关键词： Sabin株脊髓灰质炎病毒   SV-1人二倍体细胞   Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗  

摘要： 1894年在美国爆发了有记载以来最大规模的脊髓灰质炎疫情。随后在美国流行的疫情更加速了人们对疾病传播的研究。Thomas Weller和Frederick Robbins在20世纪50年代成功地在活细胞上培养出脊灰病毒。基于他们的研究成果,Jonas Salk在次年成功开发了第一个Salk株脊髓灰质炎灭活疫苗(以下简称IPV)。6年以后Albert Sabin开发了口服脊灰减毒活疫苗(以下简称OPV),因其价格低廉,更迅速的入选许多国家的计划免疫。中国从1970年将OPV纳入计划免疫,2000年包括中国在内的西太平洋地区被世界卫生组织(以下简称WHO)证实为无脊灰地区。但是因为OPV的接种引起脊灰疫苗衍生病毒株(以下简称cVDPVs)进而产生脊灰疫苗相关病例(以下简称VAPP),始终威胁人类的健康,有些甚至成为影响公众健康、社会稳定的问题。此外,在我国周边接壤的阿富汗和巴基斯坦还存在野病毒的流行情况。极易发生脊灰病毒输入性病例,例如在2011年我国新疆地区发生了脊灰病毒输入性病例。如果不彻底根除,这种状况将迅速改变,因为脊灰是极易流行的疾病。由此,2012年5月26日,世界卫生大会宣布,消灭脊髓灰质炎是一项对全球公共卫生来说需要计划进行的紧急事项。世界卫生大会呼吁WHO进一步制定和完成一个综合性的消灭脊灰最后阶段战略。制定消灭脊灰和最后阶段战略计划(2013～2018)的目的是彻底消灭脊灰这一疾病。该计划同时追求两个平行目标：消灭脊灰野病毒和消灭cVDPVs,而我国作为WHO的一员,有责任也有义务为中国乃至全人类的公共卫生健康事业做出贡献。可是,目前在我国除了口服的OPV疫苗外,仅有昆明生物制品研究所2014年底上市销售的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(以下简称sIPV),培养基质为非洲绿猴肾(以下简称VERO)细胞。完全不能满足市场的需求。本课题将对人体危害风险低的人胚肺二倍体(以下简称SV-1)细胞作为培养基质,通过在SV-1细胞上接种Sabin株脊髓灰质炎三型病毒,扩增,待细胞病变后收获细胞上清液,经过滤澄清、超滤浓缩、超离脱糖、灭活,获得三型Sabin株脊灰病毒单价原液,再经过三型脊灰病毒单价原液的合理科学配比,最终获得sIPV疫苗。试验结果表明,三型脊灰病毒接种MOI为0.01-0.1,培养液为含有0.5%新生牛血清的199培养基,培养至出现75%～100%细胞病变时收获,收获液的抗原含量高,且产量稳定。收获液经四级滤器澄清过滤,300kDa膜包进行两级超滤浓缩,每级浓缩倍数5～10倍,再将超滤浓缩液经蔗糖密度梯度离心,离心参数选择蔗糖1浓度为30%,蔗糖2浓度为55%,离心转速为30000 rpm,离心10小时后收集Sabin株脊髓灰质炎病毒所在区带。结果显示,3个型的平均蛋白质去除率均大于99%,平均D-抗原回收率均大于98.5%。灭活工艺实验结果表明,甲醛终浓度为90μg/m和60 μg/ml均能在80小时内将sIPV (SV-1) Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型病毒完全灭活,甲醛终浓度为90μg/ml的灭活时间少于终浓度为60μg/ml,并确定灭活工艺为：灭活剂甲醛的终浓度为90 μg/ml,37±1.0℃条件下灭活6天,经0.2 μm过滤后继续灭活6天,共灭活12天。Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ型三价疫苗配比工艺和免疫原性研究的试验结果表明以含甘氨酸的M199溶液作为保护剂,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三价单价原液剂量分别选择30/40/30DU/0.5 ml进行动物试验,Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型的中和抗体半数阳转稀释倍数分别为3.8/3.3/3.4,满足中和抗体半数阳转稀释倍数为3-9倍的剂量要求,按照确定的免疫剂量进行Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(SV-1人二倍体细胞)长期免疫原性研究,结果表明3针基础免疫明显优于1或2针,且中和抗体水平在84天仍维持较高水平,并具有免疫保护效果。Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(SV-1人二倍体细胞)经临床前研究表明生产工艺可行,稳定；疫苗纯度高,安全有效,并适宜规模化生产。

关键词： 口服脊髓灰质炎减毒活疫苗   疫苗相关病例   流行特征  

摘要： 目的了解河南省疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎（Vaccine-Associated Paralytic Poliomyelitis,VAPP）病例发生情况,为其防控策略制定提供科学依据。方法对河南省2004-2013年的VAPP病例进行描述性分析。结果河南省2004-2013年共发生VAPP病例19例,VAPP发生率为0.14/100万,首剂服苗VAPP发生率为0.93/100万。VAPP病例男女性别比为8.5∶1,2;月龄儿童占73.68%。73.68%的病例为首次服苗,服苗至麻痹平均时间间隔为23 d,随访均有残留麻痹。病例便标本病毒分型以Ⅱ型为主。结论 VAPP病例以低月龄、首次服苗儿童为主。应加强接种前预检工作,严格掌握禁忌症。同时适时调整脊灰疫苗免疫策略,减少或避免VAPP的发生。

关键词： ADARs   APOBECs   circulating type 1 vaccine   mutation   polio virus  

摘要： Poliovirus, the causative agent of poliomyelitis, is a human enterovirus and member of the Picornaviridae family. An effective live-attenuated poliovirus vaccine strain (Sabin 1) has been developed and has protected humans from polio. However, a few cases of vaccine virulence reversion have been documented in several countries. For instance, circulating type 1 vaccine-derived poliovirus is a highly pathogenic poliovirus that evolved from an avirulent strain, but the mechanism by which vaccine strains undergo reversion remains unclear. In this study, vaccine strains exhibited A to G/ U to C and G to A/C to U hypermutations in the reversed evolution of Sabin 1. Furthermore, the mutation ratios of U to C and C to U were higher than those of other mutation types. Dinucleotide editing context was then analyzed. Results showed that A to G and U to C mutations exhibited preferences similar to adenosine deaminases acting on RNA (ADAR). Hence, ADARs may participate in poliovirus vaccine evolution.

关键词： 口服脊髓灰质炎   吸附无细胞百白破   特发性血小板减少性紫癜  

摘要： 目的 "特发性血小板减少性紫癜"发生与疫苗接种间是否相关。方法选取2011年10月27日上午到社区卫生服务中心接种满3个月疫苗"特发性血小板减少性紫癜"患儿一例,异常反应诊断小组和专家通过分析患儿身体、疫苗接种等情况,研究"特发性血小板减少性紫癜"发生的原因。结果异常反应诊断小组和专家的意见相同,认为"特发性血小板减少性紫癜"发生与疫苗接种有关。结论 "特发性血小板减少性紫癜"发生与接种吸附无细胞百白破有关。

关键词： 脊髓灰质炎   应急强化免疫   疫苗接种  

摘要： 目的分析2011年9月至2012年4月于田县0至14岁儿童五轮、15至39岁人群四轮脊髓灰质炎疫苗应急强化免疫的效果。方法按照《新疆维吾尔自治区脊髓灰质炎疫情应急强化免疫活动实施方案》和《新疆维吾尔自治区脊髓灰质炎应急强化免疫活动督导方案》要求开展工作,通过常规免疫接种率调查、应急强化免疫接种快速评估,AFP主动监测和相关病例主动搜索进行分析。结果常规免疫调查每个乡抽查60名儿童,县城30名,全县脊髓灰质炎应急强化免疫活动每轮次90人,五轮次共计抽查儿童450人,常规免疫全程接种率85.62%,建卡率为96.30%;0至14岁儿童五轮接种总人数328498人次,15至39岁人群四轮强化免疫总接种成人403659人次;通过国家、自治区、地区专家快速评估儿童接种率为99.78%,成人接种率99.72%;AFP通过查看医疗机构门诊日志、出入院登记本、日常监测、主动搜索未发现AFP病例及漏报。结论通过儿童五轮次、成人四轮次脊髓灰质炎疫苗应急强化免疫活动,提高了于田县易感人群的免疫水平,形成了有效的免疫屏障,为严防脊髓灰质炎传人于田县打下了坚实基础。

关键词： 发热出疹性疾病   麻疹   肠道病毒   柯萨奇病毒   脊髓灰质炎病毒  

摘要： 麻疹（measles）是由麻疹病毒引起的最常见的急性呼吸道传染病之一，其传染性很强，感染常见于婴幼儿及儿童，以发热、全身或局部皮丘疹及呼吸道症状为主要的临床症状，容易并发细菌性感染，如继发性支气管炎、中耳炎、肺炎、心肌炎、包涵体脑炎等，幼儿感染麻疹病毒后尤其要警惕细菌性肺炎，是患儿因严重并发症而死亡的主要原因。在麻疹的临床诊断方面还存在一些问题：一方面，麻疹的前驱症状是非特异性的，临床表现类似于上呼吸道感染症状，发热，出疹有可能是其他常见病毒引起。另一方面，由于麻疹减毒活疫苗及灭活疫苗的广泛应用，部分患者感染麻疹后并不会出现典型的皮疹和黏膜斑，甚至整个病程中无皮疹出现，而或仅表现为高热、头痛、肌痛等流行性感冒症状。因此，为提高对麻疹的诊断避免对麻疹患者的误诊，对麻疹感染的实验室确诊是至关重要的。 人类肠道病毒（HEV）是在肠道中增殖，但引起多种肠道外感染性疾病的病原体，隐性感染多见。由于肠道病毒型别众多，病毒感染的临床表现也呈现复杂多样化，一旦发病可能引起多种临床症状，如发热、皮疹、心肌心包炎、无菌性脑膜炎、脑炎、急性迟缓性麻痹等。肠道病毒复杂的发病表现为临床诊断带来了一定的困扰。随着近年来RT-PCR及real-time PCR等分子生物学技术的广泛应用，不但对肠道病毒的检出水平提高，对肠道病毒的分型诊断也取得了很大的进展。肠道病毒在儿童手足口病、呼吸道感染性疾病、腹泻性疾病及中枢神经系统感染中均被关注研究，对健康人群中肠道病毒的感染状况的监测调查也受到更多的重视。 本实验室对2013年及2014年收集的发热、出疹病例76株咽拭子进行实验室分离与鉴定。最终鉴定麻疹病毒20株，但在分离麻疹病毒的同时发现存在肠道病毒的感染，76例标本中检测含肠道病毒57例，肠道病毒分离率为75％。在肠道病毒阳性标本中，5例具有强细胞病变效应的标本经鉴定并验证均为柯萨奇B3病毒，初步鉴定2株脊髓灰质炎疫苗病毒株，未检测出EV71及CVA16。总之，本次实验分离出的同属发热伴出疹性疾病的肠道病毒为研究麻疹与肠道病毒的共感染性及其麻疹的临床鉴别诊断和治疗提供必要的依据，对在人群中肠道病毒感染状况的探索具有一定的参考价值。

关键词： ANTIGENS   CELL culture   CELL lines   CELL receptors   CELLS   DYNAMICS   ENZYME-linked immunosorbent assay   FLOW cytometry   HEMATOPOIETIC growth factors   IMMUNOGLOBULINS   POLIO   POLIOMYELITIS vaccine   VIRAL physiology   VIRAL load  

摘要： Viral vaccines can be produced in adherent or in suspension cells. The objective of this work was to screen human suspension cell lines for the capacity to support viral replication. As the first step, it was investigated whether poliovirus can replicate in such cell lines. Sabin poliovirus type 1 was serially passaged on five human cell lines, HL60, K562, KG1, THP- 1, and U937. Sabin type 1 was capable of efficiently replicating in three cell lines (K562, KG1, and U937), yielding high viral titers after replication. Expression of CD155, the poliovirus receptor, did not explain susceptibility to replication, since all cell lines expressed CD155. Furthermore, we showed that passaged virus replicatedmore efficiently than parental virus in KG1 cells, yielding higher virus titers in the supernatant early after infection. Infection of cell lines at an MOI of 0.01 resulted in high viral titers in the supernatant at day 4. Infection of K562 with passaged Sabin type 1 in a bioreactor system yielded high viral titers in the supernatant. Altogether, these data suggest that K562, KG1, and U937 cell lines are useful for propagation of poliovirus.

摘要： Background. Although rare, adverse events may associate with anti-poliovirus vaccination thus possibly hampering global polio eradication worldwide. Objective. To design peptide-based anti-polio vaccines exempt from potential cross-reactivity risks and possibly able to reduce rare potential adverse events such as the postvaccine paralytic poliomyelitis due to the tendency of the poliovirus genome to mutate. Methods. Proteins from poliovirus type 1, strain Mahoney, were analyzed for amino acid sequence identity to the human proteome at the pentapeptide level, searching for sequences that (1) have zero percent of identity to human proteins, (2) are potentially endowed with an immunologic potential, and (3) are highly conserved among poliovirus strains. Results. Sequence analyses produced a set of consensus epitopic peptides potentially able to generate specific anti-polio immune responses exempt from cross-reactivity with the human host. Conclusion. Peptide sequences unique to poliovirus proteins and conserved among polio strains might help formulate a specific and universal anti-polio vaccine able to react with multiple viral strains and exempt from the burden of possible cross-reactions with human proteins. As an additional advantage, using a peptide-based vaccine instead of current anti-polio DNA vaccines would eliminate the rare post-polio poliomyelitis cases and other disabling symptoms that may appear following vaccination.

关键词： 脊髓灰质炎病毒   强化免疫  

摘要： 12月15日是"世界强化免疫日"。世界强化免疫日是1988年第41届世界卫生组织大会确定并实行的。世界强化免疫日主要是为消灭脊髓灰质炎而设立的。这主要是因为人是脊髓灰质炎病毒的唯一感染者,强化免疫是消灭脊髓灰质炎的重要措施。其目的是通过免疫高危险年龄组0-4岁的每个儿童,尽可能快地阻断脊髓灰质炎地方性流行。

关键词： 急性驰缓性麻痹   脊髓灰质炎疫苗病毒   疫苗衍生脊灰病毒  

摘要： 目的分析脊髓灰质炎(脊灰)病毒(PV)的急性驰缓性麻痹(AFP)病例流行病学特征,为维持无脊髓灰质炎状态提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法对玉林市2000-2013年检出的PV阳性AFP病例进行流行病学分析。结果玉林市2000-2013年共检测了451例急性驰缓性麻痹病例的粪便标本,检出PV13株,检出率2.88%,型内特征鉴定有1株为疫苗变异PV,经VP1基因核苷酸序列测定达到VDPV的分类标准。分离到的PV以Ⅱ型为主,AFP病例散在发生,无聚集性。未全程免疫儿童>全程免疫儿童,年龄以≤1岁儿童为主(92.31%)。服苗1月内出现麻痹占46.15%(6/13),麻痹伴发热占61.54%,60 d后随访仍残留麻痹病例高达23.08%,以Ⅱ型疫苗株为主。结论玉林市2000-2013年未发现由脊灰野病毒引起的病例。在无脊灰证实阶段,存在着疫苗衍生病毒(VDPV)和发生VDPV循环(c VDPVs)的可能,保持AFP病例监测的敏感性,加强对脊灰疫苗衍生病毒的监测及研究,具有重要的现实意义。