急性弛缓性麻痹   脊髓灰质炎病毒   疫苗衍生脊灰病毒  

摘要： 目的评价贵州省2011年急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例病原学监测情况,巩固无脊髓灰质炎(脊灰)成果。方法采用病毒分离、鉴定与核苷酸序列分析的方法,对贵州省2011年报告的AFP病例粪便标本进行病毒学检测和结果分析。结果 2011年贵州省脊灰实验室各项监测指标均达到世界卫生组织(WHO)的要求,2011年贵州省脊灰实验室收到195例AFP病例粪便标本,其中分离到脊灰病毒(Poliovirus,PV)9例,分离率为4.6%;非脊灰肠道病毒(Non-Polio Enterovirus,NPEV)24例,分离率为12.3%。所有PV阳性分离物均送到国家脊灰实验室进行型内鉴定,在1例AFP病例中,分离到2株II型疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived Poliovirus,VDPVs),无2代病例发生;未发现脊灰野病毒(Wild Poliovirus,WPV)。2011年贵州省脊灰实验室通过WHO和国家脊灰实验室的能力验证和现场认证评估。结论 2011年贵州省脊灰实验室监测系统运转正常,贵州省继续保持无脊灰状态。

关键词： drinking water   viral inactivation   virus  

摘要： The antimicrobial activity of simulated solar disinfection (SODIS) against enteric waterborne viruses including coxsackievirus-B5, poliovirus-2 and hepatitis A virus was investigated in this study. Assays were conducted in transparent 12-well polystyrene microtitre plates containing the appropriate viral test suspension. Plates were exposed to simulated sunlight at an optical irradiance of 550 Wm(-2) (watts per square metre) delivered from a SUNTEST (TM) CPS + solar simulator for 6 hours. Aliquots of the viral test suspensions were taken at set time points and the level of inactivation of the viruses was determined by either culture on a HeLa cell monolayer for coxsackievirus-B5 and poliovirus-2 or by utilising a chromogenic antibody-based approach for hepatitis A virus. With coxsackievirus-B5, poliovirus-2 and hepatitis A virus, exposure to SODIS at an optical irradiance of 550 Wm(-2) for 1-2 hours resulted in complete inactivation of each virus. The findings from this study suggest that under appropriate conditions SODIS may be an effective technique for the inactivation of enteric viruses in drinking water. However, further verification studies need to be performed using natural sunlight in the region where the SODIS technology is to be employed to validate our results.

关键词： 急性弛缓性麻痹(AFP)   脊髓灰质炎病毒(PV)   疫苗衍生株脊髓灰质炎病毒(VDPVs)  

摘要： 目的总结分析贵州省脊灰病毒学监测工作经验;提供贵州省维持无脊灰状态病毒学监测依据。方法采用病毒分离、鉴定与核苷酸序列分析的方法,对贵州省2000～2009年报告的急性弛缓性麻痹(AFP)病例及接触者、健康人群粪便标本进行病毒学检测和结果分析。结果①2000～2009年全省共报告AFP病例3012例,采集报告AFP病例、AFP接触者和健康人群粪便标本共3207例6609份;②从所有粪便标本中分离到脊灰病毒(PV)275例(株),10年总分离率为6.7%,分离到非脊灰其他肠道病毒(NPEV)484例(株),总分离率为11.8%;③275株PV经国家脊灰实验室鉴定,225株为疫苗相关株(81.8%),44株为疫苗变异株(16.0%),6株为疫苗衍生株(VDPVs)占2.2%。至2009年底该省已连续16年未分离到脊灰野病毒;④2000～2009年该省均以优异成绩顺利通过WHO和国家脊灰实验室每年一次的能力验证考核和每2～3年一次的合格脊灰实验室现场认证。结论贵州省脊灰实验室监测系统运转良好,充分发挥了脊灰病毒学监测的作用;监测系统及时发现和处置了疫苗衍生株脊灰病毒(VDPVs)循环,未发现脊灰野病毒株,该省达到了保持无脊灰状态的目标。

关键词： 急性弛缓性瘫痪   手足口病   非脊髓灰质炎肠道病毒  

摘要： 目的探讨内蒙古第四医院2009-2010年收治的4例手足口病(HFMD)合并急性迟缓性瘫痪(AFP)的临床特点。方法回顾性分析4例手足口病合并AFP患者的流行病学及临床资料,并对患者瘫痪肢体功能恢复情况进行了4周的随访。结果本组病例中3例儿童,平均年龄(30.33±11.37)月;1例成人。患者在发热后(2.50±0.50)d出现急性迟缓性瘫痪表现,在2～3d内发展至高峰。4例均表现为脊髓灰质炎样麻痹。单侧上肢瘫痪2例,单侧下肢瘫痪2例,肌力为0～Ⅱ级。4例均合并中枢神经受累。随访瘫痪肢体在1周内自远端开始恢复。结论手足口病合并AFP者<3岁儿童多见,成人极少;瘫痪发生在手足口病的初起阶段,在瘫痪发生后2～3d内发展到顶峰;多数患者以单侧肢体瘫痪为主,单纯下肢瘫痪者比单纯上肢瘫痪者恢复快;儿童比成人恢复快;多合并脑炎、脑膜炎等神经系统损害。早期针对AFP的治疗措施有助于功能康复。

关键词： 二氧化氯   消毒剂   剂型   杀菌作用   大肠杆菌   金黄色葡萄球菌   白色念珠菌   脊髓灰质炎病毒  

摘要： 二氧化氯作为第四代消毒剂，具有环保、高效、快速、广谱的消毒特点，已经逐渐替代氯制剂而成为广泛应用的消毒产品。目前市场上的二氧化氯消毒剂主要是液体型二氧化氯消毒剂和固体型二氧化氯消毒剂两种剂型。其中液体剂型产品体积大、运输不便；而固体剂型多为二元包装，使用不方便。为此，我们旨在研制一种一元固体二氧化氯消毒剂，可以克服上述剂型缺陷，为市场提供一种运输及使用方便的新型二氧化氯消毒剂配方。本研究包括配方筛选、杀灭微生物效果、消毒影响因素观察三个部分。 配方的筛选主要选择亚氯酸钠与固体酸酐反应为主,利用高分子材料的包裹作用及无机化合物的钝化作用来稳定消毒剂。在消毒剂配方优化阶段,我们通过全因子实验设计（析因设计），就参与二氧化氯生成的两个主要组分亚氯酸钠及硫酸氢钠进行实验观察，根据两因素析因设计定量资料的方差分析，使用SAS8.0统计软件对结果进行统计分析，得出结果，亚氯酸钠的剂量（A）和硫酸氢钠的剂量（B）对二氧化氯产生量的影响都具有统计学意义（F=31810.53，P<0.0001；F=31577.50，P<0.0001），两因素之间的交互作用（A×B）也有统计学意义（F=1992.77，P<0.0001）。进而可以证明亚氯酸钠和硫酸氢钠对二氧化氯的生成量均有较大影响，且两者的影响具有相互联系。根据具体数值可以发现，在硫酸氢钠（B）所取的3个水平上，亚氯酸钠的使用剂量对二氧化氯的产生影响较大，二氧化氯的产量随亚氯酸钠剂量的增加而增大，但在亚氯酸钠（A）剂量固定的情况下，硫酸氢钠取40g时，二氧化氯产量最高。通过9个均值之间两两比较的结果，最终我们选择了与其他组有显著性差异且二氧化氯产量最大的一组配方。配方由30g亚氯酸钠，40g硫酸氢钠，5g包覆剂，15g钝化剂，12g干燥剂混合组成。此配方配制的消毒液二氧化氯含量可达383.89mg/L。且配方在37℃恒温箱内保存3个月后，下降率为8.4%，稳定性较好。 该新型二氧化氯消毒剂对微生物具有良好的杀灭效果。杀菌速度快、所需浓度低。二氧化氯浓度25mg/L的消毒液作用1min，对金黄色葡萄球菌ATCC6538、大肠杆菌8099、白色念珠菌ATCC10231的杀灭率可达100%；对细菌芽孢的杀灭效果差于细菌繁殖体和真菌，二氧化氯含量为25mg/L的消毒剂作用1min，对枯草杆菌黑色变种ATCC9372芽孢的杀灭率为99.94%，当二氧化氯含量提高到50mg/L时，作用1min，对枯草杆菌黑色变种ATCC9372芽孢的杀灭率就可达100%。可能的原因是，芽孢的外层结构较复杂，有致密的芽孢外衣、芽孢壳、外层膜等多层结构。二氧化氯浓度50mg/L的消毒液作用1min，对脊髓灰质炎病毒（PV-1）的平均灭活对数值>4.00，达灭活效果。另外，二氧化氯杀菌速度快，二氧化氯浓度12.5mg/L的消毒液对大肠杆菌作用1min和作用10min的杀灭率均为99.92%，延长作用时间未能提高杀灭率。这可能与二氧化氯活化时产生的自由基迅速消亡有关。所以在使用过程中，应该做到现用现配。 在研究影响因素对杀菌效果作用的过程中，我们通过正交试验的直观分析法及使用SAS8.0统计软件对结果进行统计分析。最终表明，消毒剂浓度、小牛血清含量及温度对消毒剂的杀菌效果影响均有显著性意义（P<0.0001）。 本课题通过配方筛选、杀菌效果研究、影响因素的分析，研制出了一种一元固体二氧化氯消毒剂，特点是，二氧化氯活化率高、稳定性好、杀菌速度快。是一种使用方便现用现配的新型二氧化氯消毒剂。

关键词： 脊髓灰质炎病毒   感染性克隆   拯救病毒   核定位信号  

摘要： 严重急性呼吸综合症（Severe acute respiratory syndrome，SARS)是2003年出现的新发传染病，其病情重，死亡率高，严重危害人类健康。虽然SARS的病原已确定为SARS相关冠状病毒（SARS-CoV），国内外研究也检测了SARS患者标本中的腺病毒、呼吸道合胞病毒、亨德拉病毒（hendra virus）、尼帕病毒（nipah virus）、流感病毒、人偏肺病毒等其他病原体，但是未曾检测过脊髓灰质炎病毒。我们在研究SARS的过程中发现SARS患者标本中可能有肠道病毒属的脊髓灰质炎病毒疫苗株SabinⅠ存在，为确证这个结果，本研究采用世界卫生组织推荐的分离脊髓灰质炎病毒的方法和人横纹肌肉瘤细胞系（human rhabdomyosarcoma，RD），对取自SARS患者的咽拭子标本进行病毒分离并成功获得病毒，通过中和试验和间接免疫荧光染色证实属于脊髓灰质炎病毒Ⅰ型，随后利用逆转录-聚合酶链反应、cDNA末端快速扩增（RACE）等分子生物学技术分段扩增病毒基因组并测序，从基因水平进一步证实其为脊髓灰质炎病毒SabinⅠ型疫苗类似株。在确定从SARS患者标本中分离获得脊髓灰质炎病毒SabinⅠ型疫苗类似株后，需要从流行病学角度进一步分析其是否在更多患者中存在，因此本研究根据获得的病毒基因组序列设计针对5′-UTR、VP3–VP1和2C-3A区3个部位的引物分别扩增SARS患者标本中提取的RNA，结果显示38.5%(5/13)的唾液标本、37.5%(3/8)的痰标本、71.4%(5/7)的尿液标本、100%(5/5)的咽拭子标本和100%(6/6)的粪便标本中可以扩增出脊髓灰质炎病毒SabinⅠ核酸，证实71.4% (15/21)的SARS患者体内存在脊髓灰质炎病毒SabinⅠ型且480和2795位点出现回复突变，其中扩增阳性患者的死亡率高于扩增阴性患者；研究结果同时显示SARS患者的肠道和肾组织中可以检测到脊髓灰质炎病毒SabinⅠ存在。为防止实验结果的假阳性，研究中设置了严格的对照并重复验证结果，其中对照样本的扩增结果显示取自25个健康人和25例肝炎患者的50份粪便标本仅1份阳性（2%），与患者组相比，其差异具有显著性意义（p﹤0.01）。虽然在患者中没有发现脊髓灰质炎相关症状体征，排除了疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎的可能，但是由于研究组患者均为成年人，其体内脊髓灰质炎病毒SabinⅠ的存在提示在脊髓灰质炎的流行病学监测体系中，除了15岁以下的儿童，还需要加强对成人特别是严重呼吸道感染和免疫功能受损人群的病毒学检测和抗体检测，对血清脊髓灰质炎病毒中和抗体滴度显著下降的人群应该及时加强免疫。尽管标本检测得到了阳性结果，但是由于未能系统收集并检测各种标本，导致结果分析受到限制，对脊髓灰质炎病毒SabinⅠ型疫苗类似株在SARS的发生发展中是否起作用以及有何种作用尚不能确定。 SARS患者体内脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗类似株的首次发现表明需要加强脊髓灰质炎病毒疫苗株尤其是SabinⅠ的实验研究，由于目前广泛应用口服减毒活疫苗，且不断出现疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎，如何降低SabinⅠ基因组的回复突变率以减少疫苗衍生脊髓灰质炎病毒的产生是当务之急。如果能通过改造病毒的基因组使其在不降低免疫效果和安全性的前提下减少回复突变率，将有助于降低疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎的发病率，而研究病毒基因组的功能首先需要构建感染性cDNA克隆拯救病毒。为此，在一次性扩增脊髓灰质炎病毒SabinⅠ基因组全长7441个核苷酸难度较大的情况下，本研究利用SabinⅠ基因组序列中2470位的限制性内切酶NheⅠ识别位点和5601位的限制性内切酶BglⅡ识别位点，通过分别扩增基因组1nt-2497nt、2412nt-5616nt和5588nt-7441nt核苷酸序列并插入克隆载体，然后分步酶切连接的方法成功获得脊髓灰质炎病毒SabinⅠ感染性cDNA克隆。在感染性克隆构建成功后开展了SabinⅠ病毒拯救研究，本文在转录获得病毒RNA的步骤中，没有选择常用但是昂贵、费力的体外转录，而是首次在脊髓灰质炎病毒拯救中利用近年来开始出现的真核表达载体细胞内表达T7RNA聚合酶后转录RNA的技术，结果成功拯救SabinⅠ，从而为进一步研究脊髓灰质炎病毒SabinⅠ的基因功能奠定了基础。核定位信号有助于将蛋白质从细胞胞浆内转运到细胞核内，以往有关包括脊髓灰质炎病毒在内的肠道病毒拯救的研究中，体内拯救时细胞内表达的T7RNA聚合酶都没有涉及核定位信号，为了解核定位信号对病毒拯救效果的影响，本研究在拯救病毒时分别构建了含与不含SV40大T抗原核定位信号PKKKRKV的T7RNA聚合酶真核表达质粒，然后将其分别与脊髓灰质炎病毒SabinⅠ感染性cDNA克隆共转染细胞，

关键词： 肠道病毒71型   脊髓灰质炎病毒   交叉反应性抗体   线性中和表位  

摘要： 近年来,手足口病(HFMD)在我国呈持续性流行态势,而且死亡病例逐年增加。肠道病毒71型(EV71)感染所引起的HFMD患者易导致严重的并发症,如无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样的麻痹等神经系统相关疾病,还可能引起更严重的肺水肿,伴有肺水肿的重症病例病情进展快,死亡率高。目前,EV71致病的分子机制尚不清楚,而且没有针对这种病毒的特异性药物及疫苗。本研究从体液免疫角度探索EV71抗体反应的有关规律,以期为EV71流行病的致病机理、治疗及疫苗研发提供一些理论参考。本项研究有两方面的内容：其一,通过临床血清样本研究及实验动物水平的验证,探讨EV71与脊髓灰质炎病毒(PV)之间的抗体交叉反应性；其二,通过酶联免疫吸附试验ELISA实验及中和抑制实验研究SP70和SP55在EV71感染的人体内能否诱导产生相应的中和抗体。 ELISA检测EV71或PV与健康儿童血清IgG的反应性,研究发现EV71与PV阳性EV71阴性健康儿童血清IgG有很高的反应性(阳性率达77.8%),而且在这些PV阳性EV71阴性儿童血清中针对这两种病毒的IgG在含量上呈正相关(r=0.58)。微量中和试验研究发现,这些PV阳性儿童血清不能中和EV71。EV71与PV阳性但EV71阴性人血清孵育后感染人单核白血病细胞系(THP-1),感染后培养24小时,以实时定量PCR检测进入THP-1的EV71病毒数量,结果发现PV阳性EV71阴性的儿童血清能增强EV71感染进入THP-1细胞。以上结果初步表明,PV疫苗接种能诱导产生与EV71交叉反应性的抗体,虽然这些交叉反应性抗体是非中和抗体,但这些非中和抗体在体外能促进EV71感染THP-1,这表明PV接种产生的与EV71交叉反应性抗体可能与EV71的致病有关,所以本研究可能为EV71致病机制的研究开辟一个可能的新方向。 为了在背景清晰的实验动物水平进一步验证EV71与PV之间的抗体交叉反应性,以原核表达与亲和纯化等方法分别获得EV71和PV的衣壳蛋白VP1及非结构蛋白3C,将PV-VP1、EV71-VP1、EV71灭活疫苗及PV灭活疫苗(IPV)分别经皮下免疫BALB/c小鼠制得免疫血清。蛋白免疫印迹实验显示PV-VP1能与EV71-VP1抗血清反应,反之,EV71-VP1也能与PV-VP1抗血清反应；竞争ELISA试验进一步显示EV71-VP1蛋白能明显抑制PV-VP1与其特异性免疫血清抗体的结合,反之亦然；但微量中和实验揭示PV阳性小鼠血清不能中和EV71。SPF级小鼠实验研究证实EV71与PV之间确实存在大量交叉反应性非中和抗体。 前人以小鼠实验研究发现两个EV71的重要线性中和表位(SP70与SP55)。为了研究这两个表位在人体内的反应性,合成这两个表位,收集EV71感染儿童恢复期血清及未曾感染EV71的健康儿童血清,以ELISA检测SP70或SP55与EV71感染患者恢复期血清IgG的反应性。研究发现,SP70或SP55与EV71感染者血清IgG的反应性和与未曾感染的健康儿童血清IgG的反应性没有差异。EV71阳性儿童血清分别与SP70或SP55预孵育后在体外中和EV71,研究发现这两个肽不能抑制EV71阳性人血清的中和效应。本研究表明,在自然感染时,SP70和SP55在人体内不能诱导产生相应的中和抗体,故SP70和SP55不能用于EV71多肽疫苗的研发。

关键词： 急性弛缓性麻痹   非脊灰肠道病毒   监测  

摘要： 目的了解贵州省急性弛缓性麻痹(AFP)病例非脊灰肠道病毒(NPEV)的感染情况。方法按照WHO规定的方法,对贵州省2004-2005年所有AFP病例的大便标本均采用RD、Hep-2和L20B细胞进行病毒分离鉴定。结果共分离出55株NPEV,其中艾柯(Echo)病毒占45.5%,病毒型别分布广泛,夏秋季为NPEV流行高峰;≤5岁儿童分离率最高。发病60d后随访23.6%的病例仍残留麻痹;55例NPEV阳性的AFP病例中,临床诊断以格林巴利综合征(GBS)13例,创伤性神经炎13例,不明原因瘫痪11例,单神经炎7例所占比例较高;RD细胞对Echo病毒敏感,Hep-2细胞对CoxB病毒敏感。结论 NPEV在贵州省AFP病例中具有较高的感染率,在无脊灰证实以后应加强NPEV感染与AFP病因学的研究。

关键词： POLIO   VACCINATION   IMMUNIZATION of children   POLIOVIRUS  

摘要： The article reports on the discontinuation of oral polio vaccine being contemplated by the World Health Organization (WHO) in 2011. It mentions that WHO considers the possibility of using a different formulation of polio vaccine, but retains that patchy enforcement of immunization programs is to blame for outbreaks. According to Oliver Rosenbauer, spokesperson for WHO's Global Polio Eradication Initiative, 19 outbreaks of circulating vaccine-derived poliovirus (cVDPV) have been reported in 2000.

关键词： 急性弛缓性麻痹   脊髓灰质炎病毒   阳性病例  

摘要： 目的 探讨我省2000～2009年急性弛缓性麻痹（AFP）病例脊髓灰质炎（脊灰）阳性病毒分离情况,了解分析脊灰（PV）病毒阳性分离率与患者年龄、免疫史的关系.方法 选择2000～2009年AFP病例脊灰病毒分离阳性的病例进行分析.结果 从1 192例AFP病例粪便标本检出脊灰疫苗类似株病毒（PV）54例,其中PVⅠ型14例,PV Ⅱ型10例,PV Ⅲ型18例,PV 混合型11例,PV＋非脊灰肠道病毒（NPEV）1例.经国家脊灰实验室鉴定均为疫苗类似株病毒.结论 实验室监测质量在保证AFP病例监测系统的敏感性上有不可替代的作用,脊灰实验室要提高病毒检出的敏感性,为维持无脊灰提供实验室数据.